Питательная среда для дифференциации флуоресцирующих псевдомонад от неферментирующих грамотрицательных бактерий

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 3(50 С 12 АНИЕ ИЗОБРЕТЕН13ский, Н.Н. Си .Е. Еременко кии институ и меди- И Сецевательлечении им. 8,8) "Лаб аторно А. Клю луресц пасеае в 1973 для опредеующих бак- "Мкроб 1 оло" 3, с. 367 ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬГТИЙ ОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) 1. Мороз А.ф.дело", 1976, 8 5.2. Киприанова Оления сапрофитныхтерий рода Рзе 0 дощг 1 чний журнал", Ки369 (прототип),ЯО 1010129(54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ФЛУОРЕСЦИРУОЦИХ ПСЕВДО" МОНАД ОТ НЕФЕРМЕНТИРУЮЩИХ ГРАМОТРИЦА, ТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ) содержащая сухой питательный агар, селективный агент и воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения точности диф" ференциации в качестве селективного агента она содержит 2-изопропил"5-метил-фенол при следующем количествен" ном соотношении компонентов:Сухой питательный агар 5,0-7,5 г 2-Изопропил-метил-фенол 30-300 мг Вода До 100 мл10101 5,0-75 г П р и м. е р 2. Приготовление полужидкой среды. 1Изобретение относится к микробиологии, в частности к бактериологической диагностике, и касается создания питательной среды для дифференциации флуоресцирующих псевдомонад от неферментирующих грам-отрицательных бактерий.Известна питательная среда для дифференциации Рэевдовопаэ аегы 01- поза от других флуоресцирующих псевдо.10 монад, содержащая в качестве селективного агента М-цетилпиридиний хлорид и калиевую соль фенозана.Однако зта среда селективна только вотношении Рэеидоеопаэ аегд 91 поэаИзвестна также питательная среда для дифференциации флуоресцрующих псевдомонад от неферментирующих грамотрицательных бактерий содержащая сухой питательный агар, селективный агент - яичный белок и воду 21.Однако данная среда не обеспечивает высокой точности дифференциации.Целью изобретения является повышение точности дифференциацииЭта цель достигается тем, что в пи. тательной среде, содержащей сухой питательный агар, селективный агент и воду, в качестве селективного агента она содержит 2-изопропил-ме 30 тил"фенол при следующем количественном соотношении компонентов:Сухой питательныйагар2-Изопропил-метил-фенол 30-300 мг з 5Вода До 100 млПитательную среду готовят следующим образом.П р и м е р 1. 5 г сухого питательного агара засыпают в 100 мл холодной воды, тщательно размешивают, кипятят на слабом огне 1-2 мин с закрытой пробкой при помешивании до полного расплавления агара, не допуская пригорания. Профильтровывают, 45 разливают во флаконы, стерилиэуют 2 мин при 120 С. Агар охлаждают до 70-60 С, добавляют 0,1-3,0 мл 103- ного спиртового раствора тимола ( 2-изопропил-метил-фенол ), хорошо 50 перемешивают, разливают по 10 мл на чашки Петри и дают застыть. Подобным образом готовят пять разных смесей ингредиентов, содержащих различные количества тимола: 1 О, 30, 150, 300 и 500 мг/100 мл среды. 29 2К 100 мл бульона, содержащего 6090 мг общего азота прибавляют 0,20,Ц агара и стерилизуют автоклавированием при 1 атм 30 мин. Затем агарохлаждают до 60-70 С, добавляют 0,13,0 мг 1 О/-ного спиртового растворатимола, хорошо перемешивают и разливают по 5 мл по пробиркам.П р и м е р 3. Приготовление жидькой питательной средыК 100 мл мясной воды прибавляют1,0 г пептона, 0,5 г хлористого натрия и кипятят, помешивая, После раст"ворения пептона доводят рН растворадо 8,0-8,2 и кипятят 30-40 мин. Доливают дистиллированную воду до исходного объема и автоклавируют приатм 30 мин. Затем бульон охлаждаютдо 60-70 С, добавляют 0,1-3,0 мл10-ного спиртового раствора тимола,хорошо перемешивают и разливают попробиркам по 3 мл.П р и м е р ч, Одну петлю суточной бульонной культуры исследуемыхмикроорганизмов засевают штрихом по8-10 культур на две чашки Петри с мясопептонным агаром и приготовленнойсредой с тимолом, взятом в концентрации 0,3 мг/мл. Посевы инкубируютпри 370 С. Учет результатов производят через 21-8 ч,Из 400 исследованных клинических,штаммов неферментирующих бактерий, выделенных из патологического материалабольных неспецифическими заболеваниями легких, на среде с 0,3 мг/мл тимола вырастают, т,е, проявляют устойчивость к тимолу, 190 штаммов, Этиштаммы принадлежат к флуоресцирующимпсевдомонадам. Восемь штаммов флуоресцирующих псевдомонад не росли насреде с 0,3 мг/мл тимола, т,е. былик нему чувствительны. Остальные чувствительные к тимолу неферментирующие бактерии являются нефлуоресцирующими псевдомонадами и видами, относящимися к другим родам, 92 клинических штамма флуоресцирующих псевдомонад (233) образовывали видимый в ультрафиолетовых лучах флуоресцирующий пигмент, С помощью белкового агара идентифицировано 72 (18) флуоресцирующихпсевдомонад, ахромогенных на мясопептонном агаре, а при использовании питательной среды с тимолом 98 (21,54) аналогичных культурВ таблице показана устойчивостьк 0,3 мг/мл тимола ч 00 клинических штаммов неферментирующих бактерий,1010129 жРост на средес 0,3 мг/мл тимола Количествоштдммов Микроорганизмы 1,Наличие Отсутствие флуоресцирующие псевдомонады Рзецдощопаз аегц 91 поза 146 140 6 Рзецдощопаз 11 цогезсепз 21 22 Рвецдощопаз рцй 1 да 29 30 Нефлуоресцирующие псевдомонады Рзецдощопаз а 1 са 119 епез Рзецдощопаз серас 1 аРзецдощопаз д 1 щ 1 пцйаРзецдощопаз ща 1 орЬ 11 аРзецдощопаз зйцгег 1 12 70 70 20 20 Рзецс 1 ощопаз щепеос 1 па Рзедощопаз рцг 11 ас 1 епз 12 Сощащопаз 1 егг 9 епа 1 Прочие неферментирующие грамотрицательные бактерии А 1 са 119 епез Гаеса 11 зАс 1 пейоЬасег са 1 соасей 1 сцзВогдейе 11 а ЬгопсЬ 1 верй 1 саг 1 ачоЬассег 1 цщ щеп 1 п 9 озерй 1 сцщМегс 1 хе 11 а оз 1 оепз 1 з 1 а 10 Неидентифицированные неферментирующиебактерии Использование питательной сре- псевдомонад от неферментируюды позволяет повысить точность 5 в щих грамотрицательных бактедифференциации флуоресцирующих рий.Составитель Г, СмирноваРедактор М. Петрова Техред О,Неце Корректорй, ИаоошиЗаказ 2408/13 Тираж 521 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий11 ОД Москва Ж-Я Раушская наб. д. 4/Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная,