Способ определения гиперлипопротеидемии

1 15Изобретение относится к медицине,а именно к биофизическим методамисследования параметров сывороткикрови человека с целью диагностикигиперлипопротеидемии (ГЛП),Цель изобретения - ускорение способа.Способ осуществляется следующимобразом,В пробах сыворотки крови измеряют интегральную интенсивность процессов перекисного окисления липидови их комплексов с помощью индуцированной хемилюминесценции, Для,автоматического анализа можно использовать устройство для анализабиохемилюминесценции микроорганизмовПеред началом анализа сывороткукрови объемом 0 э мл в течение 5 гиггвыдерживают в бана с37 С, Все остальные реактивы нагреты до коглнатггойтемпературы. Б кювету вносят 8,т мп0,10 11 раствора КС 1 приготовленного на Фогфатном буфере (РН 7,45),О, 2 мп 1 Х-ной гггдротгеректлси тре лгчного бутила и 1 мл раствора ионов двухвапентного железа 10 "м 1 РеВС 711, О,Затем кювету с внесенными растворамнставят в светонепроницаемую камеруустройства, тщательно перемеп:ивавтсодержимое кюветы и закрывают камеру.При закрытой створке прерьгвателя светового потока темновой камеры измеряют для контроля шумовой сигнал измерительного тракта устройства. Затем .створка темновой камеры открываетсяи происходит измерение интенсивностисвечения приготовленного раствора(Фон) для учета в последующем атлализесветового потока хемилвмцнесцевциисыворотки крови. Не вынимая кюветуиэ камеры, в специальное отверстиевводят, например щлригтем 0,5 мтт сыворотки крови и измеряют интегральную интенсивность хемилюминесценциилипидов и их комплексов в сывороткекрови в течение 1 мин. При этомполученные результаты автоматическивыводятся на цифровой регистраторустройства,После этого из полученного значения интегральной интенсивности хемипгоминесценции вычитается значение фона за этот отрезок времени и результат фиксируется на регистраторе устройства, Затем полученный результат сравнивается с параметрами нормы и, если он превышает на 10 Х и более граничное значение нормы, тс диагностируют наличие Г 1 Ш, если же он лежитв пределах нормы, то диагностируютотсутствие ГЛП,П р и м е р 1, У больногс М,45 лет, берут 0,5 мл сыворотки крови,которую затем выдерживают в течение5 мин в бане с с 37 С. В кювету устройства вносят 8,5 мл О,05 И раство 10 ра КС 1, приготовленного на фосфатномбуфере (рн 7,45), 0,2 мл 1 Х-ной гидроперекиси третичного бутила и 1 млраствора ионов двухвалентного железа10 м И Ре 804 7 НО и тщательно пере 15 мешивают содержимое кюветы, Затемкювету с внесенными растворами ставят в светонепроницаемую камеру устройства и закрывают створку. Измеряют шумовой сигнал устройства за 1 мин,20 который составляет 780 имп затемпри открытой. створке камеры измеряготинтенсивность свечения приготовленного рас г вора (Фон) т 1(о Горан за 1 минсоставляет 2100 имк,25 После этого в кговету гцггрттгтегчвводят 0,5 мл сыноротги крови больного 11. и измеряют интегральную интенсивнос гь хегпглюминесценции липидови их комплексов в сыворотке кровиЗб также в течение 1 мин, которая составляет за вычетом фона 11023 имп,Это значение соответствует нормедля этого возраста поэтому у больного 11 диагностировано отсутствие1"ЛПП р и м е р 2, У больного 11,(номер истории болезни 9 248) берут05 мл сыворотки кровгл, В г 1 юветуустройства вносят 8,5 мл 0,105 н.тб раствора КС 1 приготовленного наФосфатном буфере (рН 7,15), 02 мл1 Х-ной гидроперекиси третичного бутила и 1 мл раствора ионов двухвалентного железа 10 1 Ре 80 7 Н 0.15 и тщательно перемешивали содержимоекговеты.1 Затем измеряют шумовой сигналустройства за минуту и интенсивностьсвечения приготовленного раствора 1 О (Фон),В кювету вводят 0,5 мл сггвороткикрови больного и измеряют интегральную интенсивность хемизпоминесценциилипидов и их компонентов в сыворотке 55 крови в течение 1 мин, которая состав:ляет за вычетом фона 12343 имп. Этосоответствует норме, поэтому у больного диагностировано отсутствие ГЛП.1255925 П. р и м е р 3. У больного Х.59 лет, берут 0,5 мл сыворотки крови, Аналогичным образом в кюветуустройства вносят 8,5 мл 0,105 Мраствора КС 1, приготовленного на 5фосфатнам буфере (рН 7,45), 0,2 мл17-ной гидроперекиси третичного бутила имл раствора ионов двухвалентнаго железа 10 М Ре 804 7 Н 0 итщательно перемешивают содержимое Окюветы.Затем измеряют шумовой сигналустройства в течение 1 мин, которыйсоставляет 740 имп, и интенсивностьсвечения приготовленного раствора 15(фона), которая составляет 2050 имп,В кювету вносят шприцем 0,5 млсыворотки крови больного Х,и измеряют интегральную интенсивностьхемилюминесценции липидав и их комплексов в сыворотке крови в течение1 мин, которая составляет за выче-том фана 13670 имп, Это значениепревышает более чем на 107. значение нормы для этого возраста, поэтому 25у больного Х,диагностировано наличиеГЛП,П р и и е р 4; У больного К,интегральная интенсивность хемилюминесценции липидов и их комплексовв сыворотке крови в течение 1 минсоставляет эа вычетом Фона 27707 имп,У него так же диагностировано наличие ГЛП,Способ определения гиперлипопротеидемии путем исследования крови споследующим электрофоретическим вы 30 явлением гиперлипопротеидемий, о т -л и ч а ю щ и й с я тем, что,.сцелью ускорения способа, исследование крови осуществляют с помощьюхемилюминесценции сыворотки, приэтом хемилюминесценцию инициируют17-ным раствором гидроперекиси третичного бутила и 10М растворомионов двухвалентного железа и приуровне светосуммы хемилюминесценции40 от 1 2340 до 27700 имп/с с учетомэлектрофоретического исследованиялипопратеидов определяют гиперлипопротеидемию,Составитель И,КуэенкаваТехред М.Ходанич Корректор В. Синицкая Редактор Н,Рогулич Заказ 4815/43 Тираж 778 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д.4/5; Производственно-полиграФическое предприятие, г,ужгород, ул.Проектная,4 Для контроля с помощью известного способа проведено исследование количества ХС и ТГ у больных М.и Х., которое соответственно составляет: дпя больного М. - ХС = 173 мг,7., ТГ = 85 мг.Ж - норма, для больного Х. - ХС = 300 мг.7 ТГ = 180 мг,7. ГЛП, Это подтверждает достоверность диагностики по предлагаемому способу, При этом затраты времени соответ-: ственно составляют по.известному способу 12,5 ч, а по предлагаемому способу 0,25 ч.Таким образом, за счет применения предлагаемого способа достигается существенное ускорение и упрощейие. диагностики ГЛП при минимальных затратах ручного труда исследователя, что дает возможность эффективно использовать его (совместно с другими методиками) при массовых профилак" тических обследованиях населения для определения степени риска развития сердечно-сосудистых заболеваний.При этом, предлагаемый способ ориентирован на применение биофиэического метода измерения параметров сыворотки крови, для которого создано высокопроизводительное устройство, что обеспечивает высокую автоматизацию способа. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я