Способ определения активности иммунорегуляторных лимфоцитов

(19) (11 3 48 С 0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫ САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ У 6 ТОРСКОМУ СВИ ТЕЛ 916926/28-147.05.857.01.88. Бюлевский научнститут нейрнститут педикологии(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫХ ЛИМФОЦИТОВ(57) Изобретение относится к иммунлогии. Цель изобретения - упрощениспособа. Лимфоциты прогревают притемпературе 44-45 С в течение 5560 мин и отмывают средой 199. Спопозволяет полностью остановить пролиферацию лимфоцитов и выявить ихгуляторную активность.1364985 Изобретение относится к медицине,а именно к лабораторным способам диагностики, которые основаны на иммунологических исследованиях.Целью изобретения является упрощение способа эа счет ингибиции пролиферации прогреванием,П р и м е р 1, Лимфоциты, выделенные известным способом иэ крови донора, были разделены на шесть проб по1,5 10 клеток в 1 мл. Лимфоциты про 6гревали при 42, 45 и 48 С в течение30, 50, 60 и 75 мин. Жизнеспособность клеток определяли по окрашиванию 0,17.-ным раствором трипанового синего.Установлено, что прогревание прио42 и 45 С лишь незначительно снижаетжизнеспособность клеток, тогда как 20опри прогревании при 48 С уже через1 ч жизнеспособных клеток было только247, что свидетельствует о быстройгибели лимфоцитов. Следовательнопрогревание в течение 1 ч при 45 С 25практически не влияло на жизнеспособность клеток, выявляемую трипановымсиним,Изучение пролиферативной способности прогретых в течение 30, 50, 60 30и 75 мин лимфоцитов при 44-45 С показало, что по мере увеличения временипрогревания уменьшается пролиферативная способность лимфоцитов в присутствии ФГА. При прогревании 50 мин пролиферативная активность ниже, чем при60 мин, где наблюдается практическиполная остановка пролиферации клеток.Дальнейшее увеличение времени прогрерания (до 75 мин) практически не влия ло на уровень пролиферации клеток,но в то же время отмечено при этойже температуре значительное снижениежизнеспособности клеток, определенных по трипановому синему что свиУ45детельствует о неблагоприятном воздействии длительного прогреванияИсследование иммунорегуляторнойактивности лимфоцитов в зависимостиот времени прогревания показало, чтодобавление прогретых лимфоцитов в дозе 110 к тест-системе аллогенных6лимфоцитов вызывает максимальное угнетение пролиферации при прогреваниив течение 60 мин, тогда как большее(70 мин) и меньшее (50 мин) время обладали нестабильной и значительноменее выраженной ингибирующей активностью,Таким образом, оптимальными условиями прогревания является время, равное 55-60 мин, при 45 С.П р и м е р 2. Из 10,0 мл крови донора (28 лет) выделяли лимфоциты известным способом на градиенте фиколл-верографин и разделяли на три пробы, которые прогревали в течениео60 мин при 42, 45 и 48 С. После этого лимфоциты отмывали два раза средой 199 и разделяли на 2 равных части: с одной из которых ставили РБТЛ с ФГА для определения пролиферативной активности, а с другой - порцию прогретых лимфоцитов, смешивали с ауто" логичными непрогретыми лимфоцитами и ставили РБТЛ известным способом.Установлено, что прогревание в течение 60 мин при 42 С значительно снижает пролиферативную активность лимфоцитов, но при 45 С наблюдается практически полная остановка пролиферации даже ниже уровня спонтанной контрольной пролиферации, куда не вводился ФГА. Следовательно, только прио45 С происходит полная остановка пролиферации лимфоцнтов.Определение регуляторной активности клеток, прогретых при разных тем-. пературных режимах, показало, что только при 45 и 48 С происходит значительное угнетение пролиферации тест-культуры лимфоцитов, тогда как при 42 С отмечается лишь незначительное угнетение (индекс супрессии 0,26), Прогревание при 48 С неприемлемо из-за высокого процента гибели клеток.Следовательно, прогревание лимфооцитов при 45 С способно останавливать полностью их,пролиферацию и выявлять их регуляторную активность.Предлагаемый способ определения активности иммунорегуляторных лимфоцитов значительно более экономичен и более прост в использовании по сравнению с известными способами, где используются К-лучи или митомицин С. Применение К-лучей для остановки пролиферации клеток требует дополнительного сложного и дорогостоящего оборудования радиационной защиты персонала и окружающих и, следовательно, может быть применен лишь в специальных учреждениях, обладающих этими условиями.1Применение химического ингибитора пролиферации лимфоцитов митомицина С364985 Составитель П,БонарцевРедактор Н,Гунько Техред Л.Сердюкова Корректор И.Эрдейи Заказ 6591/37 Тирах 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 такке оГраничивает использование этого способа, так как это импортный дорогостоящий реактив ограниченного срока хранения.5Использование предлагаемого способа возможно при использовании отечественного оборудования (водяной бани) и доступно всем клиническим лабораториям. 10 Все это позволяет более широко использовать данный способ в клинической практике и при изучении функции иммунорегуляторных лимфоцитов, что способствует более полной и объектив ной диагностике состояния иммунной системы при различной патологии, включающей иммунодефицитные, инфекционные,воспалительные и аллергические заболевания. формула изобретения Способ определения активности иммунорегуляторных лимфоцитов путем их выделения иэ периферической крови с последующей ингибицией их пролиферативной активности и инкубацией в тест-системе и учетом иммунорегуляторного действия лимфоцитов, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, ингибицию пролиферативной активности иммунорегуляторных лимфоцитов осуществляют путем ихОпрогревания при 44-45 С в течение 55-60 мин.