Способ отслоения пленки-подложки при изготовлении препаратов для электронной микроскопии

Союз Советскик Социалистических РеспубликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВ ИТИЛЬСТВУ(22) Заявлено 141279 (21) 2852006/18-25с присоединением заявки Йо(23) ПриоритетОпубликовано 300881,Бюллетень И 9 32Дата опубликования описания 300 881 Р 1)М, Кл,з С 01 Н 1/28 Государстееииый комитет СССР ио делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения Е.Б. Медвецкий и Л,В. Кейсевич Киевский научно-исследовательский институт клиническойи экспериментальной хирургии и Киевский институтусовершенствования вра 4 рй(54) СПОСОБ ОТСЛОЕНИЯ ПЛЕНКИ-ПОДЛОЖКИ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ Изобретение относится к электрон ной микроскопии и может быть использовано для приготовления биологических препаратов.5 Одним из важнейших этапов подготовки ультратонких срезов к исследованию является их укладка на опорной сетке. Если срез поместить непосредственно на сетку, он под влиянием сил поверхностного натяжения оседает на ее трабекулы, из-за чего площадь среза сетки используется неполностью. Кроме того, в процессе просмотра возникает дрейф среза, что снижает ка чество электронограмм. Для борьбы с этим явлением применяют пленки-подложки из коллодия (нитроцеллюлозы), кварца, напиленного углерода, но наибольшее распространение получили пленки из формвара (поливинилформальдегида), так как они более устойчивы к внешним воздействиям и дают меньше артефактов. Благодаря пленке-подложке, расположенной между опорной сеткой и срезом, становится возможным поместить на одну сетку несколько срезов, рациональнее использовать ее площадь, предотвратить дрейф и деформацию срезов 136 Наиболее близким к предлагаемому является способ, состоящий в той, что для получения пленки-подложки непосредственно перед употреблением готовят 1-ный раствор формвара в дихлорэтане и наливают его в цилиндрический сосуд с притертой крьшкой, Затем берут обычное стекло, в течение нескольких минут выдерживают его в парах растворителя над поверхностью раствора, погружают его в раствор, извлекают, просушивают на воздухе, образовавшуюся при этом на поверхности стекла пленку иэ формвара подрезают с краев и отслаивают путем погружения стекла с пленкой в воду, причем если отслоение происходит, пленка остается на поверхности воды 23 .Однако известный способ отслоения пленки-подложки имеет существенные недостатки, заключающиеся в том, что отслоение удается осуществить далеко не во всех случаях, что значительно усложняет процесс, увеличивает расход формвара и увеличивает брак. Кроме того, необходимо каждый раз готовить свежий раствор формвара, тщательно контролируя и подбирая его концентрацию, при,этом для облегчения отслоения пленки-подложкиЭаказ 7536/64 Тираж 907 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал П 1 П "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 приходится спеЦиально испольэовать стекла с неровной поверхностью, что ухудшает качество пленки-подложки.Цель изобретения - упрощение способа и уменьшение брака.Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа отслое. ния пленки-подложки при изготовлении препаратов путем погружения стекла с нанесенной пленкой-подложкой в жидкость, в качестве жидкости используют 0,5-1,5-ный раствор фтористого натрия в 0,5-1,5-ной соляной кислбтеП р и м е р. В цилиндрический сосуд с притертой пробкой наливают 60 мл 1-ного раствора формвара в дихлорэтане (хлороформе). Химически чистое, сухое стекло с зеркальной поверхностью захватывают на край длин ным зажимом, не менее 2 мин выдерживают в парах дихлорэтаьа (хлороформа) над поверхностью раствора формвара, на 10 с погружают стекло в этот раствор, вынимают, в течение 5 мин просушивают на воздухе и в вертикальном положении медленно погружают стекло с образовавшейся на его поверхности пленкой из формвара в ранее приготовленный 1-ный раствор фтористого натрия в 1-ной соляной кислоте. При этом происходит быстрое и полное отслоение пленки из формвара со стекла на поверхность раствора, откуда ее переносят в чашку Петри, заполненную дистиллированной водой для дальнейшей работы.При указанных концентрациях растворов достигаются наилучшие результаты. При использовании слабых растворов процесс отслоения резко замедляется, а в случае сильных растворов наблюдается фрагментация и частичное растворение пленки-подложки.Поэтому при отклонениях от указанныхпределов .концентраций пленка становится непригодной для дальнейшей работы.Установлено также, что длительность хранения раствора формвара иколебания его концентрации в пределах0,3-1 существенного влияния на качество пленки-подложки не оказывают.Это способствует значительной экономии раствора формвара и снижению тре- Обований к точности его приготовления.Применение предлагаемого способапозволяет заметно снизить брак препаратов и сократить время на их приготовление, а также повысить качество 15 пленки-пОдложки за счет использования стекол с чистой зеркальной поверхностью. Способ отслоения пленки-подложкипри изготовлении препаратов для электронной микроскопии путем погружения стекла с нанесенной пленкой-подложкой в жидкость, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью упрощения способа и уменьшения брака, в качестве жидкости используют 0,5-1,5-ный раствор фтористого натрия в 0,5 -1,5-ной З соляной кислоте. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Техника электронной микроскопии.Под редакцией Д, Кэя. Пер. с англ .М., "Мир", с, 86-100.2. Васичев Б.Н. Электроннозондовыймикроанализ тонких пленок. М., "Металлургия", 1977, с. 223 (прототип),