Способ определения нарушений полимеризации фибрин-мономера в плазме крови больных

(51)5,6 01 й 33 ТЕНИЯ ованой фазе гем Ы ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗО К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Алтайский государственный медицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ПОЛИМЕРИЗАЦИИ ФИБРИН-МОНОМЕРА В ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ(57) Изобретение относится к медицине, вчастности к гемостазу, и может быть испольИзобретение относится к медицине, в частности к гемостазу, и может быть использовано для исследования полимеризационной фазы свертывания крови при диагностике геморрагических диатезов, тромбоэов, ДВС-синдромов, системных васкулитов и др.Целью изобретения является повышение точности способа за счет воэможности выявления дисфибриногенемии и ингибитора полимеризации.Способ осуществляют следующим образом.Набор крови производят иэ локтевой вены в силиконированную пробирку, где находится 1 мл 3,8;-ного раствора цитрата натрия, и набирают кровь до метки 10 мл. Богатую тромбоцитами плазму получают путем центрифугирования крови в течение 5 мин при 100 об/мин в центрифуге 3 УХЛ 4.2 ОПн. Бедную тромбоцитами плазму получают путем центрифугирования богатой тромз для исследования. полимеризационн ы свертывания крови придиагностик оррагических диатезов, тромбоэов, ДВС-синдромов, системных васкулитов. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого при нарушении , полимериэации фибрин-мономера в качестве жидкости, приводящей к полимеризации, используют плазму больного, которую добавляют к растворимому фибрин-мономеру здорового и при удлинении скорости полимеризации ставятдиагноз наличия ингибитора полимеризации, а при отсутствии удлинения-дисфибриногенемии,боцитами плазмы в пластиковых пробирках при 3000 об/мин в течение 15-20 мин на цетрифуге 8 УХЛ 4,2 ОПн.Получают растворимый фибрин-мономер из плаэмь 1 здорового человека. Используют 0,075 М боратный буфер, состоящий из 525 мл раствора тетрабората натрия (19,1 г на 1 л дистиллированной воды) и 450 мл 0,1 н. соляной кислоты (рН 7,6), Используют ацетатный буфер, состоящий из 400 мл раствора ацетата натрия (2,7 г на 1 л дистиллированной воды) и 100 мл 0,02 М уксусной кислоты (рН 5,2), к которому добавляют мочевину до концентрации 10 ,К 100 мл цитратной плазмы здорового человека добавляют 0,46 г ЭДТА и 10 г мочевины. Мешает стеклянной палочкой до полного растворения,К смеси добавляют. раствор тромбина 100 мг.на 10 мл дистиллированной воды и оставляют смесь при 37 С на 30 мин.К смеси добавляют 900 мл раствора следующего состава: 720 мл 0,14 М раствора хлорида натрия и 180 мл 0,075 М боратного буфера (рН 7,6).После разбавления плазмы оставляют ее при 37 С на 2 ч,Образовавшийся сгусток наматывают на стеклянную палочку, удаляют избыток жидкости и осушивают о фильтровальную бумагу, затем промывают 0,14 М раствором хлорида натрия и дистиллированной водой.Помещают сгусток в 70 мл 10-ного раствора мочевины на ацетатном буфере (рН 5,2). Растворяют на магнитной мешалке до полного растворения.Фильтруют раствор и разбавляют боратным буфером (600 мл), оставляют при 37 Сна 1 ч.Образовавшийся гель помещают на водяную баню при 420 С на 80 мин,Сгусток собирают, отмывают, затем растворяют в 50 мл 10 мочевины на ацетатном буфере.Разбавляют раствор 500 мл боратного буфера, выдерживают при 37 С 2 ч.Собирают сгусток, отмывают и растворяют в 50 мл 100 ь мочевины на ацетатном буфере.Определяют концентрацию белка при 280 нм, для фибрин-мономера, 1 мг/мл равно 1,56.Порцию полученного раствора фибринмономера разбавляют в 2,4,8 ит.д, раз 10 мочевиной на ацетатном буфере и определяют время образования фибринового сгустка в экспериментальной системе: 0,1 мл боратного буфера +0,1 мл фибрин-мономера. Концентрация фибрин-мономера, обеспечивающая полимеризацию за 18 - 20 с " рабочая.Ход определения, Берут 0,1 мл рабочего раствора фибрин-мономера и добавляют к нему 0,1 мл исследуемой плазмы, определяют скорость полимеризации фибрин-моно- мера. За контроль принимают скорость полимеризации фибрин-мономера при добавлении плазмы здорового человека, Норма 18-20 м. При удлинении скорости полимеризации ставят диагноз наличия ингибитора полимеризации в плазме больного, при отсутствии удлинения скорости полимеризации и наличия нарушений полимеризационной фазы свергывания крови ставят диагноз дисфибриногенемии.Обследовано предложенный способом 170 человек с нарушениями в полимериэационной фазе свертывания коови, У 124 больных выявлен ингибитор полимеризация фибрин-мономера, у 46- дисфибриногенемия,П р и м е р 1. Больная Т. Г 24 летпоступила на обследование по поводу частых носовых кровотечений, синячковости,которые впервые появились 6 мес, назад. Из5 анамнеза стало известно, что год назадбольная перенесла вирусный гепатит, Приобследовании системы гемостаза найдено .Тесты Б КТромбиновое время, с 20 1510 Анцистродоновое время, с 52 30Анцистроновое время, с 44 25Полимеризация фибринапо методу Бышевского 10037Полимеризация фибрина15 по предлагаемому способу 19 18Наличие нарушений в полимеризационной фазе свертывания крови у данной больной (гипокоагуляция по тромбиновому,анцистроновому, астроновому временам,20 удлинение полимериэации по методу Бышевского) и отсутствие нарушения по заявленному способу говорит о наличии убольной дисфибриногенемии, возможно печеночнаго генеза и требует медикаментоз 25 ной терапии гепатопротекторами.П р и м е р 2, Больной М. А., 50 лет.Диагноз: геморрагический,васкулит, В анализах системы гемостаза,Тесты Ь К30. Тромбиновое время, с 18 15Анцистродоновое время, с 40 25Астроновое время, с 58 27Полимеризация фибринапо методу Бышевского 60 25,35 Наличие гипокоагуляции по тромбиновому, анцистродоновому, астроновому временам, удлинение времени полимеризациипо методу Бышевского с одновременнымудлинением времени полимеризации фиб 40 рина по заявленному способу говорит о наличии ингибитора полимериэации в плазмебольного. В качестве лечения данномубольному можно рекомендовать этапныйплазмофореэ, удаляющий ингибиторы пол 45 имериэации из крови,Эффективность данного способа состоит в том, что он позволяет выявить наруц 1 ения полимеризации фибрина, аследовательно повысить точность диагно 50 стики таких заболеваний как геморрагический диатез, тромбоз, ДВС-синдром,системные васкулиты и др.Формула изобретенияСпособ определения нарушений пол 55 имериэации фибрин-мономера в плазмекрови больных путем использования растворимого фибрин-мономера, полученногопутем добавления буферного раствора итромбина к плазме крови и добавления раствора, приводящего к полимеризации фиб1712873 Составитель Л.КонюховаРедактор М.Самерханова ТехредМ.Моргентал Корректор О.Кундрик Заказ 533 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб;, 4 Й Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 рин-мономера с последующим определением времени образования фибринового сгустка, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет воэможности выявления дисфибриногенемии и ингибитора полимеризации, используют фибрин-мономера здорового человека, а в качестве раствора добавляют исследуемую плазму больного и при увеличении времени образования фибринового сгустка выявляют наличие ингибитора полимеризации 5 фибрин-мономера, а при стабилизации показателя относительно контроля определяют дисбифриногенемию.