Способ определения анилина в биологических объектах

Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ) М.Кл рисо нением 01 Х 33 ствеииый к СССВ ам изобре открытий30. 0782 Бюллетень М 9 28ания описания Зд. 07, 82 икованоопублико Опу Дат ЕСОЮЗЕАЯПН%фХЮЮЧЭСНАЛ .фаЛЮФПЖА(72) Авторизобрет Л.В.Песахович и З.М.Де сударственный медицинский институ государственный медицинский инсти юменски Алтайс 71 3 ел 547 СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНИЛИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХжидкост анилина акции а батываю экстрак очистке напряже ктролит тона-Ро еди ине лин тем Изобретение относится к м ц а именно к способам анализа промыш-, ленных органических ядов в клинической судебно-медицинской токсикологии и в техническом контроле полупродуктов и продуктов синтеза.Известен способ определения аниа в биологических объектах пугомогенизации пробы, осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты, отделейия осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости;с последующим опрецелением анилина в гидролизате с помощью реакции азосочетания 1 1.Однако известный способ не обеспечивает необходимой точности определения анилина в биологических объектах и имеет недостаточную селективность анализа, что снижает достоверность получаемых результатов.Цель изобретения - повышение точности и селективности анализаПоставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения анилина в биологических объектах путем гомогениэации пробы, осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты, отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной с последующим определением в гидролизате с помощью реосочетания, гидролизат обрахлороформом, хлороформный подвергают дополнительной электрофорезом на бумаге, при ии 400 В, а в качестве злеберут буферный раствор Бритинсона при рН 2,3. Способ осуществляют следующим образом.Анилин определяют путем гомогениэации пробы, осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты (ТХУК), промывания и отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости, обработки ее хлороформом, дополнительной очистки электрофорезом на бумаге при напряжении 400 В в присутствии электролита буферного раствора Бриттона-Робинсона при рН 2,3, последующего определения анилина с помощью реа 1 сции аэосочетания, при этом проводят 3-х кратную обработку осадка раствором ТХУК, 3-х кратную экстракцию основания анилина хлороформом, дополнительную очистку хлороформного экстракта электрофореэом на бумаге при напряжении 400 В, эле947766 Формула изобретения Составитель Ю,АлмазовРедактор Н,Гришанова Техред Т. Маточка Корректор У. Пономаренко Заказ 5625/68 Тираж 887 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам. изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 ктролит-буферный раствор Бриттона Робинсона, рН 2,3.П р и м е р. К 10 мл крови добавляют равный объем воды, Через 20 мин по каплям при перемешивании приливают 9 мл 20 раствора ТХУК и оставляют 5 на 10 мин, после чего смесь центрифугируют (6000 об/мин, 5 мин). Надосадочную жидкость сливают, осадок трижды гомогенизируют в течение 5 мин с 10 мл 1 раствора ТХУК. Промывную 10 жидкость отделяют центрифугированием. К объединенным центрифугатам добавляют концентрированную соляную кислоту до рН 1 и нагревают на кипящей водяной бане в колбе с обратным воздушным холодильником в течение 1 ч, После гидролиза жидкость охлаждают до комнатной температуры, добавляют 25 раствор аммиака до рН 9 и экстрагируют хлороформом втечение 20 5 мин (30 мл3), Образовавшуюся эмульсию центрифугируют, хлороформные экстракты фильтруют через складчатый фильтр (диаметр 5 см) в фарфо-ровую чашку, ч:мешивают с 2 мл спиртового раствора соляной кислоты (3 мл концентрированной соляной кислоты, плотностью 1,19 смешивают с 100 мл этилового спирта 95), Объединенные экстракты выпаривают при комнатной температуре в защищенном от света месте. Сухой остаток растворяют в 0,01 н растворе соляной кислоты. С целью очистки аликвоту раствора наносят на полосы хроматографической бумаги РК 15 (229 см) и подвергают электрофорезу в камерах к прибору ПВЭФв течение 1 ч при напряжении 400 В, электролит-буферный раствор Бриттона-Робинсона, начальная температура электролита 20 С. Контрольную 40йполосу разрезают на две части, для проявления которых используют соответственно реакции образования азокрасителя и азометина. Положение зон . на исследуемых электрофореграммах ус танавливают посредством сравнения с положением окрашенных участков на контрольной полосе. Установленные участки вырезают в пределах 0,5 см от передней и задней границ зон и элюируют 0,01 н раствором соляной кислоты. Для фотоколориметрического определения анилина к 0,5 мл алюата последовательно добавляют 0,25 мл 0,1 н раствора соляной кислоты, 0,05 мл свежеприготовленного 0,01 н раствора нитрита натрия, Смесь встряхивают и через 30 мин добавляют 0,3 мл 0,05 раствора хинозола и 1 мл 0,1 н раствора гидроксида натрия, Объем смеси доводят водой до 10 мл, Оптическую плотность окрашенного раствора измеряют на фотоэлектроколориметре при синем светофильтре, кювета 10 мм.Раствором сравнения служит смесь реактивов без элюата, содержащего анилин. Количество анилина определяют по калибровочному графикуПрименение в предлагаемом способе дополнительной обработки субстрата извлекателем, экстракции органическим растворителем и электрофоретической очистки повышает селективность анализа, увеличивает выход изолируемого вещества и повышает точность анализа в 2 раза. Способ определения анилина в биологических объектах путем гомогенизации пробы,.осаждения белков растворовтрихлоруксусной кислоты, отделенияосадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости с последующим определением анилина в гидролизате с помощьюреакции азосочетания, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности и селективности анализа,гидролизат обрабатывают хлороформом,хлороформный экстракт подвергают дополнительной очистке электрофорезомна бумаге при напряжении 400 В, а вкачестве электролита берут буферныйраствор Бриттона-Робинсона при рН 2,3.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Гадаскина И.Д., Филов В,А, Превращение и определение промышленныхорганических ядов в организме, Л.,Медицина, с, 272-273, 1971,