Способ определения групп гаптоглобина в крови

СОЮЗ СОНЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 09) (И) 9 А ц, еОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) 1. Определение типов гаптоглобина в жидкой крови. Методическоеписьмо МЗ СССР, М., 1970, с, 12(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППГАПТОГЛОБИНА В КРОВИ путем выделениясыворотки крови, добавления к нейгемолиэата эритроцитов и последующего электрофореза, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения, используют гемолиэат эритроцитов кровиисследуемого.Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и мажет быть использовано в медико- генетической и судебно-медицинской практике для определения групп 5 гаптоглобина в сыворотке крови человека.В настоящее время группу гаптоглобина определяют для медико-генетического консультирования в качестве генетических маркеров, а также в судебно-медицинской практике в случаях экспертизы спорного отцовства, материнства, замены детей.Гаптоглобин представляет собой сывороточный белок, связанный сглобулинами, группа гаптоглобина передается по наследству. Определение различных групп гаптоглобина основано на их электрофоретическом разделении в крахмальном или полиакриламидном геле. В связи с тем, что гаптоглобин не окрашивается, одновременно с ним производят электрофорез гемоглобина, который, связываясь с гаптоглобином, может быть окрашен с помощью бензидиновой реакции.Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ оп ределения группы гаптоглобина в крови. Перед определением группы гаптоглобина исследуемую сывортку обогащают гемоглобином. Для этого используют кровь доноров, желатель но с группой гаптоглобина 1-1.Кровь, взятую из пальца, центрифу.1гируют, насадочную жидкость отсасывают, эритроциты не менее 7 раз промывают физиологическим раствором, 40 а затем к осадку эритроцитов добавляют 3-4-кратное количество дистиллированной воды. Раствор гемоглобина сохраняют в холодильнике до 1 мес, К исследуемой сыворотке добавляют 45 приготовленный раствор гемоглобина в соотношении 10:1, после чего ставят в холодильник на 12 ч. Комплекс гаптотлобин - гемоглобин подвергают электрофорезу и окрашивают 2,57-ным 50 раствором бензидина в уксусной кислоте, а затем,в 0,37,.-ной перекиси водорода 11 .Известный метод определения групп гаптоглобина в сыворотке крови человека дает в ряде случаев сомнение в отношении правильной идентификации группы гаптоглобина. Затруднения в оценке электрофореграммы могутбыть отнесены за счет особенностейдонорского гемоглобина, который добавляют к исследуемым сывороткамдля связи с гаптоглобином. Во-первых, раствор гемоглобина может содержать гаптоглобин донора. Во-вторых, известен значительно выраженныйполиморфизм гемоглобина человека(более 40 видов), каждый из которыхможет отличасться различной электрофоретической подвижностью и способностью связываться с гаптоглобином.В-третьих, в процессе длительногохранения раствора донорского гомоглобина происходит изменение егосвойств, что также может отрицательно сказаться на результатах исследования. Все эти моменты могут в определенной мере исказить электрофореграмму, что приводит к затруднениям и ошйбкам при учете результатов исследования.Как показал опыт работы по определению групп гаптоглобина известным методом, частота сомнительныхрезультатов при его применении составила 233, что потребовало повторения исследования.Цель изобретения - повышение точности определения,Поставленная цель достигается тем.что согласно способу определениягрупп гаптоглобина в крови путем выделения сыворотки крови, добавленияк ней гемолизата эритроцитов и последующего электрофореза, используют гемолизат эритроцитов крови исследуемого.Способ осуществляют следующим об.разом.У обследуемого лица берут кровьв количестве 1-1,5 мл, центрифугируют, сыворотку переносят в пробирку, а оставшиеся в осадке эритроци-ты гемолизируют путем добавления 34-кратного количества дистиллированной воды, тщательно взбалтывают5 мин. К сыворотке добавляют полученный раствор гемоглобина в соотношении 10:1, помещают на 12 ч вхолодильник при 2-4 С, Электрофоретиоческое разделение, окраску и учетполученных результатов осуществляютпо известному способу,П р и м е р 1. Ребенок Г., 8 лет,история болезни 9 94, Взята кровь из пальца в количестве 1 мл в су-.1112279 Составитель В, КузьмичевРедактор Н. Джуган Техред С.Легеза Корректор М. Максимишинец Заказ б 449/29 Тираж 822 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул, Проектная,хую пробирку, отцентрифугирована при 80018-.20 в течение 15 мин Насадочную жидкость (сывортку) переносят в другую пробирку. К осадку эритроцитов добавляют 1,5 мл дистиллированной воды. К 10 каплям полученной в результате центрифугирования сыворотки добавляют 1 каплю гемолизата эритроцитов, содержащую раствор гемоглобина. Смесь выдерживают 1 О в холодильнике при. 4 С в течениеь12 ч. Электрофорез проводят в полиакриламидном геле, окрашивают бензидином, определена группа гаптоглобина 2-1, 5П р и м е р 2. Ребенок П., 3 года, акт В 223 от 14 июля 1981 года. Взята кровь в количестве 2 мл, отцентрифугирована при 80018-20 вО течение 15 мин. К 10 каплям получен ной сыворотки добавляют 1 каплю раствора гемоглобина с группой гаптоглобина 1-1. Смесь выдерживают в холодильнике при 4 оС в течение 12 ч Электрофорез проводят в полиакрила мццном геле, окрашивают бензидином. Вначале расположение линий на элект рофореграмме соответствовало группе гаптоглобина 2-2, а через 3 мин появилось дополнительное кольцо, изменившее характер электрофореграммы. Такой сомнительный результат не позволил диагностировать группу гаптоглобина у ребенка, в связи с чем возникла необходимость повторного исследования.Предлагаемым методом определения групп гаптоглобина в крови исследовано 643 лиц, из них более, чем 280 детей раннего возраста, При этом нечеткий результат получен у 19 лиц, что составляет 37 случаев. Это дало возможность значительно сократить затраты времени персонала на проведение повторных исследований у одного и того же лица.Таким образом применение изобретения позволило значительно (более, чем в 7 раз) снизить число сомнительных результатов, тем самым повысть точность метода определения группы гаптоглобина в крови.