Способ определения повреждения органов

(9) 4(5) А 0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМ Г 1 О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИ СССР ОТКРзТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Институт проблем криобиологиии криомедицины АК Украинской ССР(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЩНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ ОРГАНОВ путем перфузии органа и исследования перузата, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, в перфузионную среду вводят флюоресцендиацетат вконцентрации 10 -10 М и интенсив ность флюоресценции в оттекающем от органа перфузате свидетельствует о степени повреждения органа.50 55 1 11460Изобретение относится к медицинеи может быть использовано при определении функционального состоянияорганов в процессе консервирования инепосредственно перед трансплантациейДля решения вопроса о целесообразности консервирования и трансплантации органа необходимо иметь данные остепени его повреждения, позволяющие 10судить о его функциональном состоянии,Известен биохимический способопределения степени поврежденияорганов, основанный на определенииколичества продуктов метаболизма в 15ткани консервируемого органа Ц .Однако этот способ громоздок,требует значительных затрат времении реактивов, связан с нарушениемцелостности органа и не позволяет 20оценивать его состояние в процессеконсервированияИзвестен способ определения повреждения органа путем его перфузии иисследования оттекающего перпуэата, 25основанный на анализе энергетическогобаланса перфузируемого органа, Дляэтого измеряют скорость перфуэии,напряжение углекислоты и кислорода,концентрацию водородных ионов и. 30бикарбонатного буфера, после чегона основании математического расчетаопределяют состояние органа 23 .1Однако известный способ трудоемок,требует значительных затрат времени исложной аппаратуры.Цель изобретения - упрощение способа определения степени поврежденияоргана.Указанная цель достигается тем, 40что согласно способу определенияповреждения органов путем перфуэииоргана.и исследования перфуэата,. вперфузионную среду вводят люоресцендиацетат в концентрации 10 -10 М ,ци йнтенсивность флюоресценции в оттекающем от органа перфузате свидетельствует о степени повреждения органа.П р и м е р 1, Были проведены3 серии опытов (в каждой по 6 почеккролика): 1-я серия - почки сосроком ишемии 5 мин, 2-я серия - сосрОком ишемии 30 мин и 3-я серия -со сроком ишемии 60 мин. Все почки после тепловой ишемии перфузировали раствором Хэнкср в который был добавлен флуоресцеиндиацетат в концентрации 10 И при 4 С,00 1перфузионном давлении 60 мм рт.ст., пульсирующим потоком в течение 60 мин.Флуоресцендиацетат (Си Н ь От) представляет собой кристаллический порошок слабожелтого цвета, плохо растворимый в воде (= 10 М),мол.вес 416,4, т,пл. 202-204 С. Применяется для изучения клеточных мембран и гистохимического определения эстераз.В перфузат добавляют нефлуоресцирующее соединение флуоресцендиацетат, которое при повреждении органа разлагается на флуоресцеин и уксусную кислоту. Уровень интенсивности флуоресценции перфузата соответствует степени повреждения клеток органа и определяется на спектрофлуориметре в проточной кювете в оттеке перфузата из вены при длине волны возбужпенияФАв = 481 - 1 нм и максимуме длины волны флуоресценции А617-1 нм.-6В концентрации 10 - 10 М флуооресцеиндиацетат не оказывает повреждающего действия на орган. Уровень интенсивности Аруоресценции увеличивается параллельно времени тепловой ишемии органа.Через 5 мин интенсивность флуоресценции не изменялась, через 30 мин. ишемии возрастала в 1,5 раза, через 60 мин. ишемии в 2 раза. После окончания перфузии почки подключали на абдоминальный отдел аорты с целью изучения их функционального состояния. В 1-й серии после подключения почек к кровеносным сосудам в них восстанавливался почечныйкровоток, почки были розового цвета, из мочеточника отмечалось выделение мочи (0,25-0,07 мл/мин. Количество креатинина в моче составляло 40,32,5 мг Х. Индигокарминовая пробаположительная на 2-,й минуте. Во второй серии опытов после подключения почек к сосудам кролика кровоток восстанавливается на 5-й мин. почки были с синюшньм оттен- ком, диурез мочи - 0,100,05 мл/мин,1креатинина в моче - 10,2-0,6 мг 7 Индигокарминовая проба положительная на 7-й минуте,.В 3-й серии кровоток восстанавливается на 10-й мин., почки синюшного цвета, мочи не было, индиго- карминовая проба - отрицательная;Как видно из приведенных примеров, предлагаемый способ прост, не требует сложной аппаратуры, позволяет с высо"Закаэ 1244/3 Тираа 722 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам иэобретений и открктий113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5 щщ щщ щ щщ щщ щщещ щщФилиал ППП "Патент", г. Уагород, ул. Проектная, 4 3 1146000 4кой точностью определить степень факторам и Дает воэмозность осуществповрелдения органов, обладает высо- лять динамический контроль эа состоякой чувствительностью к поврендающим нием органа в процессе онсервироваиия,