Способ определения активности фагоцитов

СОЮЗ СОВЕТСНИ ОЦИА ЛИС РЕСПУБЛИ А 1 33 5)4 фер д А Ср Щ ф а д ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 813учно-исследой институтСорокин,Бюл.кий ночумнь.Ю ва тов,С.Жук8.8)экспцины. иментальной9841 Я 5н измеряютабл,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(21) 4064364/ (22) 1103.86 (46) 07.04.88 (71) Волгогра тельский прот (72) С.М.Лико Э.С.Темкин и (53) 615.375( (56) Бюллетен биологии и ме с. 634.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ(57) Изобретение относится к медицине, точнее - к иммунологии. Цель изобретения - повышение чувствительности и упрощение способа, Для этого производят исследование фагоцитарной активности лейкоцитов крови у пациента. Смешивают фагоциты с суспензией меченного люминалом тест-объекта. В качестве тест-объекта используют микроорганизмы М 3.сгососсаз 1 увос 1 окГ 1 сыз. Проводят инкубацию при 37 СО в монослое фагоцитов при их соотношении с тест-объектом 1:10. Затем ставят реакцию хемилюминесценций (ХЛ) и через 15, 35, 45 мистепень ХЛ на приборе. 2 тИзобретение относится к медицине, а более конкретно к иммунологии.Цель изобретения - повышение чувствительности и упрощение способа,П р и м е р 1. Исследование фа 5 гоцитарной активности лейкоцитов кроВи у больного К, с обострением хронического гранулематозного периодонгита.10Приготовление тест-объекта. К наблеске 20 мг ацетонвысушенных клетокикрококка добавляют 0,8 мл 0,01раствора МаОН и 0,2 мл раствора яюминола, полученного путем раствореия 10 мг сухого люминола в 1 мл диметилсульфоксида. Клетки с люминалом перемешивают на мешалке 20 мин и оставляют в темноте при комнатной температуре на 18-24 ч, затем осадок клеток отмывают от несвязавшегося люинола путемцентрифугирования при000 об./мин (три раза по 5 мл 0,97. - 1 ного раствора БаС 1). К отмытому Осадку микрококков добавляют 2 мл 25 ,9 Х-ного раствора МаС 1 и получают меченные люминолом клетки микрококка й дозе 20 мг/мл . Данная суспензия ьикрококка сохраняет свою активность в течение 1-2 мес в условиях хранения 3 О при 4 С.Для постановки реакции определения фагоцитарной активности лейкоцитов Мрови берут из пальца обследуемого буровь в количестве 0,2-0,3 мл в35 микропробирку с гепарином (20 ед./мл).11 о 25 мкл крови разливают в три кюзеты (объемом 3 мл), предназначенныея измерения хемилюминесценции на риборе люминометре (1 КВ, финляндия). В кюветы добавляют по 100 мкл тест-объекта в разведении 1,2 мг/мл, закрывают колпачками и встряхивают в течение 20-30 с на приборе микровст-. ряхивателе для микропробирок или путем постукивания по столу для рав" номерного распределения капли крови с тест-объектом по дну кюветы. Затем пробирки инкубируют в термостате на 37 С и через 15, 30, 45 мин измеряют степень хемилюминесценции на при ц боре. При снятии показаний свечения, мВ, с дисплея прибора записывают наибольшую цифру из трех, возникающих каждые 1-2 с. Интенсивность фагоцитоза лейкоцитами тест-объекта выра 55 мают светосуммой трех изделий, Одновременно с исследованием крови больного определяют фагоцитарную активность У пОстОЯннОГО донора, фагоцитарную активность лейкоцитов кровибольного выражают в процентах к таковой у донора по формуле: (А:В)х 100,где А и В - светосумма хемилюминесценции лейкоцитов с тест-объектом убольного и донора, соответственно.В тябл. 1 приведены результатыопределения фагоцитарной активностиу больного с обострением хроническогогранулематоэного периодонтита до ипосле лечения (на каждого больногои донора брали пе 3 кюветы),Из табл. 1 видно, что у больногодо лечения отмечалось снижение фагоцитарной активности лейкоцитов крови,а к концу лечения она восстанавливалась и приблизилась к таковой у здорового донора. Таким образом, предложенный способ позволяет определитьстепень восстановления защитных силорганизма в процессе лечения пери/.Одонтита.П р и м е р 2. Исследование удонора фагоцитарной активности лейкоцитов крови при использовании различных ее объемов,Этапы те же, что,и в примере 1,за исключением того, что кровь берутиэ вены, вносят в кювету в объеме10, 25, 50 и 100 мкл и тест-объектв объеме 10 мкл в той же концентрации, что и в примере 1, Пробы встряхивают на протяжении 20 с. Результаыисследований приведены в табл. 2,Иэ табл. 2 видно, что увеличениеобъема крови до 100 мкл в,пробе ведетк уменьшению интенсивности хемилюминесценции, тем самым снижается чувствительность реакции: объемы крови 25и 50 мкл дают более сильную хемилюминесценцию. При использовании 10 мклхемилюминесценция ниже, чем в остальных пробах. Однако выявление хемилюминесценции в 10 мкл крови само посебе свидетельствует о преимуществах метода, так как позволяет внеобходимых случаям испольэоватькровь и в таких микрообъемах (например, в педиатрии),Предложенный способ проще известного, так как нет необходимости готовить синтетические микросферы ипокрывать их белком. Он обладаетбольшей чувствительностью в 10 раэ,поэтому может быть использован в случаях, когда уменьшено количество фагоцитов эа счет патологии или у Опре1386911 Таблица 1 Светосумма хемилюминесценции, мВдо лечения после лечения Об следуемый 11,5 14,3 12,3 Б-ой К. Обострение хро" 7,8 7,4 7,5нического. гранулематозного периодонтитаСреднее 7,5 Среднее 12,7 10,6 15,7 12,4 13,0 14,5 12,8 Среднее 12,9 Среднее 13,4 Здоровый донор 7 к показателю фагоцитоза у донора 94,7 58,1 Таблица 2 Светосумма хемилюминесценции мВ, в зависимости от объемакрови, мкл 50 100 1 О 14,9+0,81 10,0ф 0,80 Составитель П, БонарцевРедактор В. Данко Техред Л.Сердюкова Корректор Л, Патай Заказ 1491/43 Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж-Э 5Раушская наб.д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 деленных видов животных, а также вслучае низкой чувствительности люминометра. Способ предполагает использование микрообъемов крови, поэтомуможет быть использован в педиатрииили у мелких животных. Формула и э о б р е т е н и яСпособ определения активности фа гоцитов путем смешивания фагоцитов с суспензией меченного люминалом тест-объекта, инкубации при 37 С втечение 30-40 мин с последующим учетом результатов по измерению реакциихемилюминесценции, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, в качестве тест-объекта исполь"зуют микроорганизмы Мсгососсцз 1 узоЙо 1 мдсцз,а инкубацию проводят в монослое фагоцитов при их соотношении стест-объектом 1: 10,