Способ получения капсульного антигена

товарным знакам по патента 2) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ(Ч е омитет Российской Федерации к авторскому свидетельству(72) Платэ Н.А Левина Л.А., Чупов В,В Каверина К.Г., Валуев Л.И Крейнин Л,С. (71) Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им,И,И,Мечникова, Московский государственный университет им,М.В.Ломоносова(57) Способ получения капсульного антигена, включающий обработку водного экстракта взвеси капсульных бактерий, элюцию, диализ и лиофилизацию целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта и упрощения способа, водные экстракты обрабатывают хлора нгид ридом акриловой или метакриловой кислоты при массовом соотношении сухого водного экстракта и хлорангидрида 1 : 5 - 10 при 020 С, затем полученный ацилированный антиген подвергают сополимеризации с гидрофильным мономером в соотношении 15 - 10 в присутствии 0,5 - 2,0 мас.ч. бифункционального мономера-сшивателя и целевой продукт элюируют из измельченного геля.Изобретение относится к иммунологии.Известен способ получения капсульного антигена, заключающийся в том, что исходный экстракт осаждают 70-ным этанолом при 4 С, оставляют на 20 ч, затем центрифугируют, осадок растворяют в деионизированной воде и ступенчато хроматографируют на колонках с диэтиламиноэтилцеллюлозой, целевой продукт преципитируют этанолом и гомогенизируют хлороформом и трет-бутанолом 1,Известен также способ получения капсульного антигена, включающий обработку водного экстракта взвеси капсульных бактерий (концентрирование, добавление 0,4 н. ХаС 1, хроматографирование, элюцию, диализ и лиофилизацию целевого продукта 2.Однако известные способы не обеспечивают высокой чистоты целевого продукта, так как присутствуют примеси О-антигена, трудоемки и многостадийны.Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта и упрощение способа.Цель достигается тем, что в способе получения капсульного антигена, включающем обработку водного экстракта взвеси капсульных бактерий, элюцию, диал из и лиофилизацию целевого продукта, отличием является то, что водные экстракты обрабатывают хлорангидридом акриловой или метакриловой кислоты при весовом соотношении сухого водного экстракта и хлорангидрида 1 : 5-10 при температуре от 0 до 20 С, затем полученный ацилированный антиген подвергают сополимеризации с гидрофильным мономером в соотношении 15-10 в присутствии 0,5-2,0 мас. ч. бифункционального мономера-сшив ателя и целевой продукт элюируют из измельченного геля,Пример. 10 г высушенных ацетоном капсульных бактерий Е.со 1. К 100 суспендируют в 100 мл дистиллированной воды во фланцах со стеклянными бусами, встряхивают на шуттель-аппарате в течение 1 ч. Суспензию центрифуги руют в течение 50 мин при 5 тыс. об/мин и собирают надосадочную жидкость. Осадок ресуспендируют аналогичным образом. Обе порции надосадочной жидкости объединяют, диализуют против водопроводной и дистиллированной воды и лиофилизируют. Выход антигенного комплекса составляет 20/ от исходного веса лиофилизированных микробных клеток.0,3 г антигенного комплекса растворяют в 10 мл дистиллированной воды, охлаждают до 0 С и в течение получаса по каплям вводят 1,5 г хлорангидрида акриловой кислоты. Раствор доводят до комнатной температуры, добавляют 1,5 г акриламида и 0,15 г Х,Х-метиленбисакриламида и продувают аргоном в течение 10-15 мин, полимеризуют в присутствии персульфата аммония и Х,Х,Х,Х -тетраметилэтилендиамина в течение 1 ч. Полученный гель измельчают на нейлоновых ситах, заливают 50 мл дистиллированной воды, шуттелируют 20 мин и фильтруют через фильтровальную бумагу на воронке Бюхнера. Элюат диализуют против проточной воды в течение трех суток и против сменяемой не менее трех раз дистиллированной воды в течение суток и лиофильно высушивают. Выход целевого продукта составляет 39-66; от взятого в опыт количества водного экстракта.Иммунохимическую специфичность и антигенную активность препарата определяют в реакции преципитации в геле, в опытах иммуноэлектрофореза и встречного иммуноэлектрофореза, а также в реакциях непрямой гемагглютинации (РНГА) и торможения непрямой генагглютинации (РТНГА). Водный экстракт и целовой продукт исследуют в параллельных опытах. Как видно из таблицы, в опытах иммунодиффузии и иммуноэлектрофореза в целевом продукте, в отличие от водного экстракта, не выявлялись фракции, соответствующие О-антигену. При иммуноэлектрофорезе целевой продукт не образовывал преципитатов с О-сывороткой и образовывал одну зону преципитации в сторону анода с К-сывороткой. В опытах встречного иммуноэлектрофореза оптимальная доза в опытах с К-сыворотками у целевого продукта составляла 20 мкг, а у водного экстракта 64 мкг, Целевой продукт (К-антиген), в отличие от водного экстракта, не обуславливает преципитатов в опытах встречного иммуноэлектрофореза с О-сыворотками. Целевой продукт в отличие от водного экстракта не сенсибилизирует формалинизированные тонизированные эритроциты барана. В опытах торможения непрямой гемагглютинации минимальная тормозящая доза для целевого продукта превышает 1 мг/мл, а для водного экстракта она составляет 0,015 мг/мл в опытах с К-сывороткой и 0,03 мг/мл в опытах с О-сывороткой.Аналогичным способом получают К-анти- гены из Нлп 11 цепгае типа Ь, Вц-антигены из Б, 1 урЫ. Антигены по иммунохимической характеристике и биологической активности1022361 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Иммунохимическая характеристика целевого продукта(К-антигена) в сравнении с водным экстрактом капсульных бактерий Е,со, К 100Параметр Заказ ВНИИПИ, Рег, ЛР113834, ГСП, Москва, Р ПодписноеХо 040720ушская наб.,1873, Москва, Бережковская наб., 24 стр.Производственное предприятие Патент не отличались от К-антигенов, полученныхболее сложными способами.Предлагаемый способ позволяет получатькапсульные антигены полисахаридной прироСпособ получения капсульного антигена, включающий обработку водного экстракта взвеси капсульных бактерий, элюцию, диализ и лиофилизацию целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта и упрощения способа, водные экстракты обрабатывают хлорангидридом акриловой или метакриловой кислоты при массовом соотношении сухого Наличие зон преципитации прииммунодиффузииНаличие зон преципитации при им муноэлектрофорезе Оптимальная доза при встречном иммуноэлектрофорезе, мкгlмл Минимальные тормозящие дозы в РТНГА, мгlмлСпособность сенсибилизировать тонизированные бараньи эритро- циты римечание:+ наличие эффекга; - отсутствие ды, не содержащие примеси О-антигена, более простым способом из различных видов капсульных микроорганизмов. водного экстракта и хлорангидрида 1: 5 - 10 при 0 - 20 С, затем полученный ацилированный антиген подвергают сополимеризации с гидрофильным мономером в соотношении 1: 5 - 10 в присутствии 0,52,0 мас,ч. бифункционального мономерасшивателя и целевой продукт элюируют из измельченного геля.