Способ подготовки эпителиальных клеток желудочно-кишечного тракта к исследованию

(9 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯГ 1 РИ ГКНТ СССР/28 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ большего ности,Спосыхода клеток и их лучшеи сохран осуществляют следующим обра К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 21) 4733221/14(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ЭПИТЕЛИАЛЬН ЫХ КЛ ЕТОК ЖЕЛУДОЧ Н О-КИ Ш ЕЧ НОГОТРАКТА К ИССЛЕДОВАНИЮ Изобретение относится к медицине, аименно к гистологии. Целью изобретения является получение зом,Получают биоптат желудочно-кишечного тракта, извлекают, промывают в человеческой сыворотке группы АВ ЩДалее измельчают в чашке Петри сухими ножницами в капле человеческой сыворотки группы АВ, Затем измельченную массу фильтруют в центрифужные пробирки через капроновую сеточку с последующим смыванием остатком ткани на сетке несколько раз сывороткой. Центрифугируют в режиме 1500 об/мин в течение 10 мин, Удаляют недостаточную жидкость. оставляя небольшое количество (высотой 1-2 мм) над осадком. Полученную суспензию пипетируют и раскапывают на сухое предметное стекло с последующим размазыванием ка(57) Изобретение относится к медицине, а именно к гистологическим методам исследования, Целью является получение большего выхода клеток и их лучшей сохранности. Цель достигается тем, что клетки извлекают соскобом, а измельчение проводят в сыворотке крови АВ с последующим промыванием клеток в той же сыворотке. Окоашивание мазков полчченнцх клеток проводят эзур 11 и эози нам, При этом перед окрашиванием мазки обрабатывают 1 Н. НС при 60 С в течение 2 - 3 мин. Способ позволяет получить качественные препараты зпителиальных клеток, нэ которых хорошо видна структура ядра и микроядер. пель. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют в растворе метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении 3;1. Затем проводят. гидролиэ 1 н. НС при . комнатной температуре в течение 2 мин, затем при 60 С 6 мин. Остужают стекла при комнатной температуре и промывают дистиллированной водой. Препарат окрашива- фф ют в течение 15 мин раствором азураи 4 эозина,6 дКраска готовится перед употреблением 3 следующим образом: 10 мл дистиллированной води, 7 капель 5%-ного Иа 2 СОэ. 5 мл 0,1 ут-ного раствора ааура 1 и 2 мв 0,1 та-ного раствора зозина.При микроскопическом анализе мазок представляет собой расположенные по одиночке или группами по 2 - 3 клетки, из которых 80 - 90% с ненарушенной ядерной и цитоплазматической оболочкой. Структура ядра и цитоплазмы нормальной морфоло гии, Достаточно четко выявляются клеточ ные границы. Цитоплазма окрашена в1735737 Формула изобретения Способ подготовки эпителиэльных клеток желудочно-кишечного тракта к исследованию путем измельчения ткани, извлечении клеток, их центрифугировании с последующим приготовлением мазков и окращивании в красителе, о т л и ч э ю щ и йс я тем, что, с целью большего выхода клеток и их лучшей сохранности, клетки извлекают соскобом, а измельчение проводят в сыворотке крови АВ с последующим их промыванием в той же сыворотке; при этом перед окращиванием мазки обрабатывают 1 н, НС при температуре 60 С в течение 2-3 мин, а в качестве красителя используют азури эозин. Составитель З,ВальковскаяТехред М,Моргентал Корректор А.Осауленко Редактор Н,Рогулич Заказ 1811 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР . 113035, Москва. Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгород., ул,Гагарина, 101 синевато-сиреневый цвет (или сиреневый), ядро и микроядра - в густой синий. Микроядра представляют собой образование округлой или слегка овальной формы, диаметром 1/3 до 1/4 м диаметра ядра. 5 Микроядра его выявляются и дифференцируются от других образований неядерного происхождения.П р и м е р 1, Участок кишки, желудок или преджелудок промывают в растворе Хе никсэ. Выворачивают слизистой оболочкой наверх и с помощью предметного стекла, делают соскоб. Соскоб помещают в 0,25;- . ный раствор трипсина. Перемешивают на магнитной мешалке в течение 15 мин, Филь труют через капроновую сеточку. Центрифугируют в режиме 3000 об/мин в течение 10 мин, Надосадочную жидкость удаляют. В осадок добавляют фиксатор (метанол - уксусная кислота в соотношении 3:1), выдер живают в холодильнике в течение 15 мин, Меняют фиксатор до тех пор, пока осадок не становился белым (2 - 3 раза), Раскапывают на мокрые предметные стекла (по б - 8 капель на стекло), Высушивают на воздухе. 25 Окрашивают препарат азуроми эозином, При просмотре все клетки разобщены, лежат отдельно и легко анализируются.,П р и м е р 2. Извлеченные органы желудочно-кишечного тракта промывают в че ловеческой сыворотке группы АВ, Измельчают в чашке Петри сухими ножницами в капле человеческой сыворотки той же группы, Измельченную массу фильтруют в центрифужных пробирках через капроновую сЕточку с последующим смыванием остатков ткани на сетке несколько.раз сывороткой, Центрифугируют в режиме 1500 об/мин в течение 10 мин. Удаляют нэдосадочную жидкость, оставляя неболь шое количество (высотой 1-2 мм) над осадком. Суспензию пипетируют и раскапывают нэ сухое предметное стекло с последующим размазыванием капель. Препарат высушивают на воздухе, Фиксируют 45 в растворе метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении 3:1, Проводят гидролиз 1 н. Н С при комнатной температуре в течение 2 мин, затем при 600 С 650 мин. Остужают стекла при комнатной температуре и промывают дистиллированной водой. Препарат окрашивают в течение 15 мин раствором азураи эозина.При микроскопическом анализе препарат представляет собой расположенные по одиночке или по 2-4 клетки, из которых 80- 90с целостной ядерной и цитоплазменной оболочкой, Структура цитоплазмы и ядра нормальной морфологии, Достаточно четко выявляются клеточные границы, Цитоплазма окрашена в синевато-сиреневый или в сиреневый цвет, ядро и микроядра - в густой синий. Микроядра представляют собой образования округлой или слегка овальной формы, диаметром от 1/3 до 1/4 мм диаметра ядра. Препарат является пригодным для выявления микроядер,Способ позволяет получить одиночные, расположенные по одной или по 2-4 клетки, из которых 80 - 90% с целостной ядерной и цитоплазменной оболочкой, Структура цитоплазмы и ядра нормальной морфологии. Достаточно четко выявляются клеточные границы. Цитоплазма окрашена в синевато- сиреневый или в сиреневый цвет, ядро и микроядра - в густой синий, Микроядра представляют собой образования округлой или слегка овальной формы, диаметром от 1/3 до 1/4 мм диаметра ядра. Препарат является пригодным для выявления микро- ядер и последующего исследования.