Способ распознавания генотипов самоопыленных линий кукурузы

(53) 4 А 01 Н 1/06 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ Я ВТОРСНОМУ ВУ едовательс .В.Р,Вильнс тво СССР 1985.ГЕНОТИПОВЗЫ ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЙ(71) Казахский научно-исслкий институт земледелия имямса(54) СПОСОБ РАСПОЗНАВАНИЯСОМООПЫЛЕ ННЫХ ЛИНИЙ КУКУРУ(57) Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к селекции и семеноводству, Целью изобретения является повыщение точности . способа. Распознавание генотипов самоопыленных линий кукурузы проводится изоэлектрофокусированием запасных белков, извлеченных спиртовым раствором мочевины из эндосперма, определением изоэлектрических точек белковых компонентов, группированием их по субфракциям и составлением белковых фор,мул. 1 табл,Изобретение относится к сельскомухозяйству, а именна к селекции и семеноводству, и может быть использовано научными учреждениями при создании и паспортизации самоопыленных линий кукурузы,Целью изобретения является повышение точности способа.Способ заключается в том, что ин-. 10 дивидуальная зкстракция белков изэносперма индивидуальных зерен прово ится на 2-3 зернах спиртовым раствором мочевины, изоэлектрофокусирование елков осуществляется в полиакрилмидном геле, содержащем 6 моль мочеины и 2% амфолитов-носителей рН 4-9, то позволяет разделить белки на 3 убфракции: М ,с последующим опеделением иэоэлектрических точек ком.О онентов по белкам-маркерам и составением стабильных характеристик Форул для каждой самоопыленной линии.Способ осуществляется следующим бразом. 2.Испольэовали различные самоопылене линии кукурузы: Грушевская 380Г, ВИР 133 ТС, Н 0-14, НО, Н 0-139,елок из трех индивидуальных эндо пермов зерна кукурузы выделяют поедующей методике: растерный эндопери заливают 10-кратным количеством,0%-ного этанола с 2 моль мочевины Й выдерживают 30 мин при комнатной температуре, а затем 60 мин при 60 С,Раствор белка (объем 0,025 мл) наосят на 57-ный полиакриламидный плас-. линчатый гель, содержащий б моль мочевны и 2% амфолитов-носителей рН 4-9, размером 100 х 200 х 0,5 ьж. Католитом спужит 0,5 М раствор едкого калия, айолитом - 0,5 М раствор фосфорной кислоты. Яа параллельную дорожку наносят смесь белков-маркеров с иэвест 45 иими изоэлектрическими точками (амилоглюкозидаза 3,5; Ферритин 4,4; бычий сывороточный альбумнн 4,7; лактоглобулин 5,34;,кональбумин 5,9; миоглобин лошади 7,3; миоглобин кита 8,3; рыбонуклеаза 9,45; цитохром 10,65).Режим иэоэлектрофокусирования; 1 мин - 400 В; 15 мин - 800 В; 2 ч 100 В, После окончания изоэлектрофокусирования гель фиксируют .,2,57-ным55 раствором трихлоруксусной кислоты с 37, сульфосалициловой кислоты, промывают 12,57-ным раствором трихлоруксусной кислоты и окрашивают 0,0017.-нымраствором кумасси К, приготовленном на 12,57.-ной трихлоруксуснойкислоте. Отмывку избыточного краси"теля производят 107.-ным растворомэтанола в 57.-ной уксусной кислоте.Для определения нзоэлектрическихточек разделенных белковых компонентов строят калибровочную кривую: осьпо горизонтали размечают в мм, а навертикальную ось наносят значенияизоэлектрических точек. Измеряют рас-,стояние (мм), от катодного края гелядо каждого из маркерных белков и поэтим значениям строят кривую. Дляопределения изоэлектрической точкибелкового компонента измеряют расстояние до него от катодного края геляи по калибровочному графику находятеГо изоэлектрическую точку.Иэоэлектрофокусировочные спектры(ИЭФ-спектры) белков самоопыленныхлиний кукурузы состоят из 3 четко вьграженныхгрупп (субфракций) компонентов: К, ,.а "Субфракция представлена 11-16 компонентами слабойинтенсивности,-субфракция состоитиз 11-15 мощных по интенсивности компонентов, на долю которых приходится80-907, всех белков,-субфракция,наиболее бедная по числу компонен"тов (0-4) слабой интенсивности. с 6 и-субфракции компонентов по характерулокализации их подразделяются на тричасти: оС, рН 4,00-4,80; оЕ рН 4,81"6,09; х рН 6,10-6,6; Ь, рН 6,777,20; (3 рН 7,21-7,53; 5 рН 7,568,3,-Субфракция включает компонентыс изоэлектрическимн точками в пределах 8,4-9,00, На основании ИЭФ-спектров составляются белковые формулысамоопыленных линий кукурузы, которые приведены в таблице.Белковая 1 Формула специфично характеризует каждую самоопыленную линию,на ее основе паспортные цифровые данные линии можно хранить в памяти ЭВИи использовать по мере надобности селекционерами и семеноводами в своей работе,Использование предложенного способа распознавания гепотипов самоопьг.ленных линий кукурузы позволяет наминимальном числе зерен (2-3 вместо10) определять ИЭФ-спектры зеиновыхи сопутствующих им запасных белковэндосперма, лишенных вариабельных4,30; 4,40;4,60 4,70; 4,30; 4,40;4 Ь 01 4,701 4,75; 4,80 4401 4554,751 4,80 4,30 4,40;4,60 4,55; 4,40 4,55;4,80 4,4014,80 5,00; 5,25;5,35; 5,50;570 4,95; 5,00: 5,25; 5,35;5,50; 5,70 495; 5,255,35; 5,50;5,70 4,95;5,25;5,50;5,93 5,005,355,70; 4,95; 5,25;5351 550;5,93 4,954 5,255351 593 6,10; 6,20;6,35 6,45 6,10; 6,35;6,45 6,10 б 20 6,50 6,65 63 Б 351 6,13; 6,35;650 665 63 е 6356,50; 6,65 6,77; 6,80;7,031 7,10 715 6,71; 6,801,00; 1,03;7,10 7,15 6,17; 6,80;7,03; 7 10;7,5 6,801 70017,03 7,10;1, 15 6,80;7,00;7,10; 6,77 680;7,00; 7,03;7 10; 7, 15 6,77;6,90;7,03;7,15 7,33; 7,401 7,50; 7,55 7,33; 7,40;7,50 7,55 733; 7,40;7501 7,55 7,33 7,407,50,7,40;У 55 1 33 1 407,50 7, 33;7 о 1 7751 185 8,05; 8,13 7,751 7,80;8,05 7,75; 7,80;7;85 7,751 7,80;7,85; 8.05 7,75 7,8518,05 1,65 7,75;8,05 8,30; 8,558,65; 8,90 8,30; 8,55;865 8,90 8,30; 8,55;865; 8,90 8,30 Составитель ВДемкинРедактор Т.Лаэоренко Техред МДидык Корректор В.Романенко. Тираж 661 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 475 Заказ 4455/4 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгороде ул. Проектная, 4)423070компонентов от зерна к зерну, и тем ния точности способа, разделение белсамым стабилиэирова 3 ь паспортизацию кон ведут иэозлектрофокусировайнем в самоопыленных линий кукурузы. полиакриламидном геле в диапазоне рН ф о р м у л а и э о б р е т е н и я 4-9 с последующим определением изо 5электрических точек компонентов, сСпособ распознавания генотипов са- использованием маркерных белков с измоопыленных линий кукурузы, включаю- вестными изоэлектрическими точками, щий извлечение спиртовой мочевиной зе- группированием компонентов в соответина и сопутствующих ему запасных бел- о ствии с ихлокализацией и интенсивно ков эндосперма зерна, о т л и ч а ю- стью и составлением специфических щ и й с я тем, что, с целью повыше- белковых формул.1