Способ определения кетонов в биологическом материале

(51 1 И 33/48, 3 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ЕТЕНИЯ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 4070168/28-1404,06.8615.04.88. Бюл. В 14Московский научно-исслединститут гигиены им. ф.ф тилкето ышенииДля этог риала вательЗрис-, Т,В. Юдина и Л 612. 015 (088 8) Методические у и определении иале методом г тографии. МЗ С ние лечебно-ме 04,12.78, с. 4 А ошпаков обнару трупно ания ацетона в зожидкост СР, Главк одической е уппомощи(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЕ В ВБИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ(57) Изобретение относится к гигиенетруда и промышленно-санитарной химии,касается определения органических веществ класса кетонов в биологическомматериале. Цель изобретения - дополнительное определение в пробах циклоТОНО(22) (46) (71) ский мана (72) (53) (56) женин матер хрома равл ИСАНИЕ И гексанона (ЦГ) и метилизо (МБК) при одновременном п чувствительности способа. образцы биологического ма(О, 1 мп сыворотки, 2 мп мочи, гомогенаты 1 г органов или 0,1 г кожи)термостатируют в герметичной емкостипри 98 + 4 С в течение 30 мин. Полученную паровую фазу хроматографируютс плазменно-ионизационным детектированием при использовании фазы хроматона М-АИ с 157 апиезона 1, при темпеоратуре испарителя 190-210 С, скорости водорода 25-30 мп/мин, воздуха250/300 мл/мин с последующим количественным анализом кетонов методом абсолютной градуировки. МБК и ЦГ являются исходными продуктами синтеза,обладают способностью накапливатьсяв крови и оказывать выраженное наркотическое и раздражающее действие наорганизм, требуя гигиенического нормирования, 1 табл,Изобретение относится к гигиене труда и промышленно -санитарной химии, а именно к методическим аспектам определения органических веществ класса 5 кетонов в биологическом материале.Цель иэобретеция - дополнительное определение в пробах циклогексанона и метилизобутилкетона при одновременном повышении чувствительности спо соба.Способ осуществляется следующимобразом.Проводят хроматографическое определение кетонов - ацетона, метилизо , бутилкетона и циклогексанона в биологическом материале - крови, моче, гомогенатах кожи и органов путем отбора 2 мл мочи, 1,0 мл сыворотки крови, получения 5 мл водного экстракта 20 органа, термостатирования в герметично закрытой емкости при 98 + 4 С в течение 25-30 мин, хроматографировании полученной паровой фазы с пламенно-ионизационным детектированием 25 на колонке 300 х 03 см заполненной хроматоном И-АИ с 152 аппезона Ь приоУ температуре колонки 130 С испаритеоУля 190-210 С, скорости газа-носителя (азота) 40 мл/мин, водорода 25- 30 30 мл/мин, воздуха 250-300 мл/мин с последующим количественным их анализом методом абсолютной калибровки,Впервые достигнута возможность количественного раздельного определе 35 ния 3 кетонов с использованием фазы хроматонаИ-АУ с 157. апиезона Ь, достигнут предел обнаружения ацетона, равный 0,25 мкг/мл; циклогексанона и метилизобутилкетона 1,5 мкг/мл. 40Впервые разработаны условия полуения термодинамического равновесия системы жидкость - пар в стекляннойгерметичной емкости объемом 30 мл при термостатировании в течение 25 о 30 мин и температуре 98 + 4 С при исследовании малых объемов биологической пробы (1,0 мл сыворотки крови, 2 мл мочи и гомогената органов),За время анализа идентичное известному способу (7 мин), получают ко 50 личественные параметры не одного ацетона, а 3 кетонов, следовательно, разработано более эффективное решение, Точность разработанного способа +22,7 ЕП р и м е р . Пробу сыворотки крови объемом 1 мл помещают в стеклянную Емкость на 30 мл, добавляют 1 мл дистиллированной воды. Емкость герметично эавинчивается крышкой с отверстием и силиконовой (самоуплотняющейся) прокладкой, помещается в термостат при 100 С. Туда же помещается шприц для отбора паровой фазы. Через 25 мин 5 мл паровой фазы, взятой из замкнутой емкости над сывороткой, вводят в испаритель хроматографа с пламенно-ионизационным детектированием. Разделение производят на колонке 300 х 0,3 см, заполненной хроматоном И-АИ с 15 Е апиезона Ь приотемпературе колонки 130 С испариоУ теля 200 С, скорости газа-носителя азота 40 мл/мин, водорода 30 мл/мин, воздуха 300 мл/мин. Концентрацию кетонов в сыворотке крови определяют с помощью градуировочного графика, выражающего зависимость высоты пика от количества компонента (берут за основу сыворотку контрольных животных). Количественному определению любых исследуемых образцов (сыворотки крови, мочи паренхиматоэных органов, кожи) предшествует градуировка прибора по аналогичным контроль- ным образцам сред или органов, в которые вводят стандартные растворы, Пределы массового содержания веществ в сыворотке крови при построении градуировочных графиков для ацетона 0,5-25 мкг, циклогексанона и метилизобутилкетона 3-30 мкг. Чувствительность хроматографа при определении кетонов в сыворотке крови (моче, органах) 1 10 А.Расчет концентраций кетонов ведется по соответствующему графику в пересчете на мг/мл для жидких сред (сыворотка крови, моча). Построение градуировочного графика и анализ проб проводится в абсолютно одинаковых условиях, что позволяет не прибегать к сложным расчетам. Для определения каждой концентрации проводят не менее 5 параллельных измерений, из которых рассчитывают средние значенияСодержание кетона в сыворотке крови определяют, исходя из концентраций его в пробе, помещенной в замкнутую емкость (30 мл), где соэдатся термодинамическое равновесие между жидкой и газовой фазами, и объема паровой фазы введенной в испаритель хроматографа (5 мл).Количество вещества ш (мг) в средах, соответствующее измеренному значению высоты пика (Ь), находят по. 3,4 0,023 О,О 21 0,0060,0650,0628 3,1 О, 043 1, Э 0,0424 3,25 0,0664 Моча Почки Печень 1,82 0,9+ 0,10,021+0,0040,023+0,007 2,95 0,5 Кожа. Составитель Н. ГуляеваТехред А,Кравчук Редактор Т. Парфенова Корректор Л, Пилипенко Заказ 1576/47 Тираж 847 ВНИИПИ Государственного комитета СССР. по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная, 4 градуировочным графикам Ь = Г(ш), Количество вещества М (мг/мл) в объемеанализируемой пробы находят по формуле где 7 - объем анализируемой пробы,мл.10В результате исследований (при нанесении на кожу животных циклогексанона и метилизобутилкетона на уровне порога острого действия) получены следующие средние величины содержания кетонов в образце сыворотки крови по 5 параллельным измерениям мг/мл:АцетонМетилизобутилкетонЦиклогексанон Предлагаемый способ позволяет определять в сыворотке крови кетоныв пределах:, цетон 0,25-25 мкг/мл,метилизобутипкетон и циклогексанон1,5-30 мкг/мл,В таблице представлены данные осреднем содержании кетонов в исследованных средах и органах, полученные 30при общих режимах термостатированияи хроматографирования (термостатирование при 100 С в течение 30 мин ихроматографирование при температуреколонки 130 С, испарителя 200 С,скорости газов: азота 40, водорода30, воздуха 300 мл/мин соответственно). Формула и э о б р е т е н и яСпособ определения кетонов в биологическом материале путем получения водного экстракта исследуемого образца, термостатирования, отбора парообразной пробы с последующим гаэожидкостным хроматографированием, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью дополнительного определения циклогексанона и метилизобутилкетона при одновременном повышении чувствительности способа, термостатирование проводят при температуре 98+4 С в течение 25-30 мин, при хроматографировании используют фазу хроматона И-АМ с 157 апиезона Ь при температуре исопарителя 190-210 С и скорости пропускания воздуха 250-300 мл/мин.