Способ сохранения клеток и тканей растений

(22)Заявлено 07.02.78 (21) 2590508/30-15 с присоединением заявки РЙ -(23) Л риоритет Р)вударствацаЭ комитет ь" ИР кв яваак взобретехнй к ютхрытнке;тФ еф аА. С. Попов, Р. Г. Бутенко н И, Н. фуховеЬОрдена Трудового Красного Знамени и ститут физиологиирастений им. К. А, Тимирязе(54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ РАСТЕНИИ Изобретение относится к криогенным, способам хранения живых клеток и ткаеней, а именно к хранению растительныхклеток и тканей, культивируемых на ис-.кусственных питательных средах и тех,. которые могут продуцировать ценные ве 3щества.Известен способ сохранения культивируемых клеток и тканей растений путем периодических переносов их на свежую питательную среду Г 11,10Этот способ является главным прихранении коллекций культур. Но длительное пассирование и м 1 йго сопровождается значительными изменениями на ген 1ном, хромосонном и клеточном уровнях,которые могут привести к потере ценных в практическом отношении или уникальных качеств культивируемых клеток. Кроме того, требуются большиезатраты труда и средств для поддержания постоянно пополняющихся коллекций.Известен также способ хранения клеток и тканей животных в условиях низких температур с применением сыворотААки крови животных Г 23.Однако при осуществлении известного способа применение сыворотки животных для хранения растительных тканей и клеток до настоящего, времени небыпо исследовано.Цель изобретения - повышение выживаемости и жизнеспособности клеток итканей растений после замораживанияи хранения при температуре жидкогоазота (-196 С) .Поставленная цель достигается тем,что искусственную питательную средузаменяют. полностью или частично переддобавлением крнопротектора сывороткойкрови животных,Для опытов была выбрана культураклеток моркови, так как она являетсятипичным образцом подобных культур исостоит, по крайней мере, из трех субпопуляций: отдельных клеток, размерыкоторых изменяются в широких пределах,плотных агрегатов мелких клеток и рых5245 3 86 лых агрегатов крупных клеток. Величина агрегатов достигает 2-3 мм, т. е. это уже большие колонии, состоящие из множества клеток; Поэтому результаты, полученные на культуре клеток моркови, очевидно справедливы и для других растительных клеток и тканей.Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.Суспензионные культуры клеток моркови, выращенные на искусственной питательной среде, в которую включены только соли, витамины, фитогормоны и углеводы, концентрируют центрифугированием. Среду удаляют, а клетки ресуспендируют либо в свежей питательной среде, либо в той же среде, к которой добавлена сыворотка крови телят в количестве от 10 до 90% в различных вариантах (по объему), Затем к суспензиям добавляют диметилсульфоксид до конечной его концентрации (5%), ампулируют и замораживают в сосудах Дюара с сухим льдом и этанолом. Градиент замораживания 2 С/мин, Конечнаяо 00+10 106+ 39+13 253+19 дельные клетк О+2 егаты клето се культивируемые единицы% замеи Исто сственной пи и информациимание, при ение криоп ринятые во в 1. Бутенко анных тканей а растений. Мкспертизе ра изолиро- морфогене 1964, с, 61 раживание и е, отличто, с целью и жизнеспособпосле культивиГ. Культфизиологи "Наука,2. Патенкл. 195-18,ША 9 38521 74 (протот ением криопроте НИИПИ Заказ 7906филиал ППП одписно и аж 2Патент, г. Ужгород, ул. Проектная,Формула изоСпособ сохранениярастений, включающийклеток и тканей в истельной среде, добавтора, последующее замхранение в жидком азчающийся теповышения выживаемосности клеток растенийрования, перед добав 4температура -70 С, Потом ампулы переносят в жидкий азот. После хранения (до 11 месяцев) ампулы оттаивают при 40 С, удаляют криопротектор. Клетки переносят в обычную питательную среду и высевают в чашки Петри с агаризованной той же средой, Одновременно определяют жизнеспособность клеток с помощью феносафранина.В таблице представлена зависимость жизнеспособности культур клеток от концентрации сыворотки крови теленка,1 Из таблицы видно, что наилучшийэффект наблюдается при полной заменесреды на сыворотку крови теленка.Таким образом, предлагаемый способобеспечивает более эффективное хранение клеток и тканей растений при низких температурах. После оттаиваниярост культуральных клеток, замороженных по предлагаемому способу, опережает рост клеток, замороженных по из-.вестному способу, на две недели, 25 48+60 210+28 420+91 15 тора питательную среду на няют сывороткой крови жив