Способ определения антистрептолизин -овых антител в крови (его варианты)

-14 С.п оЪо 1 оГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Диессе диагностика сене(57) Йзобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - упрощениеи повышение точности определения. Всыворотку крови вносят окисленныйстрептолизин-"0", суспензию зритроцитов и перемешивают, В смесь добавляют восстанавливающий раствор, имеющий тиольную группу. Измеряют скорость гемолиза и по калибровочномуграфику определяют титр антител висследуемом образце, Способ обеспечивает кинетическое определениеантител в процессе гемолиза. 2 с. и1 з.п. ф-лы.Изобретение относится к областимедицины, преимущественно к диагностике инфекционных заболеваний, иможет быть использовано для выявленияантител к гемолитическому стрептококкуЦелью изобретения является упрощение и повышение точности определения.Способ поясняется следующими примерами.П р и м е р 1. Определение антистрептолизин-"0"-овых антител в цельной крови.К 0,01 мл цельной крови, взятойдля исследования, добавляют 2 мп забуференного физиологического раствора 0,15 М при рН 7,0 и 20 С; содержащего 5 с Ч/мл окисленного стрептолизина -"0", После тщательного перемешивания смесь оставляют при комнатной температуре на 15 мин, после чего к реакционной смеси прибавляют0,1 мл восстанавливающего раствора,содержащего дитиоэритритол (дитиотреитол, меркаптоэтанол или их смесь)в концентрации 0,001 моль/л, реакционную смесь перемешивают и измеряютее оптическую плотность при 600 нм.Анализ полученной при этом спектрофотометрической кривой показал,что изменение в спектральном поглощении реакционной смеси составляет2 1,5 деления/мин. Это свидетельствует о том, что исследуемый образецкрови имеет титр антистрептолизин-"0"-овых антител 430 МЕ, В то жевремя определение по известному способу дало величину, равную 333 МЕ.П р и м е р 2Определение антистрептолизин-"0"-овых антител в сыворотке крови,1Раствор окисленного стрептолизина-"0" использовали в концентрации5 с Ч/мл, причем к этому растворупредварительно добавляли промытыеэритроциты (0,1 мл эритроцитарногоотстоя на каждые 40 мл раствора окисленного стрептолизина-"0" в физиологическом растворе), Использовалиэритроциты человека круппы О, Ю(можно использовать эритроциты кролика). Для определения титра антител0,01 мп исследуемой сыворотки прибавляют к 4 мл раствора окисленногострептолизина, содержащего суспензию эритроцитов, и смесь тщательно перемешивают,. Затем смесь остав ляют в течение 15 мин при комнатной температуре, после чего добавляют0,2 мл восстанавливающего раствора,содержащего дитиоэритритол, как описано в примере 1. Было выявлено, чтоскорость изменения спектрального поглощения равна 28,5 делениям/мин. Это соответствует титру антител 260 МЕ.:. Предложенный способ по сравнениюс известным обеспечивает кинетическоеопределение антистрептолизин-"0"-овыхантител в процессе гемолиза при ис 10 пользовании окисленного стрептолизина -"0" что обеспечивает большуюточность измерения. Формула изобретения 1 Способ определения антистрептолизин-"0"-овых антител в крови путем внесения в исследуемый образец окисленного стрептолизина-"0", инкубации 20 и определения гемолиза, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и повышения точности определе 25 внесения в исследуемый образец окисленного стрептолизина-"0", инкубации й определения степени гемолиза, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и повышения точности опре 45 50 деления, в качестве исследуемого образца используют сыворотку крови, вкоторую вносят лиофилизированныйокисленный стрептолизин-"0" в изотоническом забуференном при рН 7,0 растворе в концентрации 4-8 с Ч/мли после инкубации смеси осуществляютдополнительную стадию прибавленияэритроцитов в количестве, эквивалентном образцу цельной крови, после чения, лиофилизированный окисленныйстрептолизин-"0" вносят в изотоническом буферном растворе при рН 7,0 30 в концентрации 4-8 с Ч/мл и послеинкубации смеси в нее вносят восстанавливающий агент, имеющий в своемсоставе .тиольную группу и находящийся в изотоническом забуференном при З 5 рН 7,0 растворе в концентрации0,001 моль/л, после чего измеряютскорость гемолиза и при помощи калибровочного графика, построенного для-"образцов с известным содержаниемантител, определяют титр антистрептолизин-"0"-овых антител в исследуемом образцег2. Способ определения антистрептолизин-"0"-овых антител в крови путем1367838 Составитель П.БонарцевТехред Л,КравчукРедактор Л.Веселовская Корректор С,шекмар Заказ 6853/57 Тираж 655 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по.делам, изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная.,4 го вносят восстанавливающий агент,имеющий в своем составе тиольную груп.пу и находящийся в изотоническом забуференном при рН 7,0 растворе в кон-центрации 0,001 моль/л и измеряютскорость гемолиза, после чего припомощи калибровочного графика, построенного для образцов с известнымсодержанием антител, определяют титр антистрептолизин-"0"-овых антител висследуемом образце.3. Способ по пп.1 и 2, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что в качествевосстанавливающего агента используютдитиоэритритол, или меркаптоэтанол,или дитиотреитол в концентрации0,001 мольл, или смесь этих агентовс конечной концентрацией смеси