Способ количественного определения фибриногена в плазме крови

0 П И С А Н И Е (п 1978862ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(51)М. Кл. А 61 К 35/16 Ртаудерственный квинтет СССР ао делам иэабретений н открытий(72) Авторы изобретения Ю Буй 4 йк-., ,р,фткр Г:-дГ гГьбиохимии. В, А. Белицер Т. В, Варецкая, Л. А. Царюк,и О, А. Буняк Ордена Трудового Красного Знамени институтим. А. В, Палладина(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФИБРИНОГЕНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ1Изобретение относится к области ме- дицины и может быть использовано при диагностике и лечении многих заболеваний, связанных со снижением или повышением содержания фибриногена в крови.Известен способ количественного определения фибриногена в плазме крови путем добавления фосфатного буфера, инкубирования смеси с тромбином, извлечения сгустка фибрина, промывки, раствор.1 о рения в щелочи и определения количества белка 11 1.Однако известный способ длителен,а сильно варьирующая мутность щелочныхрастврров белка сникает достоверностьрезультатов.Целью изобретения является повышение точности и ускрение определения фибриногена.. Цель дос 1 игается тем, что при ооу 2 оществлении способа количественного определения фибриногена в плазме крови Вурем добавления фосфатногь буфера, инкубирования смеси с тромбином извлечения сгустка фибрина, промывки, растворения и определения количества белка добавляют всмесь плазмы с фосфатным буфером раствор моноиодоуксусной кислоты, инкубируют смесь с тромбином, содержащимионы кальция, а отмытый сгусток растВеряют в 1,5%-ной уксусной кислоте, взятой в количест;ве (20-25),1 по отношениюк исследуемой плазме. Пр и м е р . В пробирку (диаметром 9-10 мм, высотой 85-90 мм) вносят 0,2 мл плазмы, полученной из крови при использовании в качестве антикоагулянта оксалата калия или цитрата натрия, прибавляют 1,6 мл 0,06-молярного фосфатного буфера (рН 7,0). Смесь помещают и водяной термостат, установленный на 37 С. Через несколько минут вносятв0,1 мл 0,04-молярного раствора моноиодоуксусной кислоты, спустя 3 мин прибавляют 0,1 мл (10 единиц) раствора тромбина, приготовленного, как описанаТираж 714 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проекдная, 4 3 97выше, После прибавления каждого компонента содержимое пробирки тшательноперемешивают стекляной палочкой с шероховатой поверхностью. Палочку оставляют в пробирке. Смесь выдерживаютпри 37 С 15 мин (более продолжительное выдерживание допускается), После этого пробирку, вынимают из термо-стата, образовавшийся сгусток извлекают наматыванием на палочку, жидкостьсливают и максимально удаляют из сгустка, прижимая его палочкой к стенкампробирки. Сгусток на палочке промываюттри раза в 0,15-молярном растворехлористого натрия, погружая по несколькораз в каждый из трех стаканчиков, содержащих по 50-100 мл раствора хлористого натрия. Остатки промывной жидкости удаляют из сгустка фильтровальнойбумагой. Промытый сгусток расгворяютв 1,5%-ной уксусной кислоте, помещаяего в пробирку (диаметром 13-15 мм),содержащую 5 мл уксусной кислоты, иразмешивая. Растворение происходиточень быстро, заканчивается до 5 мин.В полученном растворе определяют содержание белка спектрофотометрически, измеряя экстракцию при длине волны 280и 320 нм,В данном примере Е =-0,193; Е=0,013,280Э 20Содержание фибриногена. рассчитываютпо формуле, ч: О=:мг% фибриногена.где Е - разница величин экс(ьВо-Эотракции, полученныхпри длинах волны 280и 320 нм;25000 - коэффициент для выражения в мг% количества фибриногена,полученного при анализе 0,2 мл плазмы;14,84 - коэффициент экстинкции ( Е ") для фибриногена в кислой среде при длине волны280 нм,В приведенном. примере Умножив полученную величину на ра бавление плазмы антикаагулянтом, подуВНИИПИ Заказ 9442/7 8862чают количество фибриногена (мг%) вплазме крови.При отсутствии спектрофотометра количество белка после растворения сгустка можно определить другим общепринятым методом, например по методу Лоури.Предлагаемый способ применим и дляопределение фибриногена в плазме больныхподвергающихся лечению гепарином, В этоО этом случае в пробу за 5 мин до внесения тромбина прибавляют протаминсульфат для связывания гепарина, Количествовносимого протаминсульфата зависит откачества используемого препарата и со 35 держания гепарина в исследуемый плазме.Так, при содержании гепарина в количест-ве 10 ед/мл плазмы, протаминсульфата(фирмы "Спофа" ЧССР) вносят 0,24 мгв пробу.20 Предложенный способ требует немного времени - 40-50 мин, по сравнениюс известным затрата времени уменьшается в 4-5 раз. Мутность растворов незначительная поэтому точность получаемых результатов высокая.Предложенный способ дает отклонение,не превышающее 3%, а известный способ - до 16%,Формула изобретения Способ количественного определенияфибриногена в плазме крови путем добавления фосфатного буфера, инкубированиясмеси с тромбином, извлечения сгустка35 фибрина, промывки, растворения и определения количества белка, о т л и ч а -ю ш и й с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения определенияфибриногена, добавляют в смесь плазмы40 с фосфатным буфером раствор монойодоуксусной кислоты, инкубируют смесь стромбином, содержащим ионы кальция,, а отмытый сгусток растворяют в 1,5%ЛВной уксусной кислоте, "взятой в количестве (20-25):1 по отношению к исследуемой плазме.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Вдце 11 Е. "ТЬги уы в о Навап Р 1 аваа Я. соерагвоп оГ ГЬгпо у 1 с р 1 авгпа Ггощ погаа вцЬест апдГгоа сас 1 ачег Ь 1 оод ийЬ р 1 авщ 1 п ргерагес Ьу асСчайоп исЬ оЬ 1 огоГопп