Способ получения пептидов

5где К т имеет указанные значения;На 1 - галоид,причем функциональные группы, не участвующие в реакции, могут быть защищены с последующими в случае необходимости, избирательным удалением, защитных групп. и риз- водород;- К- Ст-С-алТ а б л и и а 1 оЯ,Сии а СО 2 НснЭ, - -НН-СН-.СООК - водород, С -С-алкилК - водород С -С -алкил бенХ 1 6зип,о т л и ч а ю щ и й с я тем, чтосоединение общей формулыН 25 Э СООБЩАСц /СН(СН 2) СОМНСН 2 СОМНСН СН) СО 2 Н ЯчР-спектр, ч. на млн осетил 3-Ттетилгептаноил 3-Этилгептаноил . Метил 1,89-1,67 (тп, 1 Н); 1,631 э 4 6 (тп, 1 Н) э 1 э 4 6-1 в П 23-Этилгептаноил 3-Эт илгек с ано ип Изобутил Изобутил(пт, 8 Н); 1,36-1,01 (тп,2 Н); ,27 (й, Л = 6 Гтт,ЗН); 1,02-0,76 (тп, 8 Н) 3-Метилгептаноил Изобутил 3 -Этилгек сано ил Изобутнл 3-Этилгептаноил Изобу,.ил 3-Метилгептаноип Метип- цикло- гексип О1НС 1 .В СО 2 гтСН"й3-Тчетиттгептаноип Этип Этил 3-Этилгептаноил . Бутил 3-Этипгексаноил 3-Эт илг еп тано ил 3-Этилгептаноип Метипциклогексил етилцик-.о.гексилворяют в 200 мл этилацетата и органи" ческий слой промывают 2,5 .-ной хлористоводородной кислотои водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором рассола. Органический слой отделяют, высушивают над сульфатом магния и выпаривают при пониженном давлении. К полученному маслу добавляют 200 мл диоксана, насыщенного 10 хлороводородом. Через 30 мин добавляют 400 мл простого диэтилового эфира и полученный продукт Фильтруют под слоем азота. Выход 10,9 г (70%),1 В, Н-трет-Бутоксикарбонип-Э-гам ма-глутамип(альфа-бензиловый эФир) - оксисукцинамидный эфир.К 1500 мл хлористого метилена, содержащего 50 г (143 ммоль) альфа-бензилового эфира Н-трет-бутоксикарбо нип-Э-гамма-глутаминовой кислоты и 17,3 г (150 ммоль) Б-оксисукцинамида, добавляют 30,9 г (15 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и полученнуюреакционную смесь оставляют для пере мешивания при комнатной температуре в течение 18 ч . Твердые веществафильтруют и фильтрат концентрируют в условиях вакуума. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтило О вогоэфира и твердые вещества Фильтруют под слоем азота. Выход 43,7 г (68 ) .1 С. Хлористоводородная соль слож- ного бензилового эфира Э-гамма-глу 35 тамил (альфа-бензиловый эфир) -глицил-алан ина .Раствор, содержащий 4,3 г (9,45 ммоль) Б-трет-бутоксикарбонип-, Э-гамма-глутамип(альфа-бензиловый 40 эфир)-оксисукцинамидного .эфира,2,71 г (9, 92 ммоль) хлористоводородной соли; сложного бензилового эфира глицил- аланина и 1,0 г (9,92 ммоль) триэтипамина в 100 мл хлористого метилена оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 1 8 ч, а затем концентрируют в условиях вакуума. Остаток растворяют в 200 мл этил ацетата и раствор промывают.2,5%-ной хлористоводородной кислотой, водой, 10 .-ным карбонатом калия и раствором, рассола. Органическую Фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и вью паривают при пониженном давлении. Остаток обрабатывают 200 мл диоксана, насыценного хлороводородом, и оставляют для перемешивания в течение 2 ч, Этот раствор концентрируют до сухого состояния в условиях вакуума, а остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира, Твердыевещества Фильтруют под слоем азота,Выход 3,41 г (73 ),10, Б-Изовалерип-гамма-глутамнпглицил"0-алан тпт.К раствору 1,0 г (2,03 ммоль.) хлористоводородной соли сложного бензилового эфира Э-.гамма-глутамил (альфабензиловый эфир) -глипил-Э-аланина и Я 6 мг (6,09 ммоль) триэтиламина в 50. мл хлористого метилена добавляют 480 мг (4,06 ммоль) хлорангидрида изовалериановой кислоты и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 80 ч, Хлористый метилен выпаривают в условиях вакуума и остаток растворяют в этилацетате, Полученный раствор промывают 2,5%-ной хлористоводородной кислотой, водой, 1 О -ным карбонатом калия, водой и раствором рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума, Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира, фильтруют под слоем азота (910 мг) и 700 мг растворяют в 50 мл метанола. К этому раствору добавляют 200 мггидроокиси палладия и эту смесь взбалтывают в атмосфере водорода при давлении 50 Фунтов на 1 кв,дюйм в течение 3 ч, Катализатор фильтруют ирастворитель удаляют в условиях вакуума. Остаток растворяют в воде илиофилизируют с образованием 364 мг. Выход целевого продукта 65ПР-спектр ОИБО-Йт,) ч. на млн: 8 в 25-8 э 05 (шэ ЗН); 4,33-4,12 (тп, 2 Н);372 И, Д=6 Гц, 2 Н); 221.(й, Д== 8 Гц, 2 Н); 1,88-1,68 (ш, 1 Н); 2,08- 1,9 (ш, 4 Н),1,28 (й, Л = 8 Гц, ЗН)1 0,9 (с 1, 5=7 Гц, 6 Н),П р и м е р 2При использованиив качестве исходных материалов хлорангидрида соответствующей кислоты ихлористоводородной соли сложного бензилового эйира 0-гамма-глутамип(альфа"бензиловый эфир) -глицил-аналина и выполнении процедуры, описанной в примере 10, получены соединения, перечисленные в табл. 1Все соединения ттолучены с выходом 30-75%. П р и м е р 3. И-СЗ-(Я)-Иетилгептаноип) -0-гамма-глутамип-Ь-аланил- алании,(тп, 6 Н); 0,88-0,73 (тп, 6 Н) Нензил Бензил Таблица 5 Р,СОС 1 3 9 р Т,й с/крытиям при ГКНТ СССРд. 4/5 изо Роизводственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,1 Заказ 844 Тираж 317ВНИИПИ Государственного комитета113035, Москва, Ж гф Подписнотениям искан наб. ОО ОО О О0058 б 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 5 56ЗА. Сложный бензиловый эйир И-трегбутоксикарбонип-Ь-аланил-Э-аланинаК раствору 23,0 г (0,.121 моль)М-трет-бутокси-карбонил-Ь-аланина,42,6 г (0,121 моль) соли пара-толуолсульфокислоты сложного бензиловогоэфира П-.аланина и 17 мл (0,1 21 ммоль).триэтипамина в 400 мл холодного (О С)хлористого метилена по каплям добавляют 25,0 г (0,1 21 моль ) дициклогексипкарбодиимида в 100 мл хлористогометилена, После перемешивания.в течение ночи при комнатной температуретвердые вещества фильтруют и Аипьтратконцентрируют до образования масла.Остаток растворяют в 400 мл этилацетата, который промьвают -1-ньм раствором хлористоводородной кислоты,1 О -ным раствором карбоната калия,водой и раствором рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают надсульфатом магния и концентрируют дообразования масла. Остаток превращаютв порошок с помощью простого диэтило,вого эфира и полученные твердые вещества Фильтруют под слоем азота.,16,0 г. Дополнительные 12,7 г пелевого продукта крысталлизуют на Фипьтрате,ЗВ, Хлористоводородная соль сложного бензилового эфира Ь-аланил-Эаланина.Берут суспензию 28,7 г сложногобензилового эфира И-трет-бутоксикарбонип-Ь-алании-Э-аланина в 150 мл диоксана, насыщенного хлоровородором.Эту смесь перемешивают в течение 4 ч,при комнатной температуре, Растворитель удаляют в условиях вакуума и остаток превращают в порошок с помощьюпростого диэтилового эфира. Полученные твердые вещества фильтруют, вновьрастворяют в хлористом метилене и раствор концентрируют до достиженияобъема, равного 150 мл . Дсбавляютпростой эфир и твердые вещества, фильтруют под слоем азота. Выход 22,0 г(35 ) .ЗС. Сложный бензиловый эфир Б-третбутоксикарбонип-П-гамма-глутамип(альФа-бензиловый эфир) -Ь-аланил-П-аланина.К суспензии 5,0 г (9,64 ммоль) дициклогексиламина альоша-бензиловаго.,эфира И-трет-бутоксикарбонип-Э-гаммаглутамина и 2,76 г (9,64 ммоль) хлористоводородной соли сложного бензилового эфира Ь-аланил-П-аланина в 1 00 мл хлористого метилена, охлажденного до 0 С, добавляют 2,0 и (9,64 ммоль) диииклогексипкарбодиимида в 20 мл такого же растворителя, После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре твердые вещества Фипьтруют и Фильтрат концентрируют в условиях вакуума. Остаток обрабатывают 150 мл этилацетата,твердые вещества фильтруют и фипьтрат промьвают 1 Е-ной хлористоводородной кислотой, 10 .-ным раствором карбоната; калия, водой и раствором рассола. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и концентрируют с образованием белого твердого вещества, которое превращают в порошок с помощью простого эфира, в результате чего получают 4,1 г целевого продукта,ЗЭ. Хлористоводородная соль сложного бензилового зАира Э-.гамма-глутамил(альа-бензиловый эфир) гЬ-аланил- П-аланина.К суспензии 4,1 г (7,21 ммоль) сложного бензилового эйира И-трет-бутокси-карбонип-Э-гамма-глутамип(альФа-бензиловый эфир) -Ь-алании-П-аланина в 50 мл диоксана добавляют 100 мл диоксана, насыщенного хлороводородом, и реакгионную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, Растворитель удаляют в условиях вакуума и остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира. Выход 3,5 г.ЗЕ. Сложный бензиловый эфир И- (Я) -метипгептанокп-П-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эАир) -Ь-алании-П- аланина.К 1,0 г (1, 98 ммоль) сложного бензилового эфира П-гамма-глутамип(альфа - б ен з илов ый эфир) -Ь-алан ил-Э-аланина и 0,833 мл (5,93 ммоль) триэтиламина в 50 мл хлористого метилена добавляют 390 мг (2, 37 ммоль) 3-(Я) -метилгептаноипхлорида и реакционную смесь перемешивают под слоем азота в течение 45 мин. Реакционную смесь выливают в 150 мл этилацетата и органическую Фазу промывают 10%-ной хлористоводородной кислотой, 1 0%-ныл раст вором карбоната калия, водой и раствором рассола. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и концентрируют до сухого состояния. Остаток превращают в порошок с помощью простого эфира и Фильтруют под слоем азотаВыход 900 мг.7 15600ЗГ. И-(Б)-Метилгептаноил-гамма-глутамип-аланил-алании.Смесь 2(10 мг гицроокиси паляадияна угле и 900 мг сложного бензиловогоэфира И-(Б) -метилгептаноип 1-0-гамма-глутамил (альфаензиловый эфир)Е-аланип-аланина в 50 мл метанолавзбалтывают в атмосфере водорода придавлении 50 фунтов на 1 кв. дюйм в.течение 1 ч, Катализатор фильтруют,а растворитель удаляют в условиях вакуума. К остатку добавляют воду иудаляют при пониженном давлении с образованием 492 мг продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 1 65168 С.ЯМР-спектр (ПМБО-с 1), ч. на млнн8,21-7,98 (тп, ЗН),; 4,41-4,1 (тп, ЗН);2,3-2, 06 (тп, 4 Н); 2, 06-1,56 (тп 6 Н)1 201,43-1, 02 (т, 11 Н); 1, 02-0,73 (тп, бН)П р и м е р 4. Б-З-(Я, К)-Этипгексаноип 1-0-гамма-глутамип(альфа-нбутиловый эир) -глицил-алании,4 А. Соль И-трет-бутоксикарбонип0-гамма-глутамил(альфа-н-бутиловыйэфир)дипиклогексиламина.Раствор 395 .г (.0,172 моль )ангидрида И-трет-бутоксикарбонил-глутаминовой кислоты в 75 мл сухого тет- щрагидрофурана в течение 2 ч по.каплямдобавляют к раствору 47 мл.(0) 516 моль) и 34,3 мл (0,172 моль),дициклогексиламина в 300 мл простогоэфира при 0 С. Реакционную смесь .осоотавляют для перемешивания при 0 С втечение 3 ч. и в течение ночи хранятв холодильнике. Твердые вещества отфильтровывают, суспендируют в этаноле, фильтруют, получают 43,3 г. 4 О4 В, Хлористоводородная соль сложного бензилового эфира 0-гамма-глутамил(альфа-н-бутиловый спирт) -глицил-.О-аланина.Продукт, полученный в примере 4 А(0,024 моль) хлористоводородной солисложного бензилового эфира глицилаланина суспендируют в 200 мл хлорис.того метилена под слоем азота и охлаждают до 0 С, В эту суспензию дообавляют дициклогексипкарбодиимид4,25 г, 0,021 моль ) и смесь оставляют для нагревания до комнатной температуры в течение ночи. Побочныйпродукт мочевины Фильтруют, а растворитель удаляют в условиях вакуума.Остаток обрабатывают этилапетатом иФильтруют. Фипьтрат последовательно промывают водой, 2,57-ной хлористово -дородной кислотой, водой, 107.-нылраствором карбоната калия и рассолом.Органическую Фазу высушивают надсульфатом, магния, растворитель удаляют в условиях вакуума, а остаток растворяют в 300 мл диоксана, насыщенного хлороводородом. После перемешивания в течение 4 ч при комнатнойтемпературе растворитель удаляют, аостаток превращают в порошок в смесиэтипацетата и гексана (1:1) и Аипьтруют, Выход 7,4 г,4 С. И-(Б К) -этилгексаноил 1-0 глутамил(альфа-н-бутиловый эФир) -глицил -0-алании,Кпродукту, полученному в примере4 В.(1,0 г, 2,35 ммоль), 0,99 мл(7, 05 ммоль) триэтиламина и 50 млхлористого метилена добавляют 460 мг(283 ммоль) 3-(Б, й) -этилгексаноилхлорида, после чего реакпионнуюсмесь перемешивают в течение ночи подслоем азота. Растворитель удаляют вусловиях вакуума, а остаток растворяют в этилапетате. Органическую фазупоследовательно промывают 107.-нойхлористоводородпой кислотой, водой.,103-ным карбонатом калия и рассолом.,Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния, а растворитель удаляют в условиях вакуума, Ос -таток растворяют в 1 О мл этанола ивзбалтывают с 170 мг 107.-ной гидроокиси палладия в атмосфере водородапри начальном давлении, равном 50 Фунтам на 1 кв.дюйм, в течение 1,5 ч,Отработанный катализатор отфильтровывают и растворитель удаляют в условиях вакуума. Выход 1 00 мг.ЯМР-спектр (0 МБО-с 1), ч . на млн:8,18 (й, Л=6 Гц, 1 Н); 8,10 И, Л=6 Гц, 1 Н); 8,02 (, Л = 5 Гц, 1 Н);4,28-4,10 (тп, 2 Н); 4,00 (сХ =6 Гц,2 Н); 3,78-3,56 (тп, 2 Н); .2,18 (с, Л =6 Гц, 2 Н); 2 02 (Й 1 = 6 Гц, 2 Н)200-1,60 (тп, ЗН); 1,58-1,42 (тп, 2 Н)11,28-1, 08 (тп, 8 Н); 1,24 (с 1,.1 = 6 Гц, ЗН);О, 92-0,76 (тп, 9 Н) .П р и м е р 5. В результате применения процедуры, описанной в примере 4; и использования в качестве исходных материалов необходимых реагентов были получены соединения, приведенные в табл 2,П р и м е р 6, Сложньп этиловыйэйир Ч-З-(В, Б) -зтилгексаноип 1-0 гамма-глутамип-глииил-аланина.(О, 0285 моль) хлористоводородной соли сложного этилового эфира глицил 0-аланина в 200 мл хлористого метилена добавляют 5,6 г (0,0270 моль) дициклогексипкарбодиимида, после чегоэту смесь перемешивают в атмосфереазота в течение ночи, мочевину Фильтруют, а растворитель удаляют в условиях вакуума. Остаток обрабатывают300 мл этипацетата, фипьтруют и тЪипьтрат последовательно промывают 2,5%ной хлористоводородной кислотой, водой, 1 0%-ньм раствором карбоната калия и рассолом. Органическую Лазу отделяют, высутпивают над магнием и концентрируют в .условиях вакуума. Остаточное масло растворяот в 450 мл диоксана, насыщенного хлороводородом.Этот раствор перемешивают в течение2 ч, после чего растворитель удаляютв условиях вакуума. Остаток превращают в порошок с помощью простого эфираи фильтруют, Выход 11,2 г,6 В. Сложный этиловый эфир МВ, Я) -этилгексаноил -Э-гамма-глутамил-глицил-П- аланина.К продукту, полученному в примеребА 1,0 г, 2,35 ммоль ), и 0,98 мл(2,33 юдоль) 3-(Л, Я -этилгексаноип-хлорида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1,5 чэту смесь выливают в 1 00 мл этипацетата, после чего органическую Лазупоследовательно промывают 1 0%-ным раствором карбоната калия и рассолом.Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума. Белыйтвердый остаток растворяют в 30 млметанола и гидроокиси палладия в атмосфере водорода при начальном давлении равном 50 фунтам на 1 кв,дюйм, Через 2 ч катализатор фильтруют, фильтрат концентрируют до сухогосостояния. Остаток превращают в порошок с помощью простого эйира и фильтруют, Выход 275 мг (35%) . 20 25 30 35 40 45 50 55 Я 1 Р-спектр (ПИНО-Й), ч, на млн;826 Я, Л = 8 Гц, 1 Н); 8148 02 (тп,2 Н); 4,31-4, 00 (тп, 2 Н); 4, 06 (с 1,- 1 О Гц, 2 Н); 3,78-3,60 (ш, 2 Н); 1,17,Т = б Гц, ЗН); 1,14 (с, 3 = 1 О Гп,ЗП) 0,90-0,64 (т, 6 Н) .П р и м е р 7. В результате использования соответствующих реагентов в качестве исходных материалов ивыполнения процедуры, описанной впримере, получены соединения, приведенные в табл. 3,Л р и м е р 8. Повторяют процедуру, описанную в примере 6, с использованием соответствующих реагентов в качестве исходных материалов, эа исключением выполнения гидрогенизации, в результате чего получают соедине ния, приведенные в табл, 4.П р и м е р 9. Кристаллический И.3-(Я) -метилгептаноил -Э-гамма-глутамип-глицил-В-алании,Сложный бензиловый эбир И-(8) - метилгептаноип-Р-гамма-глутамил(аль - Фа-бензиловый эФир)глицил-П-аланина (30,8 г) суспендируют в 300 мл абсолютного этанола в 2-литровом автоклаве, К этой суспензии добавляют 5%-ный палладированный уголь (1,54 г, смочен 50% воды ), т 1 осле этого смесь гидрогенизируют при давлении, в 4 раза превьштающем атмосферное, в течение чего завершается поглощение водорода, Катализатор отделяют Фильтрованием сначала на бумаге, а затем на пористом нейлоне с размером пор 0,45 мкм с применением 1 00-150 мл этанола для переноса и промывки. Фильтрат, соеди" ненный с промывньми щелоками, наносят на влажное белое твердое вещество, которое растворяют. в 150 мл горячей смеси абсолютного этанола.и аиетонитурила при соотношении 1.10, осветляют путем горячего Фильтрования, уваривают до 35 мл, медленно. охлаждают до комнатной температуры, гранулируют и Фильтруют с образованием кристаллического плотного неэлектростатического продукта, укаэанного в заголовке. Выход 20,1 г (94%) .ИК-спектр (нуджоловая паста), см 3340; 3300; 2900; 2836; 1725;650;1628 1580 1532 1455 410 ЗУОе 1280; 1240; 1216; 1175.1 О 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Этот кристаллический продукт9,4 г) далее очищают путем растворения в 1000 мл ацетона при нагреваниичс обратным холодильником в течениеч, Этот раствор охлаждают до комнатной температуры и производят затравку следовым количеством указанныхкристаллов, После перемешивания в течение 6 ч указанный в заголовке продукт выделяют фильтрованием путемпромывки минимальньм количеством ацетона и высушивают в условиях вакуумапри 35 С. Выход 7,25 г, Обладает идентичными характеристиками инфракрасно" .го спектра.П р и м е р 10. Сложный бензило-вьй эфир И-(Ю -метил-гептеноипЭ-гамма-глутамип(альфа"бензиловыйэфир) -глицил-Р-аланжа,В результате выполнения процедуры,описанной в примере 10, и использова"ния 2,77 г (5 ммоль) хлористоводород"ной соли сложного бензилового эфира0-гамма-глутамип(альфа-бензиловыйэфир) -глицил-Э-аланина и хлорангидрида кислоты, полученного из.747 мг,(5 ммоль) 3-(К)метил-гептеновойкислоты, получают указанное в заголовке соединение,П р и м е р 11. И-(К)-метил 4-геп тано ип 1-П -гамма-глутамил-,глипилП-алании,Смесь 500 мг продукта, полученногов примере 10, и 26 мг 5%-ного палладированногс угля (смоченного 50% воды) в 25 мл этанола взбалтывают ватмосфере водорода при начальном давлении, в 4 раза превышающем атмосферное давление, втечение 2,5 ч. Катализатор фильтруют, а растворительудаляют в условиях вакуума. Полученный продукт очищают в соответствии спропедурой, описанной в примере 9,при этом он во,всех отношениях идентичен продукту, полученному в том жепримере.Способ получения А. Пиклогексилаце т илхло рид .А 1. Этилциклогексипацетат,К 4,9 г 60%-ного,гидрида натрия вмасле добавляют достаточное количество гексана для растворения масла. Кнесодержащему масла гидриду натрия ватмосфере азота добавляют 1 00 мл сухого тетрагидрофурана, а затем раствор 22,2 мл триэтилфосфоноацетата в80 мл сухого тетрагидрофурана. Послеперемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч добавляют 10,5 мл ииклогексанона в 40 мл тетрагидрофу-. рана, и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночиРеакционную смесь выливают , в воду и экстрагируют прость 1 м диэти ловым эфиром. Органическую фазу промьвают 1 н, раствором гидроокиси натрия, водой и рассолом. Органическуюфазу отделяют, высушивают пнад суль"фатом магния и концентрируют при по. ниженном давлении,Остаток растворяют в 250 мл метанола, обрабатьвают 1,5 г 10%-ной гидроокиси палладия на угле, после чегоэту смесь взбалтывают в атмосфере водорода под давлением 50 грунтов на1 кв,дюйм.в течение 4 ч. Катализатор фильтруют, а 1 Ъипьтрат концентрируют в условиях. вакуума. Остаток перегоняют при 45-50 С и давлении 0,4 Торр с образованием 1 5,4 г (выход 90% целевого промежуточного продукта,А 2, Пиклогексилацетилхлорид..К 1 00 мл метанола, содержащего 15,4 г этипциклогексилапетата, добав, ляют 15,2 г гидроокиси калия, после чего этот раствор нагревают с обратньв холодильником в течение 3 ч. Метанол удаляют в условиях вакуума, а остаток об раб ать 1 вают водой. Рас тво р экстрагируют простым диэтиловым эфиром, а затем подкисляют0%-ной хлористоводородной кислотой. Подкисленный раствор экстрагируют свежим простым эфиром, органическую фазу отделяют и промывают водой и раствором рассола, Удаление растворителя после высушивания позволяет получить жидкий остаток.Этот остаток растворяют в 60 мл хлористого метилена и обрабатьвают 18 мл оксалилхлорида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 4 ч реакпионную смесь конпентрируют в условиях вакуума, а остаток перегоняют при 45-50 С и давлении 0,4 Торр с образованием 12,5 г продукта (выход 86%).Способ п олуч ен ия В,В результате выполнения общей процедуры, описанной в способе получения А,;й использования в качестве исход 1 ных материалов триэтил 11 ос 11 оноаиетата и соответствующего альдегида или кетона получают хлорангидриды кислоты, приведенные в табл. 5.13 Способ получения С.С 1, б-Метилгептаноилхлорид с 1,3 окси-метил-пен тил,К 90 мл 1,0 И раствора бромистогсвинилмагния в тетрагдройуране, охлажденного до 5 С, по каплям добавляют 6,3 мл изобутиральдегида в30 мл тетрагидрофурана, после чегополученную смесь оставляют для нагревайия до комнатной температуры,Через 2 ч реакционную смесь добавляютк насыщенному раствору хлористого аммония и . экстрагируют простым эФиром,Эфирные экстракты соединяют, промывают насыщенным раствором хлористогоаммония, насщенным раствором бикарбоната натрия и раствором рассола и вьсушивают над сульфатом магния, Растворитель удаляют в условиях вакуума 20с образованием 6, 0 г целевого гродукта,С 2, Сложный этиловый эйир 6-метип 4 - гептановой кислоты.Смесь 18,2 г 3-окси-метил-пентена, 200 мл триэтилортоформиата и500 мл и-толуолсульфокислоты обрабатывают 400 мл толуола и нагревают дстемпературы кипения с обратным холодильником над молекулярньии ситами соразмером ячеек 4 А в течение 24 ч, Растворитель удаляют в условиях вакуума, а остаток перегоняют, фракция,перегоняемая при 45-64 С и давлении0,5 Торр, позволяет получить 7,5 г35целевого продукта.СЗ. Сложный этиловый эфир 6-метилгептановой кислоты.К 7,5 г сложного этилового эфираб-метип-гептеновой кислоты в 75 мл40метанола добавляют 700 мг 10 .-нойгидроокиси палладия на угле, послечего эту смесь взбалтывают в атмосфере водорода под давлением 50 Фунтовна 1 кв,дюйм в течение 1,5 ч, Катализатор Фильтруют, а растворитель удаляют в условиях .вакуума с образованием 5,7 г целевого продуктаС 4, 6-Иетилгептаноилхлорид,В результате выполнения процедуры, 50описанной в способе получения А 2,при использовании 5,7 г сложного этилового эфира 6-метилгептеновой кислоты получают 2,0 г целевого продукта, т. к ил. 30-34 С при давлениио0,5 Торр.Способ получения Р. 2-Метилгептаноичхлорид. 012-Метилгептановая кислота,1 560058 4К холодному (О С) раствору 100 млсухого тетрагидрофурана, содержащему:1 1,8 мл сухого диизопропиламина и55 мл 1,6 И раствора н-бутиллития,добавляют 5,4 мл н-гептеновой кислоты, после чего эту смесь оставляютдля перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученныйраствор охлаждают до 0 С и добавляют7,2 мл иодистого метила, Реакционнуюсмесь перемешивают при комнатной температуре под слоем азота в течение1,5 ч, а затеи выливают в 10 .-нуюхлдристоводородную кислоту и экстрагируют простым диэтиловым эфиром(3100 мл), Экстракты соединяют, промывают 1 О -ной хлористоводороднойкислотой, водой, 20 -ным бисульФатомнатрия и раствором рассола, после чего высушивают над сульфатом маг 1 ия,Растворитель удаляют в условия вакуума, а остаток (5,61 г) растг,вяютв метаноле, содержащем 5,1 г гк., роокиси калия. После перемешивани втечение ночи метанол удаляют, а остаток растворяют в 150 мл воды. Водныйслой промывают простым эфиром (2100 мл) и подкисляют 10 -ной хлористоводородной кислотой. Полученныйпродукт экстрагируют простым эфиром,промывают 20 -ным раствором бисульфата натрия и рассолом, а затем высушивают над сульфатом магния. удалениепростого эфира позволяет получить5,0 г продукта в виде жидкости желтого цвета,02. 2-Метилгептаноилхлорид.В результате использования 5 г 2 метилгептановой кислоты и 7,6 мл оксалилхлорида и применения процедуры,описанной в способе получения А 2,получают 3,3 г пелевого продукта,т.кип, 32-34 С при давлении 0,6 Торр,Способ получения Е, 3-(Я)-Гетилгептаноилхлорид.Е, Монометиловый эфир 3-(К)-метилглутаровой кислоты.В 5-литровую четырехгорлую колбу,оснащенную мешалкой и электродом длярегулирования показателя рН, наливают 2,5 л О, 01 М буферного растворафосфата калия с показателем рН 7,0 споследующим добавлением 150 мг эстеразы печени поросенка и 150 г диметил-метилглутарата. Показатель рНэтой смеси сохраняют равным 6,85 путем периодического добавления0%-ного раствора карбоната калия, Через152,5 ч реакционную смесь подкисляют10 -ной хлористоводородной кислотойдо достижения показателя рН 2,0, после чего продукт экстрагируют простымдиэтиловым эйиром. Экстракты соединяют, высушивают над сульфатом магнияи концентрируют,в условиях вакуума собразованием 114 г целевогопродукта,Х 30= -1,48 (СНЗСО, С = 0,086 гнил);Г 2. Метил-(й)-метил-оксипентаноат,К 114 г монометилового эфира 3(К) -метилглутаровой кислоты в 61 5 млсухого.тетрагидрофурана., охлажденного0до 0 С, медленно добавляют 391 мл2 М раствора диметилсульфида боранав тетрагидрофуране, После завершениядобавления реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатнойтемпературе, Реакционную смесь охлаждают и медленно добавляют 50.мл воды.Реакционную смесь экстрагируют (31 00 мл) простьм эфиром, Экстрактысоединяют, промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия ираствором рассола, после чего высушивают над сульфатом магния. Удаление растворителя позволяет получить37 г целевого продукта,ЕЗ. Метил-(К) -метил-(грет-бутилдиметилсилилокси)пентаноат.К раствору 37 г (0,253 моль) метил-(Е)-метил-оксипентаноата и37 г (0,543 моль) имидазола в 500 млдиметилформамида добавляют 37 г(0,249 моль) трет-бутилдиметилсилилхлорида, после чего реакционную смесвперемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, Реакционную смесьвыливают в воду и экстрагируют (4,100 мл) простым эфиром. Соединенныеэкстракты промывают. 10% "ной хлористоводородной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрии, водой и раствором рассола, а затем высушиваютнад сульфатом магния, Удаление растворителя .позволяет получить 121,78 гсырого продукта, после перегонки которого получают 107,12 г чистого продукта, т.кип. 80-81 С при давлении0,4 Торр,Е 4. 3-(8) -Метил-(трет-бутилдиметилсилилокси)-1 -пентанол.К 8,5 г (0,224 моль) алюмогидридалития в 250 мл простого диэтиловогоэфира, находящегося под слоем азота,добавляют 53,5 г (0,206 моль) метил 3-(Я) -метил-(трет-бутилдиметилси 6005816лилокси)пентаноата в 125 мл простогоэфира. Реакционную смесь перемешиваютв течение 1 ч при ОфС, а затем покаплям добавляют 8,4 г воды, 8,4 мл515 -ного раствора гидроокиси натрияи 25,5 мл.воды. Твердые веществаФильтруют, органическую фазу отделяют и промывают водой, 2,5 .-ной хлористоводородной кислотой и растворомрассола, Органическую Фазу высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума с образованием 46 г продуктаЕ 5. 3-ф)-Метип-(трет-бутилдиметилсипилокси) -1 -пентанал.К 56,3 г оксалилхлорида.в 300 млсухого хлористого метилена, охлажденоного до -60 С и находящегося в атмос 20 Фере азота, по каплям добавляют74,81 г диметилсульфоксида н 100 млсухого хлористого метилена. Через15 мин по каплям добавляют 92,0 г3-(Я) -метил-(трет-бутилдиметилси 25 лилокси) -1 -пентанола в 250 мл такого,же растворителя. Через 30 мин добавляют 206,1 г триэтиламина, находящегося при температуре -60 С, с последующим удалением охлаждающей ванны.Реакционную смесь перемешивают прикомнатной температуре .в течение1,5 ч, а затеи выпивают в воду и экстрагируют хлористым метиленом. Экстракты промывают 2,5 -ной хлористово 35дородной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и раствором рассола, а затем высушивают надсульфатом магния. Растворитель удаляют, остаток растворяют в простом эфи 40 ре и вновь промывают и высушивают,как описано ранее. Удаление. простогоэфира позволяет получить 90,9 г целевого продукта.Еб. 5-(Б) -Метил-(трет-бутилдиме 45 тилсилилокси) -2-гептен,К суспензии 80 г (0,2155 моль)бромистого трийенил-этилфосйония в800 мл сухого тетрагидрофурана, охлажденного до О С, добавляют 165,7 мл1,3 М раствора н-бутиллития(0,2155 моль) в таком же растворителе. Через 2 ч к реакционной смеси по, каплям добавляют 45 г (0,196 моль)3-(К)-метил-.(трет-бутилдиметилси 55лилокси) -1 -пентанола в 200 мл сухоготетрагидрофурана. Реакционную смесьоставляют для перемешивания в течение2 ч при комнатной температуре, а затем выливают в воду и экстрагируют005818жим введения зависел от используемыхинфекционных микроорганизмов: за24-0 ч до заражения К 1 еЬз 1 е 11 а рпецшоп 1 ае у нормальных мышей; эа 3, 2 5идень до заражения ЕзсЬегхсМа со 11 или Беаром. ацгецз у мышей с нарушенным иммунитетом. Заражение;роиззодили внутримьшечно (ЗР) в случаеГ.со 1 и БсарЬ. ацгецз.Дпя заражения использовали объем0,2 мл. Смертность регистрировали через 7 дней в случае К.рпецшоп 1 ае ичерез 3 дня в случаезаражения двумя 5 другими микроорганизмамиПриготовление культуры.К.рпецшоп 1 ае, Е.со 11 или БйарЬ.ацгецз, культуру выделяют в чистомвиде из замороженной крови на агаре 20 с сердечно-мозговым экстрактом (ВН 1) .Три колонии отбирают иэ культуры начашках Петри, выращиваемой в течение18 ч, и помещают в 9 мл бульона ссердечно-мозговым экстрактом. чульон ную культуру выдерживают в течение2 ч при 37 С в круговой качалке, после чего 0,2 мл переносят на поверхность нескольких скошенных агаров ссердечно-мозговым экстрактом, Послеовыращивания в течение 18 ч при 37 Сскошенные агары промывают бульоном ссердечно-мозговым экстрактом, плотность культуры регулируют с помощьювещества "Спектроник 20", после. чегопроизводят соответствующее разбавление до достижения уровня заражения унормальных мьшей, соответствующегодозе, приводящей к смерти 907 особей.Результаты испытаний приведены в 40 табл, 6.Проведенные испытания показаличто в испытуемых дозах предлагаемыесоединения не проявляют признаковтоксичности, т.е. могут быть отнесены 45 к категории малотоксичных.Таким образом, ссединения, полученные в условиях предлагаемого способа, малотоксичны и обладают болеевысокой иммуностимулирующей активностью, чем известное соединение РК.Формула изобретенияСпособ получения пептидов. обшейформулы . О 17156простым эфиром, Объединенные экстракты промывают водой и раствором рассола, после чего высушивают над сульфатом магния. Удаление растворитсляв условиях вакуума позволяет получитьжелтое масло, из которого после перегонки получают 37,4 г продукта,т,кип. 74-79 С при давлении 0,20,1 Торр,Е 7, 3- (Б) -Кетил - 1 -геп танол.К рас твору 74, 8 г 5- ( Б) - метил(трет-бутилдиметилсилилокс и /-2-гептена в 500 мл метанола добавляют 7,5 г107-ной гидроокиси палладия на угле,после чего эту смесь взбалтывают.ватмосФере водорода в течение 1,5 чпод давлением 50 Фунтов на 1 кв.дюйм,Катализатор отфильтровывают, а растворитель удаляют в условиях вакуума.Выход 30 г.Е 8, 3-(Б) -Ретилгептановая кислота.К 10 г 3-(Б)-метил - 1-гептанола в75 мл ацетона в течение 45 мин покаплям добавляют 90 мл реагента Джонса, находящегося при 15-20 С, Через1 5 мин добавляют 1 5 мл изопропанолаи продолжают перемешивание в течение30 мин. Реакционную смесь выливают вводу и образовавшийся продукт экстрагируют простым эфиром, Экстракты соединяют, промывают водой, растворомбисульфата натрия и раствором рассола, а затем высушивают над сульфатоммагния. Удаление растворителя позволяет получить 10 г продукта в видежидкости, т.кип. 84-88 С при давлении0,4 Торр. Ге 1 = -4,46 (СН ОН, С =О, 1 05 г/мл) .Е 9. 3-(Б) -Ретилгептаноилхлорид.В результате выполнения процедуры,описанной в способе получения А 2, сиспользованием 5, 0 г 3-(Б) -метилгептановой кислоты и 7,5 мл оксалипхлорида получают 2, 9 г целевого хлораногидрида кислоты, т,кип. 29-32 С придавлении О, 25 Торр.Проведены биологические. испытанияполученных соединений.Процедура испытания, в которой ис-.пользовали самцов мышей, обработачных С Н/НеИ, представлена ниже, Мышей акклиматизировали в течение5 дней до начала испытания, а затемим вводили подкожно (Б С) или различные растворы ( 00; 1 0; 1 и О, мг/кг)испытуемого соединения или плацебо