Штамм тэпв-2, используемый для идентификации и диагностики энтеропатогенных наг-вибрионов 2-го фаготипа

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН З(щ С 1219 7 ИС ЕН У СВИДЕТЕЛ В ТОРСИ ГОСУДАРСТВЕННЦЙ КОМИТЕТ СССР(71) Всесоюзный ордена ТрудовогоКрасного Знамени научно-исследовательский противочумный институт(56) 1. Авторское свидетельство СССРВ 586200, кл. С 12 В 7/00, 1977(54) ШТАММ ИСПОЛ ЬЗУЕМЫИ АНОСТИКИ ЭНТ РИОНОВ 2-ГО Ф (57) Штамм РЬ У Ф(колл Тбилисского н го института МЗ СССР), исп кации и диагн ных НАГ-вибри РНАСОМ СНО 1 ЕКЕСПМ ТЭПВ 2,ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ДИЕРОПАТОГЕННЫХ НАГ-ВИБАГОТИПА.арип спо 1 егдспа ТЭПВ екция бактериофагов аучно-исследовательсковакцин и сыворотокользуемый для идентифиостики энтеропатоген-.онов 2-го фаготипа.1 11200Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к ускоренной идентификации возбудителейострых кишечных заболеваний, вызванных вибрионами неагглютинирующнххолерной 0-1 сывороткой методомфаготипирования.Известен штамм РЬарип сЬо 1 еттсцш77 Ч 11 серотипа, активный к штаммам НАГ-вибрионов 56-го серовара 1 . 10Однако штамм РЬаяцш сЬо 1 егхсцш77 Ч 11 серотипа проявляет активность только к штаммам НАГ-вибрионов56-го серовара.Целью изобретения является получениештамма, позволяющего иденти-,фицировать и диагностировать энтеропатогенные НАГ-вибрионы 2-го фаготипа.Цель достигается с пояощью штамма РЬаяцш сЬо 1 еттсцш ТЗПВР ф"110выделенного путем селекции из Популяции музейного холерного фага А,Штамм РЬаяцш сЬо 1 егтсцш ТЭПВ депонированв коллекции бактериофагов 25Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сыворотокМЗ СССР В Ф, и характеризуетсяследующими свойствами.ШтаммРЬаяцш сЬо 1 еттсцш ТЗПВ относится к У 1 серологическому типу холерных Фагов по классификации,принятой в СССР.Морфологические признаки, фагТЭПВотносится к 111-у гомологическому ряду, Частицы Фага состоят из35головки гексагональной Формы размеромо498 х 464 А и короткого отростка 115 А,.Специфичность. Штамм РЬарзш сЬо 1 егхсцш ТЗПВспецифически активен к40штаммам энтеропатогенных вибрионов,не относящихся к 0-1 группе второгофаготипа, выделяемых от больных ОКЗ,из сточных вод и открытых водоемовв различных регионах СССР. Он абсо 45лютно инактивен к штаммам других ви 1дов вибрионов и близко родственныхмикроорганизмов Ч. рогаЬаешо 1 уЫсцз,Ч. а 18 по 1 утдсцз, Аетошопаз, Сошашо-.паз, Р 1 езтошопаз, Рзецдошопаз, Рго-гецз, ЕзсЬегтсЬа, Яа 1 шопе 11 а,3 Ь 18 е 1.1 а, А 1 са 1 дяепез СтггоЪастет,физиологические признаки. Фаг ТЭПВактивен в отношении штаммов вибрионов эльтор и НАГ, находящихся 55 в гладкой и К-формах,Оптимальная множественность инфицирования микробной клетки 0,118 2,0,2 при плотности посева 110 -21107 м.т./мл, Полный лизис в жидкойсреде при укаэанном соотношении наступает через 3-4 ч инкубации при370 С.Для штамма РЬарш сЬо 1 егтсцшТЭПВприменяют специально подобранные эталоннйй штамм ЧтЪгто сЬо 1 егаеК(145) .Размножение Фага ТЭПВ. Культуру штамма-продуцента Ч, сЬо 1 етаеК(145) отсевают на пластинку агараМартена рН 7,2-7,6 из 3-4 ч бульонной культуры, Через 18-20 ч инкубацииопри 37 С отбирают типичные колонии,отсевают их на косяк агара Мартена срН 7,2-7,6. Через 18-20 ч инкубациипри 37 С производят смыв выросшейкультуры на косом агаре 5-ю .мл бульона Мартена, затем 0,4 мл этого смывавносят в 100 мл подогретого в термостате бульона Мартена. Это обеспе-.чивает концентрацию 2 л 10 микробных клеток вибриона в 1 мл среды.Исходя из оптимальной множественности инфекции в бульон с культуройдобавляют маточный фаг,Содержимое засеянного флакона остброжно перемешивают и инкубируютфпри 37 С. За посевом ведут наблюде"ние. Наростание мутности бульонасвидетельствует о продолжающемся росте и размножении культуры микробно-,го штамма, Через 3-5 ч наступает просветление бульона с посевом на 34или 4+, что указывает на необходимость прекращения инкубации, Содержимое фильтруют через стерильные бакте,риальные свечи Лили Л,Отфильтрованный препарат проверяют на стерильность, активность и спе.цифичнос ть. и разливают з ампулы по 2 мл.Препарат в жидком виде хранят втечение 3-х лет при 4"10 С,оШтамм РЬаяцш сЬо 1 егтсцш ТЭПВ применяют для идентификации и диагностики штаммов энтеропатогенныхвибрионов 2-го фаготипа в разведениях. 10 - 10 . Расплавленный и остуженоный до 50 С 22-ный агар, приготовленный на любой основе: Мартена, Хоттингера, МП, прн рН 7,4-7,6 разливают в стерильные чашки Петри по 2025 мл. Застывший агар подсушивают30-40 мини вторым слоем наносяткультуру испытуемого штамма в 0,77агара с таким же рН. Затем на газонкультуры бактериологической петлей1120018 3нли репликатором наносят фаг по од" ной капле из всех разведений. Чашки, с подсохшими каплями закрывают крышками и инкубируют при 37 фС. Через 3- 4 ч можно учитывать результат, который отмечается появлением стериль" ныл пятен на газоне культуры вместах нанесения капель фага.Ю 4Использование штамма РЬаащп сЬо 1 е.гасив ТЭПВпозволит идентифицировать энтеропатогенные НАГ-вибрионы только 2 - го фа готипа и позво-.лит установить эпидсвязи в микроочагах между больными, а также между больными и внешней средой..Заказ 7693/21Тираж 521. Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д. 4/5 щаВ ю евое4 В ЪвФилиал ППП"Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4