Способ разделения гемоглобина крови на гем и глобин

.М 1 .ниллинен Тштки кус цине, а ости, и глобина ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Э.аоод ТесЬпо 1, 1981, У. 16, р, 81-91,Изобретение относится к меди именно к медицинской промышленн касается способа разделения гемо крови на гем и глобин.Цель изобретения - повышение концентрации гема и глобина.Способ осуществляется путем суспендирования клеток зритроцитов, отделенных от плазмы, в растворе кислоты, где гемоглобин диссоциируют на гем и глобин, иэ этого раствора гем осаждают водным раствором карбоксиметиллцеллюлозы, а глобин остается в растворе,П р и м е р 1, 100 г фракции эритроцитов, отделенных от плазмы, содержащей гемоглобин, причем общее содержание белка составляет 350 мг/г веса, разбавляют в 200 г воды и рН раствора доводят до 1,5 путем добавления 1,0 соляной кислоты. К данному раствору прибавляют 1,5%-ный раствор карбоксиметилцеллюлозц в воде в количестве, дающем массовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное(54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНА КРОВИ НА ГЕМ И ГЛОБИН(57) Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности; и касается разделения крови на гем и глобин. Целью изобретения является повышение концентрации гема и глобина. Способ осуществляется посредством диссоциации гемоглобина эритроцитов на гем и глобин и их разделения, при этом диссоциацию проводят в интервале рН 1,4 - 3,0, а разделение - осаждением водным раствором карбоксиметилцеллюлозы при соотношении осадителя и белка 1:75 - 1:10. 2 табл. около 1:10. Прибавление карбоксиметилцеллюлозы повышает величину рН, и путем прибавления гидроокиси натрия рН дово. дят до 2,4, Центрифугирование с силой, соответствующей 8000 д, в течение 15 мин приводит к получению 70% общего белка в растворе, который имеет концентрацию белка 4,0%. Используя силу центрифугирования, соответствующую 10000 д, в течение, 1 Я 30 мин выход белка можно повысить до . СО 85%, При использовании силы центрифуги- С) рования 1.0000 9 содержание железа осадка 0, составляет 1,8% и содержание белка осадка составляет 75%,Первоначальное количество белка и железа 35 и 0,158 г соответственно, На сухой ф основе общее количество белка и железа в геме состаляет 5,25 и 0,126 г соответственно. Общее количеоство карбоксиметилцеллюлозы составляет 3,5 г главным образом в фракции гема.П р и м е р 2. 100 г эритроцитов (300 мг белка/г), отделенных от плазмы, раэбавля1732806 10 20 25 30 35 45 50 Таблица 1 Выхо,Кон ент а иябелка. Ф ак ия белка 90 0,40 Во влажном состоянии ют 500 г воды, рН раствора доводят до 1,4 с помощью 1 М водного раствора соляной кислоты и добавляют 2,010 г 0,2-ного водного раствора карбоксиметил целлюлозы (класс замещения по крайней мере 1,1, весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку составляет около 1:75), рН доводят до 2,4 и смеси позволяют отстояться в течение 15 мин, Осажденный комплекс гем-карбоксиметилцеллюлоза отделяют от белкового раствора центрифугированием (2 х 1 ч, 15000 д). Результаты опытов приведены в табл,1 и 2.Первоначальное количество белка и железа составляет ЗО и 0,135 соответственно,Количество белка и железа после второго центрифугирования в фракции гема составляет 1,5 и 0,110 г соответственно.П р и м е р 3, 100 г фракции эритроцитов, отделенной от плазмы, причем общее содержание белка составляет 360 мг/г мокрой массы, разбавляют 200 г воды и рН раствора доводят до 1,8 путем добавления 1 М соляной кислоты. К этому раствору прибавляют 1 -н ый раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде, что дает весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное 1;20. После прибавления раствора карбоксиметилцеллюлозы рН доводят до 3,0 прибавлением 1 М гидроокиси натрия. После центрифугирования с силой 10000 д в течение 30 мин получают 70)ь общего белка в растворе, который имеет содержание белка 4,7. Содержание железа и белка осадка составляет 0,8 и 84; соответственно.Первоначальное количество белка и железа составляет 36 и 0,158 г соответственно. Количество белка и железа в фракциигема на сухой основе составляет 10,8 и 0,123г соответственно. П. р и м е.р 4 10 С г кровяных телец (300 40мг белка/г), отделенных от плазмы, разбавляют 500 г воды, рН раствора доводят с помощью 1 М водного раствора соляной кислоты до 1,4 и добавляют 201.0 г 0,02%-ного водного раствора КМЦ, Смесь оставляют стоять в течение 15 мин и осажденный гемКМЦ-комплекс отделяют от белкового раствор центрифугированием. П р и м е р 5, 100 г фракции гемоцитов,отделенной от плазмы и содержащей гемоглобин, общее содержание белка в котором составляет 350 мг/г влажного веса, разбавляют 200 г воды и показатель рН этого раствора доводят до 1,4.-1,5 посредством55 добавления 1,0 М раствора хлористоводородной кислоты, к этому раствору добавляют 1,5 М раствор карбоксиметилцеллюлозы (СМС) в воде в количестве, позволяющем достичь весового соотношения карбоксиметилцеллюлозы и белка, равное примерно 1:10. Добавление раствора карбоксиметилцеллюлозы увеличиваеет значение рН, и в результате добавления хлористоводородной кислоты или гидроокиси натрия гарантируется сохрнность показателя рН в интервале от 2,4 до 3,0, Обрзовавшийся осадок отделяют от раствора, центрифугируют с приложением силы, соответствующей .8000 д, в течение 15 мин. 70% общего содержания белка получают в растворе, концентрация белка в котором равнялась 4,0 с использованием центробежной силы, соответствующей 10000 д в течение 30 мин, при этом выход белка. можно увеличить до 85. Осадок можно использовать в качестве лрепарата гема либо гем можно выделить из этого осадка. При использовании центробежной силы, равной 10000 д, содержание железа в осадке равнялось 1,8, а содержание белка 75 ф,П р, и м е р 6. 100 г гемоглобинсодержащей фракции эритроцитов, (350 мг белка/г) отделенной от плазмы, разбавляют с помощью 200 г воды и рН полученного раствора доводят соляной кислотой до столь низкого значения, что рН этого раствора при добавлении 230 г 1,5/-водного раствора карбоксиметилцеллюлозы оставался ниже 3, Полученный осадок отделяют от раствора центрифугированием (8000 д, 15 мин). Перед центрифугированием рН должен быть в интервале 2,2 - 3,0, чтобы обеспечить осаждение карбоксиметилцеллюлозойПо известному способу окончательная концентрация белка равна 0,038, выход 67, раствор гема получен разбавлением и требует дополнительной концентрации,Формула и зоб рете н ия Способ разделения гемоглобина крови на гем и глобин путем диссоциации гемоглобина эритроцитов и разделения гема и гло.- . бина,отличающийся тем,что,сцелью повышения концентрации гема и глобина, диссоциацию проводят в интервале рН 1.,4- .3,0, а разделение - осаждением водным раствором карбоксиметилцеллюлоэы при соотношении осадителя к белку 1:75 - 1:10.1732806 Таблица 2 Фра.кция гема Концентрация железа,Концентрация белка, 6 На с хой основе 3,50 50 Составитель С. МельниковаТехред М.Моргентал Корректор -Т. Палий Редактор Н, Яцола Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина, 101 Заказ 1592 Тираж Подписное . ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5