Фагкмi для идентификации r-плазмид

Союз Советских ОП ИСА НИЕ ИЗОВРЕТЕН ИЯ(45) Дата опубликования описания 07.05,8(51) М Кз С 12 Я 7/00 Гасударственный комитет СС С.Р ио делам изобретений и открытийз А. И. Коротяев, М. Ш, Манувахова, В, Н, Рейнгольд," Н, М, Шестопалова и И. В. Домарадский Кубанский государственный медицинский институт им, Красной Армии(54) ФАГ КМ 1 ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ Я-ПЛАЗМИД Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации вновь выделенных Я-плазмид.Известен донорспецифический фаг РЙ 5 для идентификации Я-плазмид Ц.Однако известный фаг РК 5 не позволяет идентифицировать Я-плазмиды 1,К, 1,Х групп несовместимости.Целью изобретения является новый фаг, обладающий донорспецифическими свойствами в отношении бактерий, несущих Я-плазмиды 1,К, 1,Х, групп несовместимости.Донорспецифический фаг КМ 1 для идентификации Р-плазмид 1,К, 1,Х групп несовместимости хранится в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф.Морфологические признаки.Фаг КМ 1 состоит из головки и отростка, заканчивающегося базальной пластиной, от которой отходят тонкие нити. Головка имеет форму октаэдра с осями симметрии 4: 3: 2. Средняя длина ребра головки 121-8 нм. Отросток фага прямой, длина его 127,2 й 6,3 нм, ширина 19,1=1,7 нм, ширина базальной пластинки 41,912 нм. Чехол отростка покрывает не весь стержень, оставляя часть его у головки открытой (14,8 нм). Чехол отростка способен ксокращению. При этом виден стерженьшириной 8 нм. Длина сокращенного чехла отростка 56,6 нм, ширина 23,3 нм. Фаг5 адсорбируется на поверхности клеток, несущих плазмиду лекарственной устойчивости рКМЯ 77 и образующих донорныеворсинки.Фаг КМ 1 не размножается в культуре10 Е со 1 М без плазмнд, ноприобретаеттакуюспособность при введении в этот штаммплазмиды рКМЯ 77, выделенной от больного дизентерией в Краснодарском крае.Кроме того, фаг лизирует клетки штаммаЕ со 11 М с плазмидами групп несовместимости 1,К, 1,Х. При титровании фага вкультуре Е со 11 М с плазмидами рКМЯ 77,Р 6 К (представитель группы 1 Х) негативные колонии прозрачные, около 1 мм в диа 20 метре. При размножении на Е со 1 М сплазмидой Р 16 негативные колонки сохраняют размеры, но становятся мутными.Фаг КМ 1 лизирует все штаммы Е. со 1К 12, независимо от наличия или отсутст 25 вия в них плазмид,П ример ы. С целью выделения донорспецифического фага используют плазмиду рКМЯ 77. Плазмида обнаружена уштамма 31 пде 11 а 1 ехпег 1 2 а, выделенногоот больного дизентерией, и контролирова786330 Ф ор мул а изобретения Техред И. Заболотнова Корректор И Осиновская Редактор П, Горькова Заказ 362/271 Изд. Мз 128 Тираж 505 Подписное ИПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Тип. Харьк. фил. пред. Патент 3на устойчивостью к пенициллину, хлорамфениколу, стрептомицину, тетрациклину. рКМЯ 77 методом коныогации была передана в штамм Е. со 11 М, обладающий хромосомной устойчивостью к рифампицину. Частота передачи плазмиды 1 10-,Е. со 1 М с плазмидой рКМЯ 77 нелизируется стандартными донорспецифическими фагами Я, /1, /2, РЯ 4, РКМЯ 77, тормозит размножение фага Х в 30 раз, не подавляет размножение фага ТЗ, рКМЯ 77 не угнетает Р - опосредованную конъюгацию, т. е, является Йп. Проверка совместимости плазмиды с представителями групп 1,Л - РР и 1, Р показывает, что она не относится ни к одной из этих групп. Источником выделения фата служат сзочные воды, которые предварительно центрифугируют при 6000 об/мин с целью избавления от посторонней микрофлоры, Затем применяют метод обогащения, состоящий в смешивании 1 мл сточных вод, 1 мл ночной бульонной культуры ЯЫце 11 а йехпег 1 2 а с плазмидой рКМЙ 77 и 9 мл фагового бульона. Смесь инкубируют в течение ночи при 37 С, затем обрабатывают хлороформом (1; 10 30 мин при постоянном перемешивании), центрифугируют при 6000 об/мин для осаждения убитых бактерий взвешенных частиц и повторно обрабатывают хлороформом в течение 10 мин.Присутствие фага в центрифугате опре,деляют титрованием по методу бга 11 а. С этой целью делают ряд разведений фага 1: 10, затем к 1 мл каждого разведения добавляют 0,2 мл культуры Е. со 11 Мв,стационарной фазе роста, инфицированной соответствующими плазмидами и без них(контроль), Так исследованы 12 проб сточных вод. Из колоний фага, выросших в культуре Е, со 11 М с плазмидой рКЬЯ 77, фаг отвивают и подвергают дальнейшему 5 излучению.Методом титрования со бга 11 а и с помощью спот-теста устанавливают, что выделенный фаг не способен размножаться в культуре Е, Со 11 М, не содержащей плаз мид, но приобретает такую способность привведении в этот штамм плазмиды рКМК 77, что свидетельствует о наличии у него донорспецифических свойств в отношении этой плазмиды.15 Фаг обозначен КМ 1, Рабочий титр1 10 в - 1 10 частиц в 1 мл. Фаг не инактивируется хлороформом.Использование фага позволяет быстроопределять принадлежность вновь выяв ленных Я-плазмид к группам несовместимости 1 К, 1 Х, что ранее не представлялось возможным, так как фаги, донорспецифические в отношении штаммов с плазмидами этих групп, не были выделены.25 Фаг КМ 1 для идентификации Я-плазмид (хранится в коллекции Тбилисского 30 НИИ вакцин и сывороток под номеромФ). Источник информации, принятый вовнимание при экспертизе:35 1. вопд Р. Н., Вгуап 1 Е. СЬагас 1 егЫ 1 сз о 1 РК 5, а 11 р 1 д-соп 1 а 1 п 1 пд р 1 азпи 0-с 1 ерепс 1 еп 1 рйадеъ, Сап. 1. М 1 сгоЬ 1 ооду 1978, Ч. 24, М 7, р. 875 - 882.