Штамм тэпв-1, используемый для идентификации и диагностики энтеропатогенных наг-вибрионов 1-го фаготипа

ТЕНИЯ ЬСТВ В. Элькина, .К. Адамов а Трудового но-исследоный институт детельств 7/00, 197 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТН ОПИСАНИЕ ИЗ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ(46) 07.02.84. Бюл. .(72) Н.Ф. Быстрый, А Н.С. Солодовников и (71) Всесоюзный орде Красного Знамени иау вательский противочу(54) ШТАММ РНА 00 М СНОЬЕВХВУМ ТЭПВ ИСПОЛЬЗУЕМЦИ ДПЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИДИАГНОСТИКИ ЭНТЕРОПАТОГЕННЫХ НАГ-ВИБ"РИОНОВ 1-ГО ФАГОТИПА.(57) Штамм РЬавцш еЬо 1 егхсив ТЭПВ Ф(коллекция бактериофагов Тби",.лисского научно-исследовательскогоинститута вакцин и сывороток Ьинистерства здравоохранения СССР), ис-пользуемый для идентификации идиагностики энтеропатогенных НАГ-"Рзецсошопаз (31,) БСарЬу 1 ососсцв (5 ТЯЬде 11 а (427) Яа 1 шопе 11 а (354)С 1 СгоЬасСег (43) РгоСецз (30)к фагу ТЭПВне чувствительны.Использование штамма РЬаяцш сЬо 1 егсцш ТЭПВ.П р и м е р 1. Для размноженияфага культуру штамма-продуцента отсевают на пластинку агара Мартена,рН 7,2-7,6 и 3-4 ч бульонной куль туры. Через 18-20 ч инкубации при37 вС готовят 1-2 млрд взвесь агаровой культуры в бульоне и 0,5-1,0 ькее вносят во флакон со 100-150 млтого же подогретого в термостате 35 при 37 ф С бульона, Посев подращивают2-3 ч при 37 С до концентрации510 ц м. к,/мл. Исходя из оптимальной множественности инфекции 1:1или 1 г 2 добавляют Фаг ТЭПВво Фла 2 Е кон с культурой. Смесь Фага с культурой быстро переносят в бутыль,содержащую 1,5-2 л также подогретого при 37 С бульона Мартена, рН7,4-7,6, Все содержимое бутыли ос торожно перемешивают и инкубируютв термостате при 37 фС.За посевом ведут наблюдение, Нарастание мутности бульона свидетельствует о продолжающемся росте иразмножении культуры микробного штамма. Через 4-5 ч наступает просветление бульона с посевом на 3+ или 4+,это указывает на необходимость прекращения инкубации, Содержимое фильтруют через стерильные фарфоровые 35 свечи Ль или Лв или через асбестоВые пластины СФ фФильтровальный препарат проверяютна стерильность, активность и специфичность диапазона литического действия по известным методикам и разливают в ампулы по 2 мл. Препаратжидкий, хранят при 4-10 фС.П р и м е р 2, Штамм РЬаццш сЬо 1 егсцш ТЭПВиспользуется для инди" 45 кации и диагностики энтеропатогенных,.НАГ-вибрионов 1-го фаготипа. Расплав,ленный и остуженный до 50 С 1,5-2еагар на любой основе, рН 7,4-7,6,разливают в стерильные чашки Петрипо 20-25 мл и после застывания подсушивают 30 мин при 37 фС. В пробирки с 3 мл 0,7 агара, рН 7,2-7,6,, расплавленного на водяной бане и остуженного до 46 С, добавляют 0,20,3 мл 3-4-часовой бульонной культуры испытуемого штамма НАГ-вибрио-на, тщательно смешивают и быстровыливают на агаровую пластинку вчашку Петри. После его застыванияна газон культуры платиновой пет 60) 65 Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается созданиядиагностического штамма РЬакцш сЬо 1 ег 1 сцш ТЭПВ, используемого дляидентификации энтеропатогенных НАГ-вибрионов 1-го Фаготипа.Известен штамм РЬаяцш сЬо 1 ег 1 сцш "77 Ч 11 серотипа, используемый дляидентификаций НАГ-вибрионов 0-56серотипа 11,Однако данный штамм не позволяет идентифицировать НАГ-вибрионы1"го ФаготипаЦелью изобретения является получение нового штамма диагностического холерного фага ТЭПВ, используемогодля идентификации и диагностики НАГ-вибрионов 1-го Фаготипа.Штамм Фага РЬадцш сЬо 1 ег 1 сцшТЭПВвыделен путем селекции изпопуляции холерного Фага 111-госеротипа, хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского научно-исследовательского. института вакцин исывороток МЗ СССР под номером.Ф.Штамм Фага РЬаяцш сЬо 1 ег 1 сцшТЭПВхарактеризуется следующимикультурально-морфологическими признаками,Частица Фага состоит иэ головкигексагональной формы размером59045 А и короткого отростка115 А. Латентный период Фага ТЭПВ 50-55 мин при 100-200 мг аминногоазота в 1 мл среды, на которой онразмножается, При уменьшении до50 мг в 1 мл латентный период соответственно удлиняется до 65 мин.Оптимальная множественность инфекции 1:1 - 1:2 при концентрации,п 10микробных клеток в 1 мл среды. Наиндикаторной культуре фаг в агареМартена рН 7,4-7,6) через 18-24 чпри 3 С образует прозрачные разнойвеличины - 0,5-2 мм стерильные пятнаправильной округлой формы с четкоконтурируемыми краями.Штамм РЬадцш сЬо 1 егхсцш ТЭПВ характеризуется следующими Физическими свойствами. Высокоустойчив вхранении при 4-10 фС до трех леъ(срок наблюдения, при 22-2 бфС -до года, что делает его удобнымдля транспортировки,Для получения штамма РЬаяцш сЬо 1 егхсцш ТЭПВприменяют специальноподобранные штаммы ЧЬго Ба 8 600или Ч,Иа 205, высокочувствительныетолько .к фагу ТЭПВ.Штамм РЬабцш сЬо 1 ег 1 сцш ТЭПВ специфически активен в отношенииэнтеропатогенных НАГ-вибрионов1-го фаготипа, и абсолютйо неактивеи в отношении штаммов других видов вибрионов, Так, штаммы микроорганизмов Ч,РагаЬаешо 1 уСхсцз (58)Ч, А 181 по 1 уС 1 сцв (50) Аегошопаз (50 лей 2 мм или рецликатором наносят указанный фаг иэ всех разведений, После подсыхания капель чашку закрывают крышкой, переворачивают вверх дном и инкубируют при 37 С.в В случае необходимости получения1071635 Составитель М. БондареваРедактор М. Товтин Техред Л,Микеш, Корректор А. Ильин Заказ 45/20 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственноба комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж"35,Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ускоренного ответа, результат учитывают через 3-4 ч,:а при плановомобследовании допускается и позже,в пределах 18-20 ч. Оценку литического действия Фага ведут по 4-балльной системе: 4+ - сливной полныйливис, 3+ - множественные негативные колонии фага или полный ливиссо следами вторичного роста культуры вибриона, 2+ - изолированные не-гативные колонии Фага не менее 10)или пятно лизиса со значительным ростом вторичной культуры вибриона.Положительным считывают ливис культуры от капли Фага из любого разведения не ниже 2 Ф.5 Использование штамма РЬавиа сЬо 1 егсцщ ТЗПВпозволяет проводитьускоренную диагностику энтеропатогенных ЯАГ-вибрионов 1-го Фаготи"па и установить эпидсвязи в микрощ очагах между больными и внешней средой,