Способ выделения компонентов из пыльцы покрытосеменных растений

ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ о Красного й институт рав 1 сциге Гогпт, ЯгцсВ. М, оЬг Меегц: Яаг 1 ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Всесоюзный ордена ТрудовоЗнамени научно-исследовательскормов им. В. Р. Вильямса(54(57) 1. СПОСОЬ ВЪДЕЛЕНИЯ КОМПОНЕНТОВ ИЗ ПЫЛ ЬЦЪ ПОКРЫТОСЕМЕННЫХ РАСТЕНИЙ воздействием на зре-, лую пыльцу гипотоническим раствором, отличающийся тем, что, с целью повышения процента и ускорения процесса выделения живых неповрежденных генеративных клеток, на пыльцу воздействуют раствором углевода, осмотичес кое давление которого составляет О - 50 О осмотичности раствора изотонического для взятой пыльцы.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что плотность пыльцевых зерен составляет не более 200 тыс. на 1 мл раствора углевода.1145954 Времяинкубации, ч Выделение живых неПлотность Концентрация осмотика в гиВещество,используемоев качестве пыльцевыхзерен в1 мл гипоВид растений поврежденных генеосмотика в ги- потоничестонического раствора, тыс. ративных клеток, Е ком растворе, Е потоническом растворе Люцерна изменчивая (МеЙ 1 са",о чагинаМагг,)(2 п=14) Д-сорбит Д-глюкозаСахароза 35-45 150 3-12 Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в исследованиях по получению в селекционных целях гаплоидных растений в культуре изолированных генеративных клеток 1 п ч 11 го, для получения из этих клеток протопластов, а также для улучшения мужского гаметофита растений. Цель изобретения - повышение процента и ускорения процесса выделения живых 10 неповрежденных генеративных клеток.Пример. Проводят выделение генеративных клеток из пыльцы растений люцерны изменчивой сорта Зайкевича. Зрелую пыльцу помещают в растворы углевода с различным осмотическим давлением, устанавлива 15 ют изотонический для нее, в котором не происходит ее изливание и не отмечается плазмолиз у пыльцевых зерен. Затем готовят раствор углвода (например, Р-сорбита) с величиной осмотического давления по данному способу (например, 10 О-ный раствор с осмотическим давлением 14,7 О от изотонического). В чашки Петри диаметром 6 см наливают по 2 мл 10 О-ного раствора Р-сорбита. Шпателем собирают пыльцу с цветков растений и стряхивают в чашки Петри. Перемешиванием раствора достигают равномерного распределения пыльцевых зерен в его объеме. Чашки оставляют на 2 ч при комнатной температуре. В течение этого времени в йих происходит изливание пыльцы и выделение генератив. ных клеток. Через 2 ч выделившиеся генеративные клетки отделяют с помощью центрифугирования от других продуктов выделения - оболочек и веществ цитоплазмы вегетативных клеток излившихся пыльцевых зерен, а также от неизлившейся пыльг,цы. После этого генеративные клетки используют по назначению. Для определения живых выделенных генеративных клеток применяют витальный краситель-синька Эванса в 0,5 О"-ном растворе. мертвые клетки этим красителем окрашиваются в синий цвет, а живые не окрашиваются. Процент поврежденных генеративных клеток определяется подсчетом под микроскопом генеративных клеток с поврежденной оболочкой.С использованием этого способа достигнуто массовое выделение живых неповрежденных генеративных клеток у некоторых видов растений,В таблице представлены результаты выделения генеративных клеток из растений.В результате изучения выделения генеративных клеток у данных видов растений установлено, что максимальное количество живых неповрежденных клеток выделяется в гипотоническом растворе углевода, с осмотическим давлением в интервале 10 - 50 О осмотичности раствора изотонического для их пыльцы. Установлено, что 95 О от общего количества пыльцы, изливающейся в гипотоническом растворе за время инкубации в нем, приходятся на первые 2-3 ч. Определено, что при плотности пыльцы свыше 200 тыс. на 1 мл гипотонического раствора суцественно уменьшается количество излившейся пыль цы. Поэтому, если за счет неравномерного распределения пыльцевых зерен в объеме гипотонического раствора резко увеличится плотность в отдельных его частях, вследствие этого произойдет уменьшение процента излившейся пыльцы и, соответственно процента выделения генеративных клеток. Установлено, что температура гипотонического раствора 20 - 30 С наиболее оптимальна для выделения генеративных клеток из пыльцы.(Васюта, ппо-ха М 111) Составитель Е. Шкрадюк Редактор Н. Пушиенкова Техред И. Верес Корректор Г. Решетник Заказ 1216/1 Тираж 743 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4