Способ получения антитело-иммуносорбента к небелковым антигенам

Союз Соеетсина Соцнапнстнческна РвсеубеаОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВ ЛЬСТВУ. (22) Заявлено 2306,79 (21) 2633785/28-03с присоединением заявки Нов(51)М КлЗА 61. К 47/403 Госуяавстаенямй комитет СССР яомам яюбретеннй я открытяб(72) Авторь 4изобретения О. Б. Кузовлева, С. В. Шабалина и.; И, ВРубцов научно-исследовательский ордена Фруктового красного Знамени институт эпидемиологии н мйкрббэюлОгии ( им. почетного академика Н.Ф. ГамалеиИзобретение относится к областимедицины, а именно иммунохимии.Известен способ получения антитело-иммуносорбента путем иммобилизации препаратов чистых антител,выделенных с помощью антиген-иммуносорбе нт,ов 1 .Однако известный способ не позво"ляет получить антителокммуносорбентк небелковым анткгенам.Целью .изобретения является получение аититело-иммуносорбента к небелковым антигеиам.Эта цель достигается тем, что способ получения антитело-кммуносорбента к небелкоэым антигЕнам осуществляют пуем смешивания небелкового аитнгеиа с антисывороткой, выпавший восадок комплекс антиген-антнтело отмывают, дОбавляют к диазотированному 20производному агара, далев смесь инкубируют, комплекс ан унген-антителорасщепляют и полученный антитело-иммуносорбент отмывают,25П к м е р 1 (в случае, еслисцецифический преципитат антигеиантитело растворим при рн 2,0),К 20,0.мл антксыворотки, содержащей 340 мкг/мл антител добавляют15,0 мг порошка. содержащего 0-холер- ЗО 2ный аиген, н 15,0 мл фнз, раствора, Это соответствует зоне небольшого избытка антител. Смесь оставляют на 20 мин нри 37 С, а затем - на 24 ч при +4 фС, Образовавшийся прецппитат несколько раз отмывают н".большими количествами О, 85-ным раствором МаС с - рН 7,0 и суспендируют в борноборатном буфере рН 8,6, Общее количество.белка в преципитате, определенное по методу Лоурк, составляет 4,6 мг. К диазотированному и отмытому производному агара добавляют суспензию преципитата и оставляют при рн 8, на 1 ч во льду, После этого рн смеси доводят до 2,0 осторожным добавлейием 0,1 и НС В, а через 10- 15 мин - снова до рН 8,6, Такую процедуру повторяют через 2 к 24 ч ии" кубацин Инкубацню проводят при +4 С в течение 3 суток, Затем рН смеси доводят до 2,0 и полученный антителоимМуносорбент отжэают при центрифугировании 0,85% раствором йаС с.до отсутствия редуцнруксаих сахаров в про" мывных водах, а затем - до рн 7,0.Емкость сорбентов определяют известным способом, Элюцию при этом проводят прк рн 2,0, а о количестве ак-" тигена в элютах судят по количеству788472 Состав и тель С, Иалюти наРедактор Т. Морозова Техред А, Вабийец Корректор С. Шекмар Тираж 687 Подписное Вниипи Государственного комйтета сссР по делам иэобретенйй И отКрытий 113035, Москва, 3-35, РаУшская наб., д, 4/5Эакаэ 6772/бб филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 редуцирующих сахаров, которые определяют с помощью антронового реактива.Емкость равна 80 мг 0-холерного антигена на 1 г сухого веса иммуносорбента.Б р и и е р 2 (в случае, если сяециФический преципитат не растворим при рй 2,0). укаэанным способом получают преципитат 0-холерного антигена с анти- телами иэ лощадиной антисыворотки.Содержание белка в преципитате,76 кг.,К 100 мг диазотированного и отмытого описанным способом производного агара добавляют суспенэию преципитата и оставляют при рН 8,6 нач во льду, Далее рН смеси меняют, 15 как описано выше, процедуру повторяют через 24 ч. Общее время инкубации - трое суток. Полученный сорбент отмывают 0,853-ным раствором ИаС, затем инкубируют 18 ч при +4 фС в 6 И 3 О растворе мочевины,2 раза отмывают тем же раствором и многократно 0,85-ным раствором ИаС. Емкость сорбента определяют какуказано, с той разницей, что элюциюпроводят 0,5 н Иаон,емкость равна 120 мг антнгена на1 г сухого веса сорбента.Предложенный способ.позволяет получить антитело-июеяуносорбента к небелковым антигенам,Формула изобретенияСпособ получения антитело-июуносорбента.к небелковым антигенам,о т л и ч а ю щ и И с я тем, чтонебелковый антиген смешивают с антисывороткой, выпаааий в осадок комплекс антиген-антитело отвевают, добавляют в диаэотированному, производному агара, далее смесь инкубируют,комплекс антиген-антитело расщепляют и полученный антитело-нммуносорбент отмывают,Источники инФормации,принятые во внимание при экспертизе1. Кузовлева О, Б. - Доклады Академии Наук, 203,5,1978, с.1193.