Способ определения термолабильных вирусотропных ингибиторов

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ ц,780261 Союз СоветскихСоциалнстическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(23)Приоритет Гоеуааретеанный квинтет СССР во двлаи изфбретеннй н вткрытнйОпубликовано 07. 09. 81. Бюллетень3 Дата опубликования описания 09. 09, 81(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРГ 10 ЛАБИЛЬНЫХ ВИРУСОТРОПНЫХИНГИБИТОРОВ Изобретение относится. к медицине, в частности. к области микробиологии и может применяться в массовых иммунологических исследованиях, которые необходимы для правильной оценки восприимчивости населения к вирусным инфек циям 1 гриппу и другим ОРЗ вирусной этиологии).Известен. способ определения термолабильных вирусоитропных ингибиторов1 О в РТГА.ингибиторочувствительиого вируса гриппа А 1 у людей, не содержащих антител к вирусу гриппа А 1 11. Недостатком указанного способа оп 1 ределения термолабильных ингибиторов у людей является ограниченность его использовайия из-за необходимости спе- циального подбора контингента лиц, не соДержащих антител к вирусу гриппа,20 с помощью которого они определяются, что значительно снижает чувствительность метода, а также определенная сложность постановки РТГА в связи с 2необхоцимостью использовать нативные куриные эритроциты.Целью изобретения является повыше ние чувствительности и упрощение способа определения термолабильных вирусотропных ингибиторов сыворотки.Эта цель достигается тем, что для определения термолабильных вирусотропных ингибиторов, к сыворотке крови добавляют взвесь хлопьеобразующих дрожжей 5 ассЬаговусез сегеч 1 з 1 а 1 и нормальную лошадиную сыворотку, смесь выдерживают в течение 1-2 час при температуре 20-22 С и по образованиюохлопьевидного осадка определяют наличие термолабильных вирусотропных ингибиторов.Способ осуществляют следующим. образом;У обследуемых людей забирают кровь из вены в количестве .1-2 мл и приготавливают сыворотку, в которой наряду с антителами определяют термолабильные ингибиторы. Сыворотку разводят вЗО 7802 0,025 мл физиологического раствора хлористого натрия, начиная с 1:5 до 1:320 в лунках полистироловых пластин, затем в каждую лунку добавляют нормальную лошадиную сыворотку (разведенную 5 .1:40) в количестве 0,025 мл и 34-миллиардную взвесь хлопьеобразующего штамма дрожжей 5 ассЬагощусез сегечза 1 (по стандарту мутности для кишечных бактерий) также по 0,025 мл. Смеси 10 встряхивают и оставляют на 2 час при 20-22 С для оседания дрожжей.оПоложительным считается результат, при котором дрожжи. выпадают в виде хлопьев на дно лунки, выстилая его. 15 -При отрицательном результате дрожжи оседают в виде колечка или круга с ровными краями.Лица, сыворотка которых не содержит термолабильных ингибиторов или 20 еодержит их в разведении, меньшем 1.20,являются потенциально восприимчивыми к гриппу и другим ОРЗ вирусной этиологии, что может проявиться в более тяжеломтечении заболевайия 25 появлении осложненных форм.Напротив, контингент лиц, у которых содержание термолабильных ингибиторов в сыворотке превышает титр 1;20, можно считать в определенной мере резистентными к острым респира торным инфекциям, что выражается в более легком теченииу них гриппа и других ОРЗ.П р и м е р 1. У одного обследуемого лица берут кровь из вены в количестве 1-2 мл, приготавливают сыворотку, которую последовательно разводят в лунках полистироловых пластин в 0,025 мл физиологического раствора, начиная с 1:5 до 1:320, Затем в каждуюЮ лунку капельницей добавляют нормальную лошадиную сыворотку разведенную 1:40 по 0,025 мл и 34-млрднуювзвесь хлопьеобразующего штамма дрожжей45 Засей. сегеч 15 а 1, а также по 0,025 ил. Смеси встряхивают и оставляют 2 час для оседания дрожжей при 20-220 С. В первых шести лунках обнаруживают выпадение хлопьев дрожжей, что указыва 50 ет на наличие ингибиторов у этого лица в разведении сыворотки, равном 1;160, т.е. на высокий уровень их содержания в сыворотке. Зти данные согласуются с результатами, полученными параллельно общепринятым методом РТГА с вирусом гриппа А 1, с помощью которого обнаружили термолабильные ингибиторы в обследуемой сыворотке в разведении, равном 1:80 ингибиторы разрушались после прогревания сыворотки при 65 С в течение 30 минсПолученный результат обследованияуказывает на высокую резистентностьданного лица к гриппу и другим острым респираторным заболеваниям, которая будет способствовать если непредотвращению инфекции, то во всякомслучае более легкому ее течению.П р им е р 2. У обследуемого лица проводят аналогичное исследование( т,е, берут кровь, готовят сывороткуи т.д.), Однако при учете зарегистрировано выпадение хлопьев дрожжейтолько в первой лунке, что собтветствует разведению сыворотки 1:5. В остальных лунках дрожжи осели на самоецно в виде колечка с ровными краями.Такой результат можно расценивать канизкий уровень ингибиторов. Параллельно общепринятым методом РТГА с вирусомгриппа А 1 ингибиторы в этой сывороткетакже не обнаружены. Результат обследования второго лица свидетельствуето его возможной восприимчивости .кгриппу и другим ОРЗ вирусной этиологии,которая может проявиться в более тяжелом течении заболевания, появлениюосложненных формПредложенный способ является высокочувствительным и обеспечивает значительно больший процент возможных обследований, более доступен и прост,это делает его пригодным для применения в массовых обследованиях большогоконтингента люДей,Формула изобретения)Способ определения термолабильныхвирусотропных ингибиторов в сывороткекрови, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, к сывороткекрови добавляют взвесь хлопьеобразующих дрожжей ЗассЬагощусез сегеч 151 а 1и нормальную лошадиную сыворотку,смесь выдерживают в течение 1-2 часпри температуре:20-22 оС и по образованиюхлопьевидного осадка определяют наличиетермолабильных вирусотропныхингибиторов.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Неведомская Г.Н., Лузянина Т.Я.,Смородинцев А,А., "Результаты сравнительного изучения антигемагглютиниру-ющей активности термолабильных бетаингибиторов в сыворотках людей". Сб.11Механизмы противогриппозного иммунитета", 1972, с. 86-96.