Способ стимуляции митотической пролифирации гепатоцитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9 В 23/28; А 61 МИТЕТ СССРИЙ И ОТКРЫТИЙ УДАРСТВЕННЫ ДЕЛАМ ИЗОБР О РЕТЕ ЬСТ юл, В 17в, В,В,Сад(54)(57) СПОСОБ СТИМУ КОИ ПРОЛИФЕРАЦИИ ГЕПА чающий резекцию доли дующим воздействием н нитным полем, о т л и тем, что,с целью увел ва митозов, через 10- зекции на животное в постоянным магнитным напряженностью 500 - ностью 30 - 60 мин. ЛЯЦИИ МИТОТИЧЕС ТОЦИТОВ, вклюпечени с после- а животное магч а ю щ и й с ичения количест ч после реоздействуютполем с1 ООО Э дп льИзобретение относится к экспериментальной биологии и может быть использовано для изучения цитологичес ких механизмов митотического деления клеток.Известен способ стимуляции митотической пролиферации гепатоцитов, включающий резекцию доли печени с последующим воздействием на животное магнитным полем 13. Однако при данном способе образуется небольшое количество митозов,что ограничивает его испсльзование.Цель изобретения е- увеличение количества митозов,Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу стимуляциимитотической пролиферацик гепатоцитов, включающему резекпию доли печени с последующим воздействием на животное магнитным нолем, через 10-12 чпосле резекции на животное воздействуют постоянным после с напряженностью500-1000 Э длительностью 30-60 мин.Предлагаемый способ осуществляютследующим образом,Животное Фиксируют, дьпот эфирныйнаркозНа брюшной стороне по белойлинии живота делают разрез 2-3 см30производят вскрытие брюшной полости,Затем перевязывают лигатурой левуюбоковую и центральные доли печении отсекают их. Затем через разныевременные интервалы с момента операции животных подвергают воздей-ствию постоянного магнитного поляв течение 30-60 мин, С зой цельюэкспериментальную группу животных(одновременно 5 крыс) помещают вэлектромагнитное поле, Эффект про- фявляется после первой пропедуры,Дальнейшее воздействие постоянногомагнитного полн повышения митотического индекса не дает.П р и м е р . Крысу весом 200 г привязывают эа четыре конечности к деревянной доске брюшной стороной кверху. Дают эфирный наркоз масочным способом в течение 1-2 мин, готовят операционное поле размером 60 я 30 мм, Выше мечевидного отростка на Г см и вниз на 5 см вьпципывают шерсть, Смазывают кожу йодом, покрывают животное стерильной салфеткой и зажимами Фиксируют ее к коже в области 55 операционного поля. Дают эфирный наркоз в течение 2-3 мин, На брюшной стороне по белой линии живота делают 214 2разрез величиной 2-3 см, Послойно разрезают кожу, апоневроз мьппцы, Рану расширяют и выводят центральную долю печени. Ее перевязьвают стерильным лигатурным шелком и отсекают. В брюшную полость вводят раствор пенициллина в коли:.естве 1 мл - 1000 ед, Ткани послойно зашивают непрерывным швом. В качестве шовного материала используют стерильный щелк Р 2 или В 3. Кожу в области шва смазывают Йодом. Животное отвязывают и помещают в клетку. Через 6 ч после операции животное помещают в электромагнитное поле на 60 мин. Электромагнит СПс плоскими параллельными полюсными наконечниками размерами 400 к 300 мм, расстояние между ними составляет 100 мм. Индуцированное магнитное поле практически однородно в центральной области межполюсного пространства размером 300 х 200 мм В качестве источника питания используется собранный по двухполупериодной схеме выпрямитель, в который для уменьшения пульсации включается емкостная батарея величиной около 20 000 мкфЛивотных помещают в зазор магнита в плексиглазовых клетках. Через сутки животное забивают. Кусочки печени фиксируют в жидкости карнуа и в Формалине, заливают в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивают гематокснлин-эозином, Средняя величина митотнческого индекса 106 Е, т,е. оздана модель митотической пролиферации с большим количеством митозов,что дает возможность наблюдать клетки, находящиеся на любой стадии деления. Модель используется для изучения цитологических механизмов развития и регенерации клеток, тканей, органов и организма.Предлагаемым способом в течение 8 мес проведсно исследование митотической пролиферации гепатоцитов на 100 белых беспородных крысах весом 120-200 г, Контрольная группа животных после гепатзктомии воздействию постоянного магнитного поля не под.вергалась",;Об интенсивности пролиФерации в печени судили по величине митотического индекса количество митозов на 1000 клеток)Операцию и забои животных производили с 8 до 9 ч утра, Животных забиЗаказ 3086/48 Тираж 447 Подписное ВНИИПИ 1 осударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул, Проектная, 4 3 1091вали ежедневно в течение шести дней,начиная с первых суток после резекции печени,У экспериментальных животных,подвергавшихся воздействию магнитного поля, наибольший пик митотическойактивности гепатоцитов отмечалсяуже через 24 ч после резекции (сдвигвлево) по сравнению с контрольнойгруппой, у которой максимум митоти- Оческой активности наблюдается на вторые сутки после гепатэктомии.Предлагаемый способ эффективен,Судя по митотическому индексу, который является объективным критерием 1оценки клеточного деления, интенсивность митотической пролиферации возрастает в 5 раз по сравнению с стимуляцией только резекцией печени, а 214 4следовательно, и с прототипом (так как в прототипе митотическая активность та же, что и при действии одной резекции).Предлагаемый способ непродолжителен во времени. Для достижения эффекта достаточно одной процедуры продолнжительностью 30-60 мин.Предлагаемый способ надежен, Стимуляция митотичеакой пролиферации гепатоцитов наблюдалось в 1003 случаев, Минимальное значение величины мнтотического индекса после стимуляции предлагаемым способом составляло 94,27., максимальное повышение ми,тотического индекса - до 141,27,Предлагаемый способ прост, не требует для своего осуществления редкой и дорогостояшей аппаратуры.