Питательная среда для получения спор сибиреязвенного микроба

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРеспУБлик 176863 Ц 5 С 12 М 1/ НИ ляетдляробаспор АминопептидФерментативныйкормовых дрожжМаннитНатрий хлористыАгарНатрия гДистилли дролиэат 1-1,54-65-171-0,1 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Уеаб ЯТопе . Р., РЫв Р. Явре СцТцгееебцп аког Вгт. 9. Ехрег. рай., 1940, 21, р,161-173,(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕИЯ СПОР СИБИРЕЯЗВЕННОГО МИКРО- А Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и касается сред для выращивания спор микроорганизмов из рода Васцз апйгасв,Известна питательная среда Гладстона- Филдса, содержащая: казеиновый триптический перевар, водный экстракт дрожжей, сернокислое железо, сернокислую лагнезию, сернокислый марганец, сернокислый натрий, хлористый кальций, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, агар и дистиллированную воду. Среда Гладстона- Филдса предназначена для получения стол. бнячного токсина, которая в течение многих лет используется для выращивания спор Васцз апйгасв.Однако данная среда имеет недостаток; она не обеспечивает необходимый уровень спорообразования (0,4 млрд спор с 1 мл среды),57) Применение: микробиология, среда для выращивания спор. Сущность лэобретения; питательная среда содержит в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролиэат кормовых дрожжей, а также маннит, хлористый натрий, гидро- окись натрия, агар и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л: аминопептид 3-4, ферментативный гидролизат кормовых дрожжей 4-6, маннит 1-1,5, натрий хлористый 4-6, агар 15-17, натрия гидроокись 0,1.0,15, дистиллированная вода - остальное. Среда обеспечивает высокий уровень спорообразования сибиреязвенного микроба /0,6-0,7 млрд спор/мл/и удобна в использовании.1 табл. Целью предлагаемого изобретения яося разработка сухой питательной среды получения спор сибиреяэоенного мик, обеспечивающей высокий уровень ообраэования ВасПцв эптЬгасв, Для этого используют в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, иэ источников углевода-магнит, а иэ минеральных веществ натрия гидроокись при следующем количественноМ соотношении, г/л: идроокись О, рованная вода до литраСухую питательную среду готовят следующим образом из расчета на 1 л дистиллированной води:В а р и а н т 1, В шаровой мельнице перемешивают сухие компоненты, г/л: ами нопептид - 3, ГКД - 4, маннит - 1, агар - 15, натрий хлористый - 4, натрия гидроокись - 0,1В а р и а н т 2. В шаровой мельнице перемешивают сухие компоненты, гlл, ами нопептид,5, ГКД - 5, маннит,25, агар - 16, натрий хлористый - 5, натрия гидро- окись - 0,1.В а р и а н т 3. Вшаровой мельнице перемешивают сухие компоненты, г/л: ами нопептид - 4, гидролиэат кормовых дрожжей - 6, маннит - 1,5, агар - 17, натрия гидроокись - 0,15, натрий хлористый - 6,Среду испол ьзуют следующим образом: 3085 г сухой питательной среды(вариант 2) 20 разводят в 1 литре дистиллированной воды, автоклавируют, разливают в матрацы по 0,5 л и вновь автоклавируют,Лредварительно перед посевом на матрац производят высев культуры петлей по 5 мл на бульон Хоттин гера и инкубируют при 37 С в течение 18-24 ч. При наличии образования роста колоний содержимое пробирки (5 мл) высеваат на плотную среду в матрице и покачиванием равномерно распределяют культуру по по верхности. Затем выдерживают в течение 3-х часов при комнатной температуре до впитывания жидкости в плотную среду. По истечении времени матрац помещают в термостат при 37 С, выдерживают 6-10 суток и 35 периодически в течение этого времени производят контроль на образование спор. При наличии округлой (гарохообразной) формы процесс образования спор считают завершенным. Смыв спор осуществляют следую щим образом. Для этого в матрац вносят 50 мл дистиллированной воды и оставляют на1-1,5;4-6;0,1-0,15;15-17до 1 л 15-20 мин, После чего шпателем снимают с поверхности среды биомассу и определяют концентрацию спор чашечнцм методом или в камере Горяева. При этом получают 0,76 млрд спор сибиреяэвенного микроба с 1 мл среды.Далее полученную споровую бакмассу используют для получения водорастворимых антигенов споровых форм сибиреязвенного токсина известным способом,Сравнительную оценку эффективности предложенной среды проводят с контрольной средой Гладстона-филдсаРезультаты спорообраэования В. апйгасз приведены в таблице.Предлагаемая среда обеспечивает высокий уровень спорообраэования ВасПоз апйгасз (0,6-0,7 млрд спор с 1 мл среды), удобна в использовании.Ф о р мул а и зо бр ете ни я Питательная среда для получения спор сибйреязвенного микроба, содержащая питательную основу, источник углевода, минеральные вещества, агар и дистиллированную воду, о т л и ч а ю щ а яс я тем, что, с целью повышения спорообразования, она содержит в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, из источников углевода - маннит, а иэ минеральных веществ - хлористый натрий,гидроокись натрия, при следующем количественном соотношении,г/л:аминопептид 3-4, ферментативный гидролиэаткормовых дрожжейманнитхлористый натрийгидроокись натрияагардистиллированная вода