Способ моделирования резистентности к гипогликемическому действию инсулина

СОЮЗ СОВЕТСКИХл анетРЕСПУБЛИК В 23/28 БРЕТЕНИЯ ЕЛЬСТВУ АВТОРСНОЬ(56) 1. Бо 11 А.Н., КаЬп С.К.К.,Нечд 11 е 11.М. апй КайЬ 1. 1 пзп 1 пКесерйог Эей 1 сепеу 1 п СепеСс апАсцпхгед ОЬез 1 йу. 1. С 11 п. 1 пчезй,1975, 56, 769-780. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И 01 КРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗО 1138824 А(54) (57) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКОМУДЕЙСТВИЮ ИНСУЛИНА путем введениябиологически активного вещества,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью ускорения срока моделирования,без нарушения общего метаболизма иразвития. патологического состояния,внутривенно вводят протамин-сульфатв дозе 0,9-1,0 мг на 200 г массы,затем через 5-30 мин внутривенновводят инсулин в дозе 0,2-2,4 мг на200 г,массы.Изобретение относится к медицине, а именно к способам моделирования.Известен способ моделирования ре" зистентности к гипогликемическому действию инсулина, в котором у мышей 5 линии 057 ВЬ вызывают гипоталамическое ожирение с помощью препарата тиоглюкозного золота, вводимого однократно внутрибрюшинно мышам в возрасте 4-6 недель в дозе 0,4-0,5 мг 1 О на 1 г массы. При этом тиоглюкозное золото избирательно повреждает вентромедиальный гипоталамус, вызывая гиперфагию и через 10-30 недель ожирение 11 15К недостаткам известного способа относятся высокая токсичность тиоглюкозного золота (1/3 обработанных животных погибает), длительность времени, необходимого для получения 20 модели (10-30 недели), а также нарушение обмена веществ у животных.Цель способа - ускорения срока моделирования без нарушения общего метаболизма и развития патологичес кого состояния.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу моделирования резистентности к гипогликемическому действию инсулина путем вве- З 0 дения биологически активного вещества внутривенно вводят протамин-сульфат в дозе 0,9-1,0 мг на 200 г массы, затем через 5-30 мин внутривенно вводят инсулин в дозе 0,2-2,4 мг на 200 г массы.Способ осуществляется следующим образом.У контрольных самцов крыс внутривенное введение инсулина в дозе40 0,2 мг на 200 г массы через разные промежутки времени после введения 0,852-ного раствора ИаС 1 вызывает к 30-й минуте снижение концентрации глюкозы в крови до 56,4-67,07 от45 исходного уровня. У животных же, которым до инсулина эа 5-30 мин введен внутривенно протамин-сульфат в дозе 0,9-1,0 мг на 200 г массы,гипогликемическое действие инсулина не проявляется, и концентрация глю 50 козы в крови к 30-й минуте достоверно не отличается от исходной. При введении его за 5 мин до инсулина ингибирующий гипогликемическое действие инсулина эффект протамин-сульфата про 4 является полностью, при введении за 30 мин он несколько слабее. Введение протамин-сульфата за 35-60 юн до инсулина на его гипогликемическоедействие влияния не оказывает. Ингибирующий эффект протамин-сульфатаотсутствует также при введении егоза 1-2,5 мин до инсулина или посленего.Предлагаемый способ является ускоренным - занимает 35-40 мин (длительность известного 10-30 недель).Используемый в предлагаемом способе препарат (протамин-сульфат)не токсичен, дает эффект в 1007случаев. Протамин-сульфат - препаратбелкового происхождения, получаемыйиз спермы различных видов рыб, оказывает специфическое противогеморрагическое действие, широко применяется при операциях, связанных с экстракорпоральным кровообращением. Нафоне протамин-сульфата не оказываютгипогликомического действия и значительно более высокие дозы инсулина 0,4-2,4 мг на 200 г массы.Испопьзованный препарат протаминсульфата, также как и 0,85 Х-ный раствор ИаС 1, не обладает собственнымгипогликемическим действием.Протамин-сульфат блокирует действие и эндогенного инсулина. Так, укрыс, получивших протамин-сульфат,после сахарной нагрузки (1 мг 17.-ногораствора глюкозы внутривенно на200 г массы концентрация глюкозы вкрови возрастает в большей степени,чем у контрольных животных, и сохраняется высокой в течение более длительного времени (до 4 ч),Введение протамин-сульфата в более низких дозах (0,6-0,8 мг на200 г массы) не оказывает ингибирующего действия на гипогликемическуюактивность инсулина, в больших дозах(1,1-1,5 мг на 200 г массы - тот жеэффект, что и введение 0,9-1,0 мгна 200 г массы),П р и м е р 1. У двух самцовкрыс массой 182 г (В 1) и 184 г (У 2)берут из яремной вены кровь дляопределения концентрации глюкозы.У крысы Ф 1 исходная концентрацияглюкозы, определяемая по методуКанторовича, составляет 85 мге Х, укрысы У 2 - 80 мг, Х. Сразу послевзятия крови крысе У 1 внутривенновводят 0,9 мг протамин-сульфата фир-.мы Р 1 пЕа А.1. (Швейцария) в объеме0,9 мл 0,853-ного раствора МаС 1 (чтосоответствует 1 мг протамин-сульфата на 200 г массы). Крысе В 2О 15 дозе, а контрольной группе -20 30 35.40 45 Составитель В, ФроловаТехред С.Иовжий Корректор И. Эрдейи Редактор А. Козориз Заказ 10694/39 Тираж 452 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5т Ужгород, ул. Проектная, 4 Филиал ППП "Патент", г. 3 11 для контроля вводят равный объем 0,85 Х-ного раствора ВаС 1. Через 30 мин обеим крысам внутривенно вводят инсулин в дозе 0,18 мг. Определение концентрации глюкозы через 30 мин после введения инсулина показывает, что у крысы У 2 она снижает-ся до 45 мг Х, в то время как у крысы У 1 не меняется (85 мгХ).П р и м е р 2. Опыт проведен ана.логично примеру 1, но протамин в сульфат в меньшей дозе (0,95 мг на 200 г массы вводят за 15 мин до инсулина)У самца крысы Р 3 массой 178 г исходная концентрация глюкозы в крови.95 мг Х, у самца В 4 массой 180 г - 100 мг Х. Самцу У 3 вводят внутривенно 0,85 иг протамин-сульфата в 0,9 мп 0,85 Х-ного раствора ЖаС 1, самцу В 4 .для контроля - 0,9 мл 0,85 Х-ного раствора МаС 1. Через 15 мин обоимсамцам вводят 0,18 мг инсулина. Спустя 30 мин после введения инсулина концентрация глюкозы в крови у самца 9 3 сохраняется на прежнем уровне (90 мг.Х), у самца к 4 - понижается до 60 мг Х).П р и м е р 3. Опыт проведен аналогично примеру 1, но протаминсульфат введен в меньшей дозе за 5 мин до инсулина. У самца В 5 массой 180 г исходная концентрация глюкозы в крови 96 мг Х, у самца Р 6 массой 182 г - 100 мг Х. Самцу В 5 вводят внутривенно 0,81 мг протаминсульфата (что соответствует 0,9 мг на 200 г массы) в 0,9 мп 0,85 Х-ного раствора ИаС 1, самцу Р 6 для контроля - 0,9 мг 0,85 Х-ного раствора ЯаС 1. Затем через 30 мин обоим самцам вводят 0,18 мг инсулина. Спустя 30 мин после введения инсулина концентрация глюкозы в крови у самца В 5 сохраняется на прежнем уровне .(96 мг.Х), у самца У 6 понижается до 60 мг Х.П р и м е р 4. Берут две группы самцов крыс со средней массой 180 г 38824 4по 12 штук в каждой. Первой группевнутривенно вводят одновременно0,9 мп 1 Х-ного раствора глюкозы и0,85 мг протамин-сульфата (что соответствует 0,95 мг на 200 г массы) в0,9 мп 0,85 Х-ного раствора ИаС 1, второй группе (контроль) - одновременно 0,9 мп 1 Х-ного раствора глюкозы и 0,9 мп 0,85 Х-ного раствора МаС 1.Учитывая, что резистентность к инсулину, вызванная протамин-сульфа- том, сохраняется в течение 30 мин, опытной группе животных через 20 мин после первого введения протамин-сульфата вводят его второй раз в той же 0,85 Х-ный раствор ИаС 1. Кровь дляопределения глюкозы берем через30 мин - 24 ч после введения глюкозы.Исходная концентрация глюкозы в крови в опытной группе составляет102 мг. Х, в контрольной 97 мг Х.Если принять исходную концентрацию глюкозы эа 100 Х, то у первой группы она через 30 мин составит 220,3+9,3; через 60 мин 187,6+15,9; через 2 ч 176,4+12,9; через 4 ч 167,4+8,5;через 24 ч 100 Х. У второй группы (контроль) соответственно 191,5+11,5;120,0+11,7; 114,9+12,9; 111,5+ 3,1) 100 Х.Предлагаемый способ моделирования реэистентности к гипогликомическому действию инсулина можно испольэовать при экспериментальном изучении клинических проявлений резистентности разного генеэа, таких как ожирение, акромегалия, синдром Кушинга, для которых характерно наличие нормальной или повышенной концентрации глюкозы в крови при повышенном содержании инсулина.Предлагаемый способ отличается простотой (однократное введение протамии-сульфата) и высокой (в отличие от известного способа) воспроизводимостью (в 100 Х случаев при воспроизводимости в ЗОХ в известном способе).