Способ определения содержаниябелка b зерне

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(61) Дополнительное к авт. сеид-ву(22) Заявлено 07.09.79 (21) 2817485/30-15 1,51)М. Кл З 6 01 й 33/02// А 01 6 7/00 с присоединением заявки Йо Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения А.П. Левицкий и В.Б. Погорлецкая рдена Ленина и ордена Тр мени селекционно-генетичинститут ВсесоюзныКрасного 1) Заявитель к 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКА В ЗЕРНЕ тся к сел культур н лка, а та елка ьельв д е нонораР Изобретение относи екции сельскохозяйственных а повышение содержания бе кже к аналитической химии.Известен способ определения бзерне, основанный на реакции К аля 11.Недостатком этого метода является его громоздкость и неточность определения, так как по этому методу определяют сумму всех азотсодержащих веществ зерна, среди которых на долю белков приходится 70-90.Известен также способ определе" ния белка в зерне, основанный на об разовании окрашенного комплекса ионов меди и пептидных связей в молекуле белка, при котором экстрагирование белка проводят спирто-щелочным раствором с последующим колори м трированием при введении в раствор биуретового реактива 2.Однако необходимость предварительго экстрагировапия белка, длительсть определения и частые помутнения 25створа делают невозможной фотометЦель изобретения - повышение тоости анализа, упрощение процесса сокращение времени определения. Поставленная цель достигается тем, что экстрагирование белка проводят в присутствии биуретового реактива, при этом в качестве экстрагента используют нэопропиловый спирт, к которому добавляют биуретовый реактив в равном объеме. Причем используют биуретовый реактив следующего состава, г/л:Сегнетова соль 8-9Медный купорос 4-5Иодистый калий 4-5О,2 М раствор едкого натра До 1 лСоотношение биуретового реактива и изопропилового спирта 11 оптимально, так как все другие соотношения реактивов приводят к образованию трудноустранимой мути.Максимальное извлечение белка и максимальная интенсивность окраски раствора наблюдается спустя 20-30 мин после смешивания растительного материала с биуретовой смесью. Реакция мало зависит от механического встряхивания и температуры окружающей среды в пределах 20-30 фС. Оптимальными условиями являются продолжительность экстракцнн 30 мин с830239 последующим центрифугированием втечение 15 мин при 3000 д.Расчет концентрации белка производят по стандарту, которым являетсясуммарный белок, выделенный из мукизерна соответствующих культур (пшеница, ячмень, рожь и т.д,) .5Концентрация белка в зерне рассчитывается по следующей формулеЕоп Ссв К1Е свигде С - концентрация белка в зерне,вес.%,Е и Е - экстинкции биуретовых растлоз юворов соответственно дляопыта и стандарта при 545 нм;С - навеска белка стандарта, 15мг (обычно 5 мг),К - коэффициент содержания белка в препарате белка стандарта (обычно 80-89),е - навеска муки, мг.маКУльтура Сорт Экстинкция Ес Белок, % 0,299 0,302 13,960,305 Пшеница Накат 0;258 11,97 0,261 0,256 0,154 Саратовская0,155 7,17 Ячмень Эльгина 0,156 Черноморец 0,192 0,199Кукуруза реактива, при этом в качестве экстрагента используют изопропиловыйспирт, к которому добавляют биуретовый реактив в равном объеме.2, Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что используют биуретовый реактив следующего состава,г/л:Сегнетова соль 8-9Медный купорос 4-5Иодистый калий 4-50,2 М растворецкого натра До 1 л Формула изобретения ВНИИПИ Заказ 3348/55 Тираж 907 Подписное Филиал ППП фПатент", г. Ужгород, ул.Проектная,4 тПреимуществами предложенного способа определения содержания белка в зерне являются простота определения, небольшой расход реактивов, возможность определения содержания белка в одном зерне или даже в части его и большая производительность. 1. Способ определения содержания белка в зерне, включающий экстрагирование, добавление биуретового реактива, центрифугирование и фотоколориметрирование экстракта, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности анализа, упрощения процесса и сокращения времени определения, экстрагирование белка проводят в присутствии биуретового П р и м е р. Навески муки тонкого помола (20-40 мг) различных сортов зерна помещают в сухие центрифужные пробирки. Прибавляют 2,5 мл смеси 1:1 биуретового реактива и изопропилового спирта. Тщательно перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем центрифугируют при 3000 д в течение 15 мин и измеряют экстинкцию надосадочной жидкости при 545 нм на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре. Одновременно в тех же условиях определяют экстинкцию стандартного белка. Содержание белка в различных сортах злаковых культур при определении биуретовым методом представлено в таблице. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Бэйли Дж. Методы химии белков.М., "Мир", 1965, с, 271,2, Авторское свидетельство СССР9 450558, кл. А 01 6 7/00, 1973