Способ количественного определения гормонов в биосубстратах

;.,Д4 А СНОМ ени инс ковский о гайдоп 1975,(54) СПЛЕНИЯ ГО(57) Избам колимонов втения -ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРРО делАм изОБРетений и ОткРытий(71) 2-й Московский орденгосударственный медицинсктут им. Н.И.Пирогова(56) Кд 8 Ьг. 1 пгососгдопдпшшпоаввау шеГЬодз, вопд СОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕРМОНОВ В БИОСУБСТРАТАХбретение относится к спосочественного определения горбиосубстратах. Цель изобреупрощение способа. Получают БО 1250951 от обследуемого две порции сыворотки. К одной порции сыворотки добавляют дистиллированную воду. Измеряютинтенсивность хемилюминесценции этого субстрата, В другую порцию сыворотки вводят 0,1 мл раствора антителк определяемому гормоиу с титром ан,тител 1:10000. Инкубируют эту смесь.Добавляют к ней вещество, ведущее кагрегации комплексов. Вновь инкубируют смесь и центрифугируют ее. Измеряют интенсивность хемилюмин:сценциисупернатанта - субстрата, не содержащего эти комплексы. Строят калибровочную кривую. По разности мездуинтенсивностью свечения до и послевведения антител определяют количест-.во гормона. 2 ил.Изобретение относится к медицине, в частности к способам количественного определеиия гормонов в биологических субстратах, например в сыворотке крови, и может быть использовано для оценки гормонального профиля человека и животных.Целью изобретения является упрощение исследования путем измерения10 интенсивности хемилюминесценции субстрата до и после введения в него антител, и по разности между измеренными значениями определяют количество гормона.На фиг.1 и 2 представлены калиб 15 ровочные кривые для определения эстрадиола и фолликулостимулирующего гормонов.П р и м е р 1. Женщина К., 22 лет, Практически здорова, двадцатый день20 менструального цикла. Проведено определение содержания эстрадиола в сыворотке крови. Натощак взято иэ рены локтевого сгиба 3 мл крови и путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 15 мин получают сыворотку. Для исследования необходимо две порции сыворотки по 0,3 мл.К одной порции сыворотки (0,3 мл) добавляют 0,1 мл дистиллированной во- З 0 ды и измеряют интенсивность хемилюминесценции 0,3 мл этого субстрата. Затем в другую порцию сыворотки (0,3 мл) вводят 0,1 мл раствора антител к эстрадиолу с титром антител З 5 1:10000 в дистиллированной воде, ин, кубируют эту смесь в течение 2 ч прио37 С и добавляют к ней вещество, ведущее к агрегации комплексов "эстрадиол - антитело - активированный 40 уголь в количестве 5 мг, Далее вновь инкубируют смесь в течение 30 мин при 20 С, выделяют агрегированные комп,лексы "эстрадиол - антитело" посред - ством центрифугирования в течение 4515 мин при 2000-2500 об/мин и измеря.ют интенсивность хемилюминесценцию 0,3 мл супернатанта - субстрата, не содержащего эти комплексы.Дополнительно строят калибровоч ную кривую. Для этого измеряют интенсивность хемилюминесценции сериистандартных субстратов, представляющих собой смеси 0,3 мл стандартногоисточника свечения, например липазы,и 0,1 мл раствора эстрадиола в этаноле в концентрациях: 0; 35; 75; 300;бОО; 900; 1200; 1500; 1800; 2100 пг/мл.Для исследования берут 0,3 мл смесей.По разностям между полученными значениями интенсивности хемилюминесценцииэтих смесей строят калибровочную кривую (фиг.1).Разность между измеренными значениями интенсивности хемилюминесценции исследуемой сыворотки и супернатанта составила 6,9 мВ. При сопоставлении с калибровочными данными(фиг.1) эта разница соответствует содержанию эстрадиола в сыворотке крови, равному 340 пг/мл,Ц р и м е р 2. Больная С., 32 года, Диагноз: аменорея. Произведено определение содержания фолликулостимулирующего гормона в сыворотке крови аналогично примеру 1, разность между значениями интенсивности хемилюминесценции исследуемой сыворотки и супернатанта составила 1,8 мВ. При сопоставлении с предварительно полученными для фолликулостимулирующего гормона калибровочными данными (фиг.2) эта разница соответствует 7,6 пг/мл,Ф о р м у л а изобретенияСпособ количественного определения гормонов в биосубстратах путем добавления к исследуемому субстрату антител, вьщеления комплекса гормон - антитело, инкубирования, центрифугирования, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, антитела вводят в избыточном количестве, а количество гормона определяют методом хемилюминесценций по разности между интенсивностью свечения до и после введения антител.1250951 Ъзуава т т ав гго ицвЬколиВроВочмоя эриВо Ф ЖРУ иолцчеглтВенноео олреЖлффиг 1 гвя гав л ухаяия зстроди олп Рй Я 4.0 бй 0Иолибро 8 очнея л,Ои лирующеео нормо Составитель Л.Покрьппкиактор М,Келемеш Техред И.Гайдошг Корректо Муска писн 778 Подтвенного комитета СССРретений и открытий, Ж, Раушская наб., д. 4 аз 4403,/ Тираж ВНИИПИ Государ по делам изо 113035, Москв