Способ диагностики активногодеструктивного процесса b тканяхмочевыводящих путей

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТВЛЬСТВУСоюз Советских Социалистических Республик(51) М.Кя.л С 01 М 33/48 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 30. 01. 81 Ю . Е . Вельтищев, Э . А . Юрьева, М,-Я. А, Мусаев,О . Г . Архипова, И, С . Игнатова, Ю. И . Хургин,И . А . Вульман, Г . Ф. ШЕманова, И . В . Казанскаяи С. С. ЧекветадзеМосковский научно-исследовательский инстихутпедиатрии и детской хирургии(7 ) Заявитель 54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОГО ДЕСТРУКТИВНОГО ПРОЦЕССА В ТКАНЯХ МОЧЕВМВОДЯЩИХ ПУТЕЙ медицине, и заболением белтв в орб т мл сы- суточ- аной.,ф, 1 ряхивРепо в н Изобретение относится ка именно клинической биохимиваний, протекающих с нарушеково-липидного обмена вещес5ганиэме человека.Известен способ диагностики активного деструктивного процесса в тканях мочевыводящих путей путем исследования крови и мочи 13.1Однако известный способ не о еспечивает высокой точности .Цель изобретения - повышение точности способа,Указанная цель достигае ся тем,что определяют активность эндогенныхФосфолипаз А и С и при наличии ихдиагностируют деструктивный процесс .Способ осуществляют следующим об-.разом,Для исследования берут 0,5 Юворотки крови или 5 мл мочи изной порции, заливают 96-ным этлом (1:3) на холоду и после вотвания центрифугируют 5 мин при2000 об/мин, затем сливают надосадочную жидкость, растворяют осадокв (,5 мл дистиллированной воды или0,13-ного раствора альбумина наФизрастворе. Полученную смесь носят в лунки (5 мм в диаметре) а яично-агароз Ной плести нке, которую подготавливают заранее . Для этого 0,24 г агарозы растворяют в ацетатном буфере с рН 5,0 (для определения активности фосфолипазы Л) или боратном буфере с рН 7,3 (для определения Фосфолипазы С) в горячей водяной бане, охлаждают до 50 С ио добавляют 0,25 мл 30-ного раствора яичного желтка на физрастворе (желток одного яйца смешивают с двумя частями Физраствора, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мнн, и для анализа используют надосадочную жидкость) . Приготовленную яично-агароэную смесь выливают в чашки Петри по 12,5 мл и оставляют на 15-20 мин для застывания на горизонтальной плоскости, после чего на полученной пластинке делают лунки при помощи пастеровской пипетки на расстоянии 2 см друг от друга. В лунки вносят полученную смесь из белка-фереита, н реакцию проводяттермостате при 50 С в течение 20 ч .зультаты оценивают в миллиметрахвеличине диаметра кольца, образующегося вокруг лунки, Для фосфолипазы А характерно просветление вокруг лунки, а для фосфолипаэы С -800878 помутнение кольца из-эа свойств продуктов, образующихся при распаде фосфолипидов, разных для каждой из фосфолипаэ . Для активации Фосфолипазы С используется 0,1 мМ раствор хлористого кальция и гепарин(конечная концентрация - 1), причем последний подавляет активность фосфолипазы А, что удобно при исследовании раздельной активности фосфолипаэ из их смеси. Кроме того, для определения активности фосфолипаз можно ис- ф пользовать модифицированный метод Гроссмана, а также реакцию о лицетовитилином.Модифицированный метод Гроссмана используют для количественного опре деления Фосфолипаэы С . Метод заключается в следующем . При помощи колоночной хроматографии иэ яичного желтка получают субстрат (Фосфатидилэтаноламин или фосфатидилколин), ;щ растворяют его в боратном буфере с РН 7,3 с добавлением детергентатритона Х, ионов Са и гепарина. По 3 ч.лученную субстратную смесь разливают по пробиркам, пробирки ставят в аппарат Варбурга для постоянного встряО хивания при температуре 50 С, затем в каждую пробирку добавляют по 0,2 мл полученной заранее смеси белка-фермента . Реакцию проводят в течение 10 мин,затем останавливают добавле- З 0 нием смеси хлороформа с метанолом (2:1) по 15-20 мл в каждую пробирку . Отстаивают в течение 3 ч в холодильнике . Водную фазу исследуют на присутствие этаноламина и фосфоэтанол амина с помощью высоковольтного электрофореза, Хлороформенную фракцию исследуют с помощью фотоколориметрии на убывание субстрата и с помощью тонкослойной хроматограФии с после дующей денситометрией на прирост диглицеридов . Количество фосфолипаэы С выражается по убыли субстрата в мкМ на суточное количество мочи и на стандартную поверхность тела. В норме при использовании обоих методов активность фосфолипазы С в крови отсутствует и имеется незначительная активность фосфолипаэы А, в моче здоровых детей фосфолипаза С также не определяется, но в незначительных фф случаях (особенно в неблагоприятный сезонный период) имеет место незначительная активность фосфолипазы А.П р и м е р 1. Больная Б., б лет. Получила ожог мочевого пузыря соля ной кислотой 2 г, назад, в результате у ребенка развился интерстициальный нефрит . На Фоне непрерывного лечения состояние ребенка в настоящее ВНИИПИ Йакаэ 10410/59 филиал ППП "Патент", г. время удовлетворительно, несмотряна имеющиеся нефростомы в почках собеих сторон . Все биохимические показатели крови (протеиыограмма, остаточный азот, липидограмма, ДФА) постоянно нормальны, СГБ не обнаруживается. В моче остается умереннаялейкоцитурия. Неясен вопрос о терапевтической тактике, так как неизвестно, ицет ли в почках активныйпатологический процесс (интерстициальный нефрит) или имеет место ремиссия. При анализе крови активностьфосфолипазы А оказалась минимальной0,03 мкМ/0,1 мм сыворотки,а в моче активность фосфолипазы С составляла 223,33 мкМ за 24 ч. Таким образом, полученные данные о фосфолипазной активности явились основаниемдля продолжения активной антивоспалительной терапии,П р и м е р 2. Больной М.,11 лет,Обследовался в больнице по поводурецидивирующего камнеобразования нафоне аномалии развития мочевыводящихпутей, Биохимический анализ кровибез отклонения от нормы. Решался вопрос об оперативном удалении камняиз левой почки, При обследовании крови на активность фосфолипаз определена незначительная активность фосФолипазы С (0,02 мкМ/0,1 мл сыворотки), в моче обнаружена значительная активность фасфолипазы С148 мкМ/сут). Операция была отложена,При вторичном обследовании активностьфосфолипаз в крови и моче не выявлялась . Проведенная нефролитотомияпрошла успешно без рецидива камнеобразования .Предлагаемый способ позволяет точно диагностировать активность деструктивного воспалительного процессав тканях мочевыводящих путей, выявитьэффективность проводимой терапии . формула изобретения Способ диагностики активного деструктивного процесса в тканях мочевыводящих путей путем исследования крови и мочи, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения точности способа, определяют активностьэндогенных Фосфолипаз А и С и приналичииих диагностируют деструктивный процесс,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1 . Тодоров й . Клинические лабораторные методы исследования в педиатрии. СоФия, 1963. Тираж 918 Подписное ужгород, ул, Проектная, 4