Способ определения триптофана в спирторастворимых белках зерна

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК и 9)БО(н) 15 94 1 Н 1/04 ТЕНИ особы ления Все имеющиеся с триптофана требуют больших количеств что исключает их п спользованилка (50-10менение на них этапах селекцинеобходимо отобратшенным содержанием ных белках. когда как раз генотипы с повытриптофана в запа л р М а звешенную на вьшая точность ах наве ку белкае требуетс ом астворе пракный резульентритат) по фужную тового спир,1 н. е. Ко ьиров ет вав ча ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И СПНРЫТИЯМПРИ ПНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Научно-исследовательский институт сельского хозяйства ЦентральноЧерноэемной полосы им. В.В.Докучаева(56) Методы биохимического исследования растений. / Под ред, А.И.Ермакова, Л.: Колос, 1972, с.313-314.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИПТОФАНАВ СПИРТОРАСТВОРИМЫХ БЕЛКАХ ЗЕРНА(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции на качество зерна, а также аналитической химии. Цель изобретенияулучшение условий и повышение произИзобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции на качество зерна, а также к аналитической химии.Цель изобретения - улучшение усовий и повышение производительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца.На чертеже изображен калибровочный график.Спирторастворимые белки являются преобладающей фракцией в белковом комплексе зерна злаковых растений р отличаются низким содержанием триптофана. Для селекционного улучшения этой фракции необходима разработка способов, позволяющих проводить массовую оценку генотипов на содержание триптофана в спирторастворимых белводительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца. В навеске муки растворяют белок путем экстрагирования егораствором О, 1-0,2 н, КОН в 60-90 Хном этиловом спирте, осадок отделяютцентрифугированием. Затем ведутфотсметрирование при двух длинахволн, соответствующих областям максимального поглощения триптофана280 нм и тирозина 295 нм, причем осодержании триптофана в белке судятпо отношению полученных экстинкцийпо калибровочному графику или уравнению регрессии, при этом чем больше величина указанного отношения,тем выше содержание триптофана вбелках зерна. осуществляют следующим об так как количество белка в р тически не влияет на получе мещают в стеклянную цпробирку, запивают раствора щелочи, н КОН в 802-ном этил центрация спирта м ть в пределах 60-9ности спирторастворимые белки кукурузы лучше всего растворимы в 807,-ном этиловом спирте. Концентрация щелочи может варьировать в пределах 0,15 2,0 н., но лучше брать нижний предел из-за экономии реактива. Дальнейшее снижение концентрации нежелательно из-за возможности нейтрализации щелочи углекислотой воздуха, т,е. возникают ограничения по времени проведения анализа. Содержимое пробирки тщательно перемешивают стеклянной па.почкой до полного растворения белка (2-3 мин). Пробирки центрифугируют при 3000 об/мин для осветления раствора.Раствор белка заливают в кювету и фотометрируют при двух длинах волн в ультрафиолете, например 280 и 295 нм, Контролем служит растворитель т.е. спиртовой раствор щелочи.,лины волн подбирают таким образом, чтобы они нахОдились в пределах спектров поглощения триптофана и тирозина. 1 ри 25 этом наибольшая чувствительность достигается использованием длин волн, соответствующих максимумам поглощения этих аминокислот в спиртовом растворе щелочи .Содержание триптофана в спиртора 30 створимом белке определяют по заранее составленному калибровочному графику, в котором по оси ординат отложены отношения экстинкций (например, Е , Е в ), а по оси абс1 Воцисс - содержание триптофана в белке в процентах или любых других единицах. Для составления калибровочном го рафика используют набор препаратов белка с заранее известным и 0 неодинаковым содержанием триптофана.П р и м е р, Навеску белка (3 мг) помещают в центрифужную пробирку, заливают 5 мл спиртового оаствора щелочи, тщательно перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения белка, центрифугируют Ь мин при ЗООЙ об/мин, Затем полученный раствор фотометрируют дри 280 и 295 чм, 1 ри 280 нм получают величи ну экстинкции 0,604, а при 295 нм 0,719. Находят отношениеЕ 28 о 0 604--- 0,8400,719Содержание триптофана в белке находят по калибровочному графику (см,чертеж) или уравнению регрессии(оно составляет 0,2247),реимущества предлагаемого способа в сравнении с известным следую-.щие; повышается производительностьтруда аналитика в 3 раза и снижается себестоимость анализа на 50-607.;улучшаются условия труда, таккак отпадает необходимость использования концентрированной соляной кислоты;снижается необходимое для анализа количество белка до 1-5 мг, чтопозволяет использовать способ на ранних этапах селекции.Формула изобретенияСпособ определения триптофана в спирторастворимых белках зерна,включающий взятие навески муки, растворение белка, отделение осадка, фотометрирование и расчет содержания триптофана по калибровочному графику или уравнению регрессии, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью улучшения условий и повышения производительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца, растворение белка производят путем экстрагидрования его раствором 0,1-0,2 н. КОН в 60-90%-ном этиловом спирте, осадок отделяют центрифугированием, а фотометрирование ведут при двух длинаес волн, соответствующих областям максимального поглощения триптофана 280 нм и тирозина 295 нм, причем о содержании в белке судят по отношению полученных экстинкций, при этом чем больше величина указанного отношения, тем выше содержание триптофана в белках зерна.Составитель Л.КвардаковаРедактор М,11 етрова Техред Л.Олийнык КоРРектоР В.КабацийЗаказ 7525/3 Тираж 621 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина101