Питательная среда для идентификации и межродовой и внутриродовой дифференциации бактерий

СОЮЗ СОВЕТСКИХОаивмбаюажРЕСПУБЛИК ав (И 1 МЮ С 12 О 1 04 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ,1(71) Московский ордена ТрудовогоКрасного Знамени научно-исследова,тельский институт гигиены нм,Ф.Ф,Эрисмана(56) 1. Авторское свидетельство СССРР 610863, кл, С 12 9 1/54, 1977.2. 81 пдег д. Сц 11 цге оЕ Еп 1 егоЬассег 1 асеае 1. 0 ейесг 1 оп оХ цгеазеапд 1 пйо 1 1 п а з 1 пд 1 е вей 1 цш. Авег 1 сап .1 оипа 1 оЕ С 11 пц.са 1 РаЮо 1 оду,1951, ч.21 р. 987,3. СЬаы С. С 1 агйе Р. В 1 осЬею 1 са 1с 1 азэ 1 г 1 са 11 оп ой РгоВецз апй Ргоч 1 йепсе Сц 1 сцгев. доцгпа 1 Оепега 1М 1 сгоЬо 16 ду 1955, ч, 13, р. 155.(54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ИДЕНТИФ 11 КАЦИИ И МЕЖРОДОВОЙ И ВНУТРИРОДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БАКТЕРИЙ РВОТЕПЯРВОЧ 1 С 1 ЕИС 1 А, эаключающафся в том,что она содержит два слоя, при этомв верхнем слоев она содержит агар,ВаС 1, На (НН)НРО, тиосульфат натрия, 01-триптофаи, дрожжевой экстракт жидкий,.жрожжевой экстракт сухой, воду, в нижнем слое - агар, НаС 1, . КНРО 4 рКН .РО 4 р ГлюкозУ р пептон у мочевину, нейтральный красный воду при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас.В:Верхний слой:Агар 0,5-0,9ВаС 1 0,4-0,6Юа(МН) НРО 0,08-1,2Тиосульфат.йатрия 0,05-0,150 Ь=Триптофан 0;1-0,3Дрожжевой экстракт жидкий 3,0-27,0Дрожжевой экстракт сухой 0,2"0,4 ЯВода ОстальноеНижний слойгАгар ,0,4-0,8ИаС 1 0,4"0,6 СК НЩ 006-014КЙ РО.0,04-0,08 , ФГлюкоза 0,1-0,2Пептон 0 05-0,15Мочевина 0,8-1 ю 2НейтральныйкрасныйВода 0,002-0,01Остальное1 О 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ощ 3,0-27,0 0,4-0,80,4-0,60,06-0,140,04-0,080,1-0,20,05-0,150,08-1,2 Изобретение относится к микробиологии, в частности к санитарноймикробиологии.Известна питательная среда дляиндентификации грамотрицательныхмикроорганизмов, позволяющая одновременно выявлять шесть биохимических признаков 1).Известна также питательная средадля определения уреазной активностии продукции индола ( 2),Известна также питательная средадля одновременного определения фенилаланин-деаминазы и гидролиэамалоната натрия 3 ).Однако известные среды не позволяют одновременно выявлять всебиохимические признаки, необходимыедля идентификации и межродовой ивнутриродовой дифференциации бактерий Рго 1 еця-Ргоу 1 йепсХа 1.Цель изобретения создание питательной среды для идентификации имежродовой и внутриродовой дифференциации бактерийРгоСеця-РгоуЫепс 1 а 1Цель достигается тем, что созданапитательная среда для идентификации и внутриродоной дифференциациибактерий Рго 1 еия-Ргоу 1 йепс 1 ае,. заключающийся н том, что она содержит. два слоя, при этом в верхнем слоеона содержит агар, ИаС 1, Юа(ИН 4) НРО 4тиосульфат натрия, РЬ-триптофан,дрожжевой экстракт жидкий, дрожжевой экстракт сухой и воду, а в нижнем слоев - агар, ИаС 1, КНРО 4,КН 2 Р 04, глюкозу, пептон, моченину,нейтральный красный и воду при следующем количественном соотношенииингредиентов, мас.Ъ:Верхний, слой:Агар 0,5-0,9ИаС 1 0,4-0,6Иа (ЙН 4) НРО О, 08-1, 2Тиосульфатнатрия 0,05-0,15РЬ-триптофан 0,1-0,3дрожжевойэкстрактжидкийДрожжевойэкстрактсухой 0,2-0,4Вола ОстальноеНижний слойАгарМаС 1К НРО 4.КН 2 РО 4ГлюкозаПептонМоченинаНейтральныйкрасный 0,002-0 р 01Вода,. ОстальноеП р и м е рПриготовлениесреды. Ингредиенты нижнего слоя, крме мочевины, стерилиэуют прил 0,5 атм 15 мин, прибавляют 50-йый водный раствор мочевины ( самостерилиэуется после 1-3 сут. выдерживания при комнатной температуре), разливают асептично по 3 мл в пробирки, охлаждают в вертикальном положении.Ингредиенты верхнего слоя, крометриптофана и тиосульфата натрия,стерилиэуют при 0,5 атм 15 мин, прибавляют типтофан и тиосульфат натрия, растворенные и прокипяченные в .небольшом количестве воды, смешива"ют, разливают поверх нижнего слояпо б мл, охлаждают н .положении,при котором образуется столбиквысотой, равной нысоте столбиканижнего слоя, и небольшая скошеннаяповерхность. П р и м е р. Использование среды и учет результатов. Посев свежей (суточной) культуры испытуемого микроба или колонии с чашки с питательной электинной средой осуществляют штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик до дна пробирки. После посева между пробкой и стенкой пробирки вставляют реактивную бумагу на индол, инкубируют при 35-37 С 18-20 ч. Учитывают в нижнем слое расщепление моченины (окрашивание в желтый или оранжевый цвет), образование газа н виде пузырьков и .олще среды или разрывов среды (ферментация клюкоэы с образованием газа видом Провиденция алкалифациенс: представители рода Протеус газ н этих условиях не образуют за,счет интерференции Ферментации глюкозы и уреазной активности); учитывают реакцию на индол ( красное окрашивание реактивной бумаги). Затем осторожно по стенке пробирки, противоположной скошенной поверхности, наливают 0,5 мл раствора - хлорида железа (1 и ) (РеС 13) 3,0; соляной кислоты 1,3, остальное - вода, Положительная реакция на триптофан-деаминазу проявляется н первоначально оранжевом, а затем вишневекрасном окрашивании смеси конденсациооной жидкости с реактивом и подлежащего слоя среды, наиболее интенсивно у Пр. мирабилис, менее интенсивно у Пр. вульгарис и Провиденция и ввиде оранжевого окрашиванин остается у Пр. моргании и Пр. реттгери. Отрицательная реакция у прочих представителей семейств энтеробактерий, вибрионов, псевдо- монад - желтое окрашинание, почти незаметное в подлежащем слое среды. Окрашивание наступает сразу после прибавления реактива, полной силы набирает после 2-3 ч пребывания при комнатной температуре. Для ускорения появления окрашивания можно по.местить среду в термостат при 37 фС на 1-1,5 ч, В это время, а при ком" натной температуре через 3-4 ч в столбике, образованном верхним слоем, непосредственно под началом скошенной поверхности в результате диффузии хлорида железа в толщу агара появляются вначале небольшие (точечные) участки черного цвета, переходящие в серпообразные полоски, переходящие через 4-5 ч в кольца значи- Ю тельной ширины Но уже по образованию первичной узкой черной полосы можно судить о продукции. НЗ.Для выявления деаминаэы и сероводорода используется моднцифнрован Ино- Адо- Иальзит нит тоэа Деа- уреН Я Индол Газмина- аза аэа Микробы РгокецяпцгаЬ 113.я РгоСецячц 1 даг 1 я Рго 1 ецявогдап 11Ргокеця ге 11дег 1 РгочЫепс 1 аа 1 са 1 з.йас 1 епяРгоч 1 йепс 1 ая 1 цаг 111+е ЕясЬег 1 сЫасо 11 СЫгоЬасгегЙгецпЫ 1 Еп 1 егоЬас 1 екаегодепея Е 1 еЬя 1 е 11 арпецпюпз.а е Найп 1 а аЬче 1 ЕдиагО 1 е 11 амагда ных тестов на группу Протеус Провиденция в бактериологических лабораториях при обнаружении представителей этой группы в окружающей средеи в целях усовершенствования, облегчения и ускорения диагностики заболеваний, вызываемых бактериями груп пы Протеус Провиденция. ВНИИПИ Заказ 5759/23 Тираж 523 Подписное Филиал ППП "Патентф, г.ужгород,ул.Проектная,4 Сравнение результатов, полученных при посеве в предлагаемую среду, с посевом кондиционнъми способами, показывает их совпадение в 90-98. Предлагаемая среда позволяет испольэовать в одной емкости 5 основный реактив 81 пдек Чо 1 сап 1,о содержащий мас.Ъ: хлорнд железа Й 1) 13,0; соляная кнслотв 1,3; вода остальное,Для выявления продукции индола используется полоска бумаги, пропитанная модифицированным реактивом 61111 ез, мас.%: пара-диметиламинобензальдегид 7,7; ортофосфорная кислота 15,3; остальное изоамиловый спирт. Раствором пропитывают фильтровальную бумагу, подсушивают при комнатной температуре, нарезают на полоски 0,5-5,0 см.