Способ определения резистентности к вирусу гриппа

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛ И СТИЧ Е СКЕСПУБЛИК 9) Я,)5 С 3 5 ЕНИЯ ОБР ЛЬСТВ следовательски мьева, Л.Г.КаторПоповаяция между уровета и заболевае. - Автореферат,ИСТЕНТ(57) Изобможет бмуннойэпидеми ицине и енки имАи Вв вышение ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИ К АВТОРСКОМУ СВ(56) 1. Гордон М,А. Коррелнем гуморального иммунимостью вирусом гриппа. Аканд. дисс., Л., 1975,СОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗ ВИРУСУ ГРИППАретение относится к ме ть использовано для о ащиты людей от гриппи. Цель изобретения - и Изобретение относится к медицине (к эпидемиологии и иммунологии вирусных инфекций) и может быть использовано для оценки иммунной защиты людей в эпидемии гриппа А и В,Грипп является глобальной инфекцией, приносящей значительный урон здоровью населения, экономике и обороноспособности страны, Для проведения целенаправленных профилактических мероприятий в открытых (предприятия) и изолированных (воинские гарнизоны, училища, интернаты) коллективах необходима разработка надежного способа контроля защищенности людей в предстоящую эпидемию.Известен метод основания на количественном определении у людей в реакции непрямой гемагглютинации иммуноглобулинов А в секретах верхних дыхательных путей, Однако названный способ не имеет самостоятельного значения и может быть включает в себясывороток крориод, определе- ТГА через 0,25 ч, 16,0 ч контакта исление по форной ак 1 ивности выделение групами. Эту группу, болевания грип - в 85-900 слупростотой иество передтраки защиты отзаключается в ности (точность , 3прототипом наточности способа, Способ следующие операции: забор ви в предэпидемический пе ние количества антител в Р 0,5 ч, 1,0 ч, 2,0 ч, 4,0 ч и сыворотки с антигеном, выч муле индекса функциональ антител у обследуемых лиц, пы с высокими (10,0) индекс считают защищенной от за пом. Совпадение прогноза чаев. Способ обладает доступностью, его преимущ диционным методом оце гриппа по титрам антител значительно большей точ возрастает по сравнению с 75 ф) использован лишь в совокупности с исследованием сывороток крови на наличие циркулирующих в крови антител.Наиболее близким к заявленному(прототип) является широко применяемый способ оценки резистентности к гриппу А и В, предусматривающий количественное выявление у людей в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) циркулирующих в крови специфических антител Ц По данным авторов, имеется четкая корреляция между заболеваемостью людей в коллективах в эпидемию гриппа и исходными титрами этих антител: лица, имеющие титры 1:20 и меньше (1:20) заболевают гриппом существенно чаще, чем лица с более высокими титрами. Однако, при использовании прототипа при обследовании колгективов доля людей с низкими титрами антител (1:20) к возбудителю предстоящей эпидемии составляет подавляющее большинс 1 во (901770908 10 25 30 Г 15;Т 14 ) +(Т 16: Т 16 )где Т 15 - ТО,25 -антител посленом в течениечаса; Ч 1 - индекс ФА а ел. рочным ИК, т,е, когются после достижео показателя,:Т,5Т льно 50,где Тп)ах - обратнаго титра антител;Ч 2 - и)декс ФДалее выделясом ФА антител 10ее защищенной отэпидемию,со я величина макси на в пальц ния з личес сывор нальн 0,2 мл 1,8 мл удале маггл ку пр течен та кровь иэ сле осаждеоротку в коабря 1989 г. на функциоДля этогопробирке с ра. С целью ибиторов ге сыворот- при 56 С всерологичеспо 1970 льо. 95). Однако из их числа заболевают гриппом лишь 30-70, а остальные остаются резистентными, т.е. точность способа довольно низка.Целью предлагаемого способа является повышение точности определения устойчивости людей к заболеванию гриппом.Способ осуществляют следующим образом,В ноябре у лиц, у которых необходимо определить устойчивость к гриппу в предстоящую эпидемию, берут образцы крови иэ пальца в,количестве 1,0 мл. После осаждения эритроцитарной массы сыворотку отсасывают, разводят ее в пробирках до рабочего разведения 1:10(0,2 мл сыворотки + 1;8 мл физраствора) и прогревают при 56 в течение 1 часа в водяной бане. Далее ставят кинетический вариант РТГА, для чего в лунки серологических макропланшет вносят по 0,1 мл физиологического раствора, Каждую исследуемую сыворотку (разведение 1:10) делят на 6 частей по 0,2 мл каждая и титруют на планшете с разведения 1:10 до 1:320. Таким образом, получают 6 раститрованных образцов одной и той же сыворотки, необходимых для различных временных контактов с антигеном.Каждую порцию раститрованной сыворотки соединяют (строго фиксируя время) с 0.1 мл 4 ЛЕ антигена актуального вируса гриппа, Из трех ныне циркулиру(ощих сероподтипом /А(Н 1 г)1), А(НЗ)ч 2) и В/ выбирают обратные величины титров онтакта сыворотки с антиге,0; 4,0; 2,0; 1,0; 0,5 и 0,25 твах - время достижения максимальноитра антител; А антител,ют группу людей с индеки выше (10) и считаюгриппа в предстоящую Примеры конкретного выполнениба, П р и м,е р 1. У Новохатского А,Арождения, новобранца учебного ба антиген из актуального штамма того сероподтипа, который по ежегодному прогнозу Всесоюзного центра по гриппу и ОРЗ вызовет эпидемию, Соединение сыворотки с 4 АЕ антигена осуществляют по следующей схеме; 1-я порция - в 20 часов, 2-я - в 8 часов утра следующего дня, 3-я - в 10 часов, 4-я -в 11 часов, 5-я - в 11 часов 30 минут и 6-я - в 11 часов 45 минут. В 12 часов во все лунки планшетов вносят по 0,2 мл 1 эритроцитов кур. В итоге получается, что 1-я-я порции сыворотки конкретного человека контактируют с антигеном соответственно 16, 4, 2, 1, 0,5 и 0,25 часа.После оседания эритроцитов фиксируют титры антител в зависимости от времени контакта исследуемой сыворотки с антигеном, что дает возможность наблюдать за скоростью, интенсивностью и прочностью20 соединения антител с антигеном (образованием иммунных комплексов) у разных людей. Данные процесса оцениваются в едином интегральном количественном показателе - индекс функциональной а ктивности (ФА) антител.Подсчет индекса ФА осуществляется по двум формулам:а) для случаев с прочными иммунными комплексами (ИК), т.е. когда титры антител за 16 часов контакта сыворотки с антигеном не снижаются после достижения максимального показателя, применяется формула,б) для случаев с неп да титры антител снижа ия максимально используется формула: конце ноября 1988 г. взя а в количестве 1,0 мл. По ритроцитов отделили сыв тве 0,6 мл, В начале дек отку исследовали в РТГА ую активность антителсыворотки соединили в физиологического раство ния термолабильных инг ютинации разведенную 1 огревали в водяной бане ие 1 часа, Далее в 6 рядов1770908 го+ 7,5 п снизился черездекса ФА антител з,о ского макропланшета, содержащего во всех лунках, кроме первой, по 0,1 мл физраствора, внесли в первые и вторые лунки по 0,1 мл прогретой сыворотки, Все б порций сыворотки раститровали со второй лункидо 5 разведения 1:320, Таким образом, получили 6 разведений сыворотки с 1;10 и 1:320.В качестве антигена использовали актуальный ингибиторорезистентный вирус А/Тайвань/1/86 (Н 1 Й 1), поскольку прогноз 10 Всесоюзного центра по гриппу и ОРЗ свидетельствовал о возникновении эмидемии гриппа А(Н 1 М 1),Каждую порцию раститрованной сыворотки соединяли последовательно с 0,1 мп 15 4 АЕ антигена по следующей схеме: 1-ая порЗгО: 5 +(ЭгО; 10 Ч 1 -2 За титр антител по прототипному способу принимали показатель, который фиксировали после контакта сыворотки с антигеном в течение 1 часа, т.е. 1;10.Таким образом, Новохватский А.А. имел 25 перед эпидемией титр антител 1;10 и индекс ФА антител 57,5. Прогноз по прототипному способу - не защищен от гриппа и заболеет, по предлагаемому- защИщен и не заболеет,Вспышка гриппа А(Н 1 Й 1) в коллективе 30 развилась в конце января и закончилась в феврале 1989 г. В начале марта 1989 г. у А,А.Новохатского взята вторая сыворотка крови по описанной выше методике, и парные сыворотки (отобранные до и после эпи демии) исследованы в РТГА с вирусом гриппа А/Тайвань/1/8 б (Н 1 И 1) традиционным способом на предмет обнаружения диагностического прироста антител. Титр антител 1-й сыворотки - 1:10, второй - 1:10, 40 Учитывая, что в период вспышки у А,А.Новохатского не обнаружено клинических проявлений болезни, а также отсутствовала диагностическая сероконверсия антител, сделан вывод о том, что Новохатский грип пом не болел, т.е. был защищен вследствие высокой ФА специфичности антител, несмотря на их низкий количественный показатель,П р и м е р 2. Приходько И.Г 1970 г, 50 рождения из того же коллектива, Все манипуляции по забору и исследованию сывороток крови проделаны как в примере 1.При постановке кинетической РТГА получены следующие данные: контакт сы воротки с антигеном в течение 0,25 часа - титр антител 1;20, контакт 0,5 часа - титр 1;20, контакт 1,0 час - титр 1:20, контакт 2,0 часа - титр 1:20, контакт 4,0 часа в ти 1:20, контакт 16,0 часов - титр 1:10,ция - в 20 часов, 2-ая - в 8 часов утра следующего дня, 3-я - в 10 часов, 4-я - в 11 часов, 5-я - в 11 часов 30 минут и 6-я - в 11 часов 45 минут. В 12 часов в каждую лунку вносили 0,2 мл 1(г эритроцитов кур. После оседания эритроцитов фиксировали титры антител, Были получены следующие показатели в зависимости от времени контакта сыворотки с антигеном: контакт 0,25 часа - титр 1:5, контакт 0,5 часа - титр 1;10, контакт 1,0 часа - титр 1:10, контакт 2,0 часа - титр 1:320,-контакт 4,0 часа - титр 1:320, контакт 16,0 часов - титр 1;320, Поскольку титр антител не сниэился после достижения максимального значения, по формуле 1 рассчитали индекс ФА антител Поскольку титр антит 1 б часов, для подсчета ин использовали формулу 2:) Согласно прототипному способу титр антител через 1 час контакта сыворотки с антигеном соответствовал 1:20.Таким образом, И.Г.Приходько имел перед эпидемией титр специфических антител 1:20 и индекс ФА этих антител 3,0, Прогноз на предстоящую эмидемию по прототипному и предлагаемому способу - заболеет.Во время вспьшки И.Г,Приходько перенес грипп с клиническими проявлениями болезни. Серологические исследования парных сывороток в РТГА с тем же антигеном подтвердили диагноз: прирост специфических антител с титра 1:20 до 1:160.Клинические и серологические данные по использованию предлагаемого способа показали, что из 132 исследуемых лиц переболели гриппом 18 (14 О), не заболели 114 человек (86%), Совпадение прогноза по предлагаемому способу - 86 О, по способу- прототипу - 14, т.е. точность прогноза по предлагаемому способу была выше, чем по прототипу на 72;, В отдельные эпидемии этот показатель колебался от 72 до 78 О/, Во всех случаях разница показателей точности прогноза по обоим методам статистически достоверна при Р 0,01 или 0,001.Таким образом, при использовании предлагаемого способа точность определения устойчивости людей к гриппу возросла на 70-78% по сравнению с прототипным, что свидетельствует о наличии положительного эффекта.1770908 Формула изобретения Составитель Г, КрюковаРедактор А. Козлова Техред М.Моргентал Корректор М. Ткач Заказ 3740 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4 Й ФПроизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Способ определения резистентности к вирусу гриппа, включающий забор крови, выделение сыворотки, инкубацию ее с вирусом гриппа, выявление противогриппозных антител, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, сыворотку перед выявлением антител инкубируют в течение 025 ч,05 ч, 1,0 ч, 20 ч,40 ч, 16,0 ч, вычисляют индекс функциональной 5 активности антител, и при его величинебольше или равной 10 определяют резистентность к заболеванию гриппом,