Питательная среда для выявления вирулентных и авирулентных клеток в популяции чумного микроба

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 938 9)8 5114 С 12 Я/ ЕТЕН АНИЕ ИЗ фсгоцЦ н, ТГ. по1 т ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬ(71) Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибирии Дальнего Востока(56) Н 5.БцсМ К ЯппСЬ С.Ь. Б 1 цйхев оп ФЬе пцгЫоп апй рЬУЫо 1 оцуо 1 Раа 1. реаЫз. 71. А сц.1"1"егепИа 3.р 1 а 1 Ипд шеМцтю Гог ТЬе езМзпаС 1 опог Т,Ье шцСаМоп где т,о аугц 3.епсе. -7Вас 1 его 1,1961, 81, 4, р,605-608(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЬИВЛЕНИЯВИРУЛЕНТНЫХ И АВИРУЛЕНТНЫХ КЛЕТОК ВПОПУЛЯЦИИ ЧУМНОГО МИКРОБА(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при дифференциации вирулентных и;авирулентных культур чумного микробаЦель изобретения - упрощение среды с сохранением ее дифференцирующих и ростовых свойств. Среда включает следующие компоненты, г/л: агар 6,0- 8,0; гидролизат казеина 11,0-13,0; глюкоза 1,0-2,0; лимоннокислый натрий 9;9-1,1; Фосфорнокислый двузамещенный натрий 7,0-8,0; Фосфорнокислый однозамещенный калий 2,3-2,7; пиросернистокислый натрий 0,4-0,7; хлористый магний 3,5-4,5; кристаллический Фиолетовый 0,0015-0,0035. Навеску среды растворяют вл дистиллированной воды, нагревают до раство-. рения компонентов, кипятят и разлива- а ют в стерильные чашки Петри. Среда более стандартна, не требует добавления крови, обеспечивает хорошие ростовые и дифференцирующие свойства С тесту потребления ионов кальция. абл, 1393849Изобретение относится к медицинской микробиологии и может бьть использовано при диФФеренциации вирулентных иавирулентных культур чумного микроба.Цель изобретения - упрощение средь.с сохранением ее диФФеренцирующихи ростовых своиствП р и м е р 1, Для приготозления1 л среды смешивают сухие компоненты 111г/л: агар (порошок) 6,0; гидролизатказеина 11,0; глюкоза 1,0;,пимоннокислый натрий 0,9 ФосФорнокислыйдвузамещенный натрий 7,0; ФосФорнокислый однозамещенный калий 2,3; пиросернистокислый натрий 0,4; хлористыймагний 3,5; кристаллический Фиолето-выи Ор 00150Навеску среды растворяют в 1 лстерильной дистиллированной воды, 20тщательно размешивают, нагревают намедленном огне до полного расплавления, кипятят в течение 2-3 мин,разливают в стерильные Флаконы, охлаждают до 45-50 С. Готовую среду ряэли 25вают в стерильные чашки Петри.П р и м е р 2. Для приготовления1 л диФФеренциальной среды смешиваютсухие компоненты, г/л; агар (порошок)7,0; гидролизат кязеиня 12,0; глюкоза 1,5;,лимоннокислый натрий 1,.0",ФосФорнокислый двуэамещенный натрий7,5," ФосФорнокислый одноэамещенныйкалий 2,5; пиросернистокислый натрий0,55; хлористый магний 4,0; кристаллический Фиолетовый - 0,0025.Далее среду готозят в соответствии с примером 1.П р и м е р 3. Для приготовления1 л среды смешивают сухие компоненты, 10г/л: агар (порошок) 8,0; гидролиэяткаэеина 13,0; глюко.за 2,0; лимоннокислый натрий 1,1; ФосФорнокислыйдвуэамещенный натрий 8,0; ФосФорнокислый одноэамещенный калий 2,7; лиро-;15сернистокислый натрий 0,7; хлористьймагний 4,5; кристаллический Фиолетовый 0,0035.Полученные нявески растворяют з1 л стерильной дистиллировяйной во 50ды, тщательно размешивают, нагреваютна медленном огне до полного расплавления, кипятят в течение 2-3 мин,Ня две шашки с приготовленной средой и две с питательным ягяром3рН 7,2, который служит контролем,засевают односуточную ягяровую культурувозбудителя чумы в дозе 200 микробов,Колонии первго порядка подсчитыва ют через 42-48 ч инкубапии при 37 С, колонии второго порядка - через 20- 24 ч дополнительной инкубации при той же температуре и колонии третьего порядка через 42-48 ч дополнительнойо цинкубяции при 28 С. При 37 С культивирования вырастают колонии из авирулентных клеток, т.е. кальцийнезависи" мые, при 28 С - вирулентные клетки, зависимые от ионов кальция.При изучении клеточного состава различных штаммов по потребности в ионах кальция на приготовленных по примерам 1-3 средах вырастает почти одинаковое количество колоний. Коле бания в числе колоний, вырастающих на этих вариантах среды, существенно не различаются, Р " 0,01 во всех случаях (таблица).Результаты определения клеточногосостава штаммов чумного микроба попотребности в ионах кальция приведеныв таблице,Из таблицы видно, что в популяциивысоковирулентных культур (И,2638/11582, И) содержится большее число кальцийзависимых клеток,т,е колоний третьего порядка. У субкультур (2638/11317, 3160/207, 3160//217) параллельно снизились количество колоний третьего порядка и вирулентность этих культур для лабораторных животных. Культуры (2638//11 581, 2638/1131 6, И), состоящие только иэ кальцийнезависимыхклеток (колоний 1, 11 порядка), авирулентны для белых мышей.Использование изобретения позволяет изучить клеточный состав популяций различных штаммов чумного микроба по потребности в ионах кальция сбольшей достоверностью, так кнк питательная среда более стандартна посоставу, не требует добавления крови.Кроме того, среду готовят из отечественных ингредиентов, что удешевляетспособ,Формула изобретенияПитательная среда для выявления вирулентных и авирулентных клеток в популяции чумного микроба, содержащая питательную основу, источник углерода, минеральные соли, агар и дистиллированную воду, о т л и ч а1393849 ю щ а я с я тем, что, с целью упро- Лимоннокислыйщения среды с сохранением ее диффе- натрийренцирующих и ростовых свойств, она Хлористый магнийдополнительно содержит кристалли 5 фо сфо рнокислыйческий фиолетовый, в качестве пита- двузамещенныйтельной основы она содержит гидро" натрийлизат казеина, в качестве источника фосйорнокислыйуглерода - глюкозу и лимоннокислый однозамещенныйнатрий, в качестве минеральных солей калийхлористый магний, осорнокислый Пиросерннстокислыйдвузамещенный натрий, Аосфорнокислый натрийоднозамещенный калий и пиросернисто- Агаркислый натрий при следующем количест- Кристаллическийвенком соотношении компонентов, г/л 1 15 ФиолетовыйГидролизат казеина 11,0-13,0Глюкоза 1,0-2 а 0 . Дистиллированная вода 0,9-1,1 3,5-4,5 7,0-8,0 2,3-2,7 0,4-0,7 6,0-8,0 0,0015-0,0035е1 л. Число выросннх колоний Степень ЛДдлябалыкьеаей Нестоыделеяия Номер втаммачумяого микроб вирулент"ности редлагаемая среда, содерващая количество компонентовреда Хи- учи-Смит втамма имальное среднее нимальное Са Са Са робиылклеткал 2638 167 2 16 А Э ысокавн" улентный увинскрирднйочаг 18 17 Э ЭА107 100117 39 50 то е 638/11582 638/11317 28 15 Вирулеитный 15 Ааиру"леитный 8 - 141 и15 Авирулеитиьп 1 2638/158 2638/11316 - и 75 1 179 771 - 17 Ь и 68 Горно-Алтай" ский природный очаг И 237 Высоко 81 8 9 12 Ито ив вирулеиый 121 63,1Вирулент.в 10 иый 9 137 41 3 45 1 Э 5 О/207 0 99 ВЭ б 84 абовн"пант" ь и и а ч а и и е, Яальдийнеаввисимые (С) - авирулентные клетки; хальднйаависнмые 1 Са ) - .внрулентные клетки, В 502 случаяк на среде Янгучи"Смита отмечалн р стороние НИИПИ Заказ 1941 27 . Тираж 520 Подписное Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная,