Способ получения моноспецифической сыворотки

СОЮЗ СОВЕТСНИХССЦЮ 4 МРВЦИаюРЕСПЯУЗИН А ОПИСА Н АВТОРСН БРЕТ ЬСТВУ 3(71) 1-й Иосковси ордена трудовомедйцинский инстнова(54) (57) 1 . СПОССПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫ Бвл. В 1,9в и М.И; Кармановкнй ордена Ленинаго Красного Знамени . итут им. И.М, Сече 888)А.я, Антииммуногло-. а", 1978., Язова А К. БвллеальНОй .биологии и9. 4,. с. 120.ОБ.ПОЛУЧЕНИЯ МОНОВОРОТКИ путем имму-. низации животных-продуцентов комплексом антиген-антитело, с последующим кровопусканием и отделением це.левого продукта, о т л н ч а вц и й с я тем, что, с целью повышения .специфической активности целе-. вого продукта, лосле.первой инъекции комплексом антиген-антитело извлекают иммуинув сыворотку, обраба.тывают ее специфическим антигеном и.полученный комплекс вводят тому ие иивотному-продуценту.2.: Способ цо и. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что комплекс антигенаититело вводят пятикратно с интервалом меаду инъекциями 10 дней.Изобретение относится к иммуноло гии и может быть использовано в производстве диагностических сывороток заданной специфичности.Известен способ получения преципитирующих сывороток узкой специ фичности, заключающийся в том, что животному- продуценту многократно вводят растворимый антиген с интервалом не менее 10 дней и полученную от него сыворотку сорбируют гетерологич ным антигеном 1 .Известен также способ получения моноспецифической сыворотки путем иммунизации животных-продуцентов комплексом антиген-антитело полученным путем препаративного;выделения последнего из иммуноэлектрофореграммы с последующим кровопусканием и отделением целевого продукта 2 3Однако известные способы не обеспечивают высокой специфической актив ности целевого продукта.Целью изобретения является повышение специфической активности целевого продукта.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу. получения моноспецифической сйворотки путем иммунизации животных-продуцентов комплексом антиген-антитело, с последующим кровопусканием и отделением 30 целевого продукта, после первой инъек-, ции комплексом антиген-антитело извле-, кают иммунную сыворотку, обрабатывают ее специфическим антигеном и полученный комплекс вводят тому же 35 животному-продуценту.Кроме того, комплекс антиген-антитело вводят пятикратно с интерва-.лом между инъекциями 10 дней.40Способ осуществляется следующим образом,Предварительно животное-продуцент иммуниэируют заданным антигеном по .общепринятому методу. Затем от животного берут кровь, выделяют иммунную сыворотку, сорбируют ее гетерологичным антигеном, после чего формируют преципитат с заданным антигеном. Этот преципитат используют для реиммунизации того же животного-продуцента. Вышеописанную операцию повторяют перед каждой последующей реиммунизациейП р и м е р 1. Общепринятым мето 55 дом получают сорбированную серым веществом мозга кролика иммунную сыворотку морской свинки к белому ве-.ществу головного мозга кролика, выявляющую данный антиген в концентра- . 60 ции не менее 0,2204 мг/мл. Последнюю используют для получения преципитата из экстракта белого вещества мозга кролика. Им осуществляютначальную иммунизацию основного жи" 65 вотного-продуцента, Через 1 о дней у животного-продуцента забирают 3 мп крови, выделяют сыворотку, смешивают ее в равном объеме сгомогенатом серого вещества, мозга кролика, инкубируют 2 ч при 37 С и 18 ч выдерживают при +4 оС, центрифугируют, собирают супернатант. К супернатанту добавляют водно-солевой экстракт белого вещества мозга кролика, вышеописанным способом инкубируют и после 20 минутного центрифугирования при 5000 об/мин "отделяют сформировавшийся преципитат, который используют для реиммуниэации того же самого животного-продуцента. Через каждые 10 дней описанную .процедуру повторяют После пятикратной реиммунизации животное обескровливается, Целевой продукт (сыворотка к белому веществу мозга кролика ) в реакции двойной иммунодиффузии выявляет один компонент в экстракте белого вещества мозга кролика и не реагирует с серым веществом. В непрямом иммунолюминесцентном методе полученная сыворотка взаимодействует с глиальными элементами подкорковых структур, но не связывается с нервными клетками. Сыворотка морской свинки, иммунизированной по предлагаемой схеме, выявляет специфический компонент белого вещества мозга кролика в концентрации 0,0072 мг/мл 1 по белку ), т.е. ее специфическая активность более чем в 30 раз выше, чем у сыворотки, получаемой ранее описанными методами.П р и м е р 2. Используя общепринятую схему иммунизации, получают сыворотку к комерческому препарату Ви-антигена брюшнотифозных бактерий. При этом, после пятикратной реиммуниэации получают сыворотку с титром 1/320 в реакции пассивной гемагглюти-. нацииРПГА). Следует отметить, что в динамике иммунного ответа титр 1/320 был достигнут уже после второй иммунизации животного-продуцента, а последующие введения антигена не дали дальнейшего повышения титра. В реакции двойной иммунодиффузии укаэанная сыворотка взаимодействовала с исходным антигенным материалом, образуя две линии преципитации. Одна из них идентифицировалась с Ви-антигеном, другая с О-антигеном брюшнотифозных бактерий. На тот же препарат Ви-антигена получают сыворотку по предлагаемому способу, т.е. пятикратную реиммунизацию животного-продуцента осуществляют специфическим преципи татом, образовавшимся при добавлении Ви-антигена к взятой от животногопродуцента его же собственной иммунной сыворотки, предварительно сорбированный О-антигеном брюшнотифоэных бактерий. В результате пятикратной реиммунизации животного получают1018 б 43 Составитель В. Дроздов .Редактор Ан. Шандор Техред Е.Харитончик Еорректор М. Шарощи Заказ. 3575/3Тираж 713 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4сыворотку к Ви-антигену брюшнотифозных бактерий с титром 1/1280 (в РПГА ),не выявлявшую 0-антиген в реакциииммунодиффузии. Использование предлагаемого изобретения позволит повысить специфическую активность диагностических сывороток в процессе их производства.