Способ определения атерогенного нарушения липопротеинового спектра плазмы крови

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН 9) 514 С 01 Ы 33 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ теиту ится к обласклинико-биоение от но к кл торной д бСпособ разом.Посленатощак в держащую к честве ант тевого сги ествляют след сится к медици- ико-биохимичесагностике и кар Изобрене, а имекой лаборадиологииЦель изности спосповышения 12-ч сух голодания утром ую пробирку, соский ЭДТА в каа, из вены локемого берут око ово сталли ля стики за счетительности. а ди сл чув ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ЖНТ СССР(56) Панин Л,Е. Соколов В.П, Психосоматические взаимоотношения при хроническом эмоциональном напряжении,Новосибирск: Наука. Сибирское отделение. 1981, с.118-119,Маграчева Е.Я. Разделение липопротеинов сыворотки крови методом дискового электрофореза в полиакриламидном геле. - Вопросы медицинскойхимии. 1973, М 6, с. 652-655.Колб В.Г. Камьппников В.С, Справочник по клинической химии. - Минск:Беларусь, 1982, с.366,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АТЕРОГЕННОГОНАРУШЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИНОВОГО СПЕКТРАПЛАЗМЫ КРОВИ(57) Изобретение откости медицины, а именно обретения - повьппение то химической лабораторной диагностикеи кардиологии. Целью изобретения является повышение точности способа засчет повышения его чувствительности.У пациента натощак берут около 2 млкрови, центрифугированием отделяютплазму. В плазме определяют содержание общего холестерина и холестерина А -липопротеинов. Кроме того,проводят электрофоретическое разделение липопротеинов электрофорезомв полиакриламидном геле с последующей записью денситограммы и определением содержания пре-в-липопротеинов, Д-липопротеинов, медленно ибыстро мигрирующих подфракций о -липопротеинов. После чего рассчитываютиндекс атерогенности, и при его значении 2,8 и более диагностируют атерогенное нарушение липопротеиновогоспектра плазмы. При атеросклерозедополнительно определяют содержаниехолестерина в медленно мигрирующейподфракции Ы-липопротеинов и рассчитывают холестериновый индекс атерогенности. При его значении 19,5 иболее диагностируют атеросклероз.Чувствительность способа увеличивается более чем в пять раз по сравению с прототипом. 1 з,п. ф-лло 2 мл крови. В плазме определяют содержание холестерина липопротеинов высокой плотности (Ы ХС) и общего холестерина известнымн методами, Производят также электрофоретическое фракционирование окрашенной на липиды плазмы способом диск-электрофореза липопротеинов в многослойном полиакриламидном геле (Д). После выдерживания в буферном растворе в течение одних суток заключенных в стеклянные трубки столбиков полиакриламидного геля производят денситометрическую запись диск-электрофореграмм 15 липопротеинов (ЛП), для чего может быть использован денситометр ДМ,Денситограмма диск-электрофореграммы имеет следующий вид (от катода к аноду). 1 - альбумины,связан ные с неэтерифицированными.жирными кислотами (НЭХК); 2 - быстро мигрирующая подфрясция-липопротеинов; 3 медленно мигрирующая подфракция 6-липопротеинов; 4 - р -липопротеины; 5 - пре-р-липопротеины; 6 - хиломикроны, Альбумин-НЭЖК и хиломикроны не имеют непосредственного отношения к Формированию атеросклеротических изменений в организме, поэтому их в расчет ЗО не принимают, Для количественной оценки диагностически важных пиков замеряют их высоту и ширину на уровне середины высоты. Полученные значения умножают друг на друга и на постоянньй коэффициент 1,064, Сумму площадей пиков складывают и принимают за 1003. Затем определяют процентную долю каждого пика. Дополнительно складывают площадь пиков бы стро и медленно мигрирующей подфракции 4-липопротеинов и принимают их сумму за 1003, затем рассчитывают их процентную долю и соотношение между быстро и медленно мигрирующими подфракциями. После чего производят расчет индекса атевогенности по Формуле (а+Ъ) сИА = ---Йгде ИА - индекс атербгенности; , 50а - процентное содержание пре(3 -липопротеинов;Ь - процентное содержание р-липопротеиновс - соотношение между быстро .55и медленно мигрирующимиподфракциями А-лицопроте"инов; Й - процентное содержание медленно мигрирующей подфракции липопротеинов,При значении ИА 2,8 и более диаг ностируют атерогенное нарушение липопротеинового спектра плазмы крови.Холестериновый индекс атерогенности находят следующим образом.Сумму двух пиков 1-липопротеинов (быстро и медленно мигрирующей подфракции) принимают за содержание о -ХС в ммоль/л. Находят соотношение этих подфракций и содержание холестерина в них. Далее рассчитывают холестериновый индекс атерогенности по формулеХС - (о -ХС) с - ХС где ХИА - холестериновый. индекс атерогенности;ХС - содержание общего холестерина плазмы крови;1 -ХС - содержание холестерина ф(- лнпопротеинов;с-ХС- содержание холестеринамедленно мигрирующей подфракции И-липопротеинов, При значении ХИА 19,5 и более диагностируют атеросклероз.П р и м е р 1, Больная Ш 43 лет с диагнозом: остаточные изменения после перенесенного туберкулеза вну-. тригрудных лимфоузлов. Сегментарный пневмосклероз язычкового сегмента слева.Лабораторно больная исследована до начала лечения. Из ординарных униФицированных тестов для суждения об атерогенных нарушениях в липопротеиновом спектре плазмы крови были использованы тесты на содержание 1-ХС, общего холестерина плазмы (ХС 1 и холестериновый коэффициент атерогенности линопротеинового спектра ХС-(с -ХС)с( "ХССодержание с-ХС составило 1,36 ммоль/л при норме 1,235-1,435 со значениями Х+Бх 1,335 ф 0,051 ммоль/л. Содержание ХС составило 5,10 ммоль/л при норме 3,909-4,382 со значениями Х+Бх 4,145 + "-0,121 ммоль/л. Холестериновый коэфФициент атерогенности липопротеинового спектра 2,75 при норме 1,986 - 2,406 со значениями Х+Б х 2,196+0,107.5 14675 Известный способ оценки атерогенных нарушений в липопротеиновом спектре плазмы в данном случае оказывается неэффективным,П р и м е р 3, Больная Е., 70 лет с диагнозом основным: инфильтративный туберкулез легких в фазе распада, БК+, острая // долевая правосторонняя пневмония, и сопутствующим; атеросклероз аорты, коронарных и моз" говых сосудов, атеросклеротический кардиосклероз, ЛСН 1-П ст.1 Определение атерогенности липопротеинового спектра по известному способу дает показатель 0,59, которыйвесьма мало отличается от показателянормы (0,645-0,745 со значениями5Х+ Б У 0,695 фО, 026), обнаруживая .некоторое превалирование содержанияантиатерогенных липопротеинов - ЛПВПу больной с легочной патологией, 10Определение атерогенности липопротеинового спектра по предлагаемомуспособу дает следующий результат:ИА==1,055 ( при норме 1,240-1,816 со значениями Х ф Я У 1,528+0,147).15Оценивая полученные данные, нельзя не обратить внимание на то, чтонайденный показатель далеко отстоитот критериев обнаружения атеросклероза, который не выявился и при тщательном клиническом исследованиибольной, если показатель атерогенности липопротеинового спектра, найденный известным способом, в 1,77 разаменьше среднего показателя нормы, то 25показатель атерогенности липопротеинового спектра, определенный предлагаемым способом, в 1,448 раза меньшесреднего показателя нормы, предлагаемый способ более правильно отражает 30содержание патохимических изменений / в организме больной, чем холестерииавый КА, поскольку при тщательномклинико-экспериментальном исследовании у больной не был выявлен атеросклероз, легочная же патология обычно обусловливает суммарной фракции е(-липопротеинов.П р и м е р 2. Больной Р, 57 летс диагнозом основным: цирротический 40туберкулез в/доли левого легкого сполостями БК- и сопутствующим: ИБС:стенокардия покоя. Атеросклероз аорты, коронарных и мозговых сосудов, ЛСН 1-11 стадии, 45Лабораторно 9 ольной исследован до начала лечения. Иэ ординарных унифицированных тестов для суждения об атерогенных нарушениях в липоцротеи" новом спектре плазмы крови были ис пользованы тесты на содержание Ы-ХС, общего холестерина плазмы (ХС) и хо" лестерииовый коэффициент атерогенности (КА) липопротеиновога спектраХС-Я-ХС 2 55с -ХССодержание Ы-ХС составило 0,526 ммольВ (при норме 1,235-1,435 со значениями Х8 1,33510,051 ммоль/л), содержа 16 6ние ХС составило 2,0 3 ммоль/л (принорме 3,908-4,382 со значениямиХЯ У 4,5+0,12 ммоль/л). Холестериновый коэффициент атерогенностилипопротеинового спектра 2,865 (принорме 1,9862,406 со значениямиХ+ Я 72,196 - О, "7),Определение атерогенности липопротеинового спектра по известномуспособу дает показатель 0,62, который практически не отличается от показателя нормы (0,645-0,745 со значениями Х + 8 х 0,695 + 0,026).Определение атерогенности липопротеинового спектра по предлагаемому способу дает следующий результат:ИА=2,8 при норме 1,240-1,816 со значениями Х + 51,528+0,147, Полученный показатель в 1,83 раза превосходит средний показатель нормы, отличаясь на 1,0 ед.от верхней границынормы.Оценивая полученные данные, нельзя не отметить, что если традиционный показатель холестеринового коэфХС-(е(-ХС)фициента атерогенности в в в-Ы -ХСотражающий отношение содержания атерогенных липопротеинов к таковомуатиатерогенных ЛП, у данного больного увеличен в 1,3 раза (отличаясьна 0,46 ед. от верхней границы нормы), то показатель, определенный попредлагаемому способу, в 1,83 разапревосходит средний показатель нормы, отличаясь на 1,0 ед. от верхнейграницы нормы. Следовательно, предлагаемый способ правильно отражаетсодержание биохимических измененийпри сопустствующем атеросклерозе,более чувствителен и точен, чем известный, связанный с определениемхолестеринового коэффициента атерогенности липопротеинового спектраплазмы.Из ординарных унифицированных тестов для суждения об атерогенных нарушениях в липопротеиновом спектреплазмы крови были использованы тестына содержание 1-ХС, общего холестерина плазмы (ХС) и холестериновыйкоэффициент атерогенности липопротеинового спектра ХС-(-ХС 1,сС -ХССодержание 1-ХС составило0,800 ммоль/л (при норме 1,235-1,435со значениями Х 4 Я У 1,335+0,551 ммоль//л), содержание ХС составило3,80 ммоль/л (при норме 3,908-4,382со значениями Х + Як 4,145+0,121 ммоль,/,Холестериновый коэффициент атерогенности липопротеинового спектра3,75. (при норме 1,986-2,406 со значениями Х + Я 7 2,196 + 0,107).20Определение атерогенности липопро"теинового спектра по известному способу дает показатель 0,59, которыйвесьма мало отличается от показателянормы (0,645-0,745 со значениями Х ++Я к 0,695+0,026), обнаруживая некото;рое превалирование содержания антиатерогенных липопротеинов - ЛПВП убольного с сочетанной патологией.Определение атерогенности липопротеинового спектра по предлагаемому способу дает следующий результат:ИА=40,44 (при норме 1,240-1,816со значениями Х+Я к 1,528+0,147).Оценивая полученные данные, обращают внимание на следующее: пока"затель холестеринового коэффициентаатерогенности в 1,7 раза ( 3,75:2,196)превышает средний показатель нормы,подтверждая атерогенные изменения ворганизме; найденный предлагаемымспособом показатель в 25,5 раза(40,44: 1,528) превышает средний пока-затель нормы, что подтверждает егогораздо более высокую чувствительность по сравнению с предыдущим (традиционным).Известный способ оценки атерогенных нарушений в липопротеиновом спектре плазмы у данного больного ока 50зался неэффективным.П ри м е р 4. Больной 67 лет,поступил с диагнозом: ИБС, стенокардия покоя и напряжения. Атерослеротический кардиосклероз, Атероскле 55роз аорты, венечных артерий, Н,При биохимическом исследованииплазмы крови общепринятыми методами оказалось, что содержание общего холестерина составляет 5,224 ммоль/л, ХС-ЛПВП 0,864 ммоль/л. Показатель холестеринового коэффициента атерогенности липопротеинового спектра: ХС-Я-ХСравен 5,046 (при норме 1, 8-3, 3 со значениями Х + Я к 2, 196 + +0,107).Дополнительно было проведено дискэлектрофоретическое исследование спектра липопротеинов в столбиках полиакриламидного геля.Затем определяют холестериновыйХС- Я-ХС 1 индекс атерогенностиХИА= в - --- )Х -ХС равный 34,88 (при норме 3,253-5,520 со значениями Х ф Я х 4,227+0,107).Поскольку полученный показатель оказался больше 19,5, у больного ди" агностируют атерослероз.П р и м е р 5. Больной 70 лет поступил с диагнозом: ИБС, стенокар-. дия напряжения (отеросклеротический) и постинфарктный кардиосклероз, инфаркт, атеросклероз венечных артерий, аорты.При биохимическом исследовании плазмы крови общепринятыми методами оказалось, что содержание общего холестерина составляет 5,983 ммоль/л, И-ХС, 0,7481 ммоль/л. Показатель холестеринового коэффициента атерогенности липопротеинового спектра плазмы, найденный известным способом и определенный по формуле ХС-Я-ХС(с(-ХС)равен 6,997 (при норме 1,8-3,3 со значениями Х" Я х 2,196+ 0,107).Дополнительно было проведено дискэлектрофоретическое исследование спектра липопротеинов в столбиках полиакриламидного геля.Далее вычисляют холестериновый инХС-(,(-ХС) декс атерогенности ----- =19,533 (19,5).Поскольку полученный показатель равен 19,5, у данного больного диагностируют атеросклероз.Таким образом, предлагаемый способ более чем в 5 раз чувствительнее известного способа.Формула изобретения1. Способ определения атерогенного нарушения липопротеинового спектСоставитель С.федоровТехред И,Верес Корректор М.Макснмишинец Редактор Н.Тупица Заказ 1192/43 Тираж 788 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г . Ужгород, ул . Гагарина, 101 9 1467 ра плазмы крови путем электрофорети-, ческого разделения липопротеинов, определения процентного содержания пре-а-липопротеинов, р -липопротеинов и Ы -липопротеинов с последующим расчетом соотношения суммы пре-В-липопротеинов и -липопротеинов с с-липопротеинами, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повьппения точности 10 способа за счет повьппения его чувствительности, дополнительно разделяют 1-липопротеины на быстро и медленно мигрирующие подфракции, определяют ихпроцентное содержание с последующим 15 расчетом индекса атерогенности по омле фру(а+Ь)сИА =Йгде ИА - индекс атерогенности, а - 20 процентное содержание пре-рлипопротеинов, Ь - процентное содержание /3-липопротеинов, с - соотношение между быстро и медленно мигрирующими подфракциями -липопротеинов, с - 25 процентное содержание медленно миг 516 1 1рирующей подфракпии а-липопротенпон, и при значении индекса 2,8 и более определяют атерогенное нарушение липопротеинового спектра плазмы крови.2, Способ по п о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения прн атеросклерозе, дополнительно определяют уровень общего холестерина плазмы крови, холестерина 1-липопротеинов и холестерина медленно мигрирующей подфракции -липопротеинов с последующим расчетом холестеринового индекса атерогенности по формулеХС - ц -ХСХИА = ------- , где ХИА - холес-ХСстериновый индекс атерогенности, ХС - содержание общего холестерина плазмы крови, -ХС - содержание холестерина Ы-липопротеинов и Ы -ХС - содержание холестерина медленно мигрирующей подфракции -липопротеинов, и при значении индекса 19,5 и более определяют атерогенное нарушение приатеросклерозе.