Способ определения активности цитохромоксидазы

% (11 бц 4 С 01 Ю 33/48 С 1 Т СССРОТКРЫТИЙ 3 Б МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ И АВТ дегидрогеназь методом по степе цитохрома С за с ната. Затем расс цитохромоксидазы Ч (Ь)х+К (Ь)х+ е 1 сп а, Ь но получен тив но сти цина авле ы, 1 т,14 осферного дст., а а, еские коэффиции Ч (Ь) . 2 табл. ОСУДАРСТВЕНКЫЙ КОЧО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕКИ(46) 15.08.86. Бюл. У 30 (71) Горьковский государственный медицинский институт им, С. М. Кирова (72) Е. М. Хватова, В. М. Галкин, А. Н. Мошкова и Т. С, Семенова (53) 577.158(088.8)(56) Незз Н., Роре А.1. В 1 о 1. Сажею.1953, ч, 204, Е 1, р. 295-306, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЦИТОХРОМОКСИДАЗЪ(57) Изобретение относится к биохимии, а именно к энзимологии. Цель изобретения - сокращение времени определения активности цитохромоксидазы.,Определяют активность сукцинатктрофотометрическнм и восстановления ет окисления сукциитывают У активность по формуле Т = Ч (Ь)х3 (Ь),е М,(Ь) =а +а - созу о1 О, 1, 2, 3;х - зксперименталзначение актдегидрогеназЬ - величина атмния в мм рта - эмпириченты Функциактивность ЦХО;активность СДГ;величина атмосферного давления, мм рт, ст,; где Ух - Ь -офа - коэффициенты линии2сии ч (Ь)=а,+а соз регрес- ГЬ а Изобретение относится к биохимии,а именно к энзимологии, и может использоваться для определения активности цитохромоксидазы (ЦХО).Цель изобретения - сокращение времени определения.П р и м е р. Исследования проводятиа митохондриальной фракции головногомозга. Определяют активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ), спектрофото 1 Ометрическим методом по степени восстановления цитохрома С за счет окисления сукцината. Для определенияактивности СДГ составляют инкубационную среду, котррая содержит: 0,05 мг 15белка митохондриальной суспензии;0,1 мл 1,5 11 раствора сукцината натрия; 0,1 мл 0,15 М раствора КСИ,0,05 мл 810М раствора СаС 10,05 мл 810 М раствора А 1 С 1 ; 202,5 мл 1 10 М раствора цитохрома С.Изменение оптической плотности привосстановлении цитохрома С регистрируют на СФо в течение 3 мин.Активность фермента выражают вмкмолях цитохрома С на 1 мг белкав мин, Следующим этапом в работеявляется определение коэфффициентово опо специально составленным табл.и 2, Соответствующие значения коэффициентов о ос, и величину атмосферного давления (ммрт, ст.), при котором проходил эксперимент, подставляют в формулу (1)для отыскания 1 (Ь), М (Ь), Р,(Ь) 35Ч (Ь)(Ь(=а +а соя ( 1.)ь аЬ1Затем определенное в экспериментезначение активности СДГ и найденныезначения 9,(Ь) (1=0,1,2,3) подставляют в формулу (2), по которой производят расчет активности ЦХОа +, +3,Рассчитанная аналитически активность ЦХО выражается в микромолях цитохрома С на 1 мг белка за 1 мин соотнесенно к Ь. Формула изобретения Способ определения активности цитохромоксидазы путем инкубации ткани в реакционной смеси, содержащей цитохром С, и последующего спектрофотометрирования, о т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения времени определения, измеряют активность сукцинатдегидрогеназы в ткани, а активность цитохромоксидазы рассчитывают по формулеу:Р (Ь)х+ Ч (Ь)х + ч,(Ь)х+у (Ь), где(Ь)=а а соз ; в(д=О 11 о Ь а У э 2,3);у - активность цитохромоксидазы цитохрома С на 1 мг белка в1 мин, мкмоль;экспериментально полученноезначение активности сукцинатдегидрогеназы цитохрома Сна 1 мг белка в 1 мин, мкмоль;величина атмосферного давления, мм. рт, ст.,45 о,аоц эмпирические коэффициентыфункции р(Ь). Например, в условиях гипотермии (С=20 С) в сочетания с гипоксией (разрежение атмосферы до 310 мм рт, ст.) находим значения функций(Ь), у (Ь), ч,(Ь), Е,(Ь) по формулеЧ(Ь)=а +а созо Ь а1 где а а а, берут соответственно из табл, 1 . Значение активности (х) СДГ при этом составляет 25,8 мкмоль цитохрома С на 1 мг белка в 1 мии, расчетное значение активностиЮПХО, цитохрома С на 1 мг белка в 1 мин - 72,463668 мкмоль. Зкспериментально установленная активность ЦХО составляет 71,9+5,5. Ошибка формулы 0,787,1250950 Таблица 1 Значение коэффициентов функций 9. (Ь) (1=0, 1, 2, 3) при =20 С-0,55573 0,019375 78,431198 Таблица 2 Значение коэффициентов функций Р. (Ь) (з.=О,1,2,3) прн С=37 фСа а, Ч,(Ь) Составитель Н. Гуляева Техред И.Гаидош Корректор Е Рошко Редактор М, Келемещ Тираж 778ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Заказ 4403/39 Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4