Хроматографический носитель для фракционирования олигонуклеотидов

"Д Союз Советских Социалистицеских республик(22) Заявлено 28.03.78 (21) 2598242/2351) М. Кл. б 01 Х 31/08 с присоединением заяв Государственный квинте СССР оо делам нзоорвтвннй н отнрытнй(53) УДК 543.544 (088.8) ата опубликования описания 25.09.79 72) Автор изобретени И. Ямковой(71) Заявите овосибирский государственный университетИзобретение относится к области разделения смесей биологического происхождения.Хроматография в водноорганических системах на различных сорбентах в случае. когда сорбент насыщается органической фазой, переносится в колонку и далее уравновешивается водной фазой, называется хроматографией в обращенной фазе.Известен х ром атографи ческий носитель, используемый для фракционирования нуклеиновых кислот и их компонентов - КР 0-1, представляющий собой хромосорб % (с диаметром гранул 125 - 150 мкм, промытый кислотой и обработанный диметилдихлорсиланом), пропитанный диметилдилауроиламмоний хлоридом в изоамилацетате 1.Из известных технических решений наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является хроматографический носитель для фракцчонирования олигонуклеотидов на основе полиэтиленового порошка, на который нанесена органическая фаза 12.Недостатком известного хроматографического носителя является нестабильность его органической фазы при использовании в качестве элюентов растворов, содержащих гидрофобные соединения. Как показали результаты проведенных нами исследований, на одной колонке с этим носителем при вве дении в элюируюший раствор 0,01 М имидазольного буфера (рН 7,0) может быть сделано не более 5 - 10 анализов олигонуклеотидов вследствие постепенного вымывания с полихлортрифторэтиленового порошка недостаточного количества гидрофобного адогена 464.Целью изобретения является повышениестабильности носителя.Поставленная цель достигается тем, чтов качестве органической фазы служит тетра октиламмоний бромид при следующем соотношении компонентов, вес. %:Тетраоктиламмонийбром ил 1 - 5 Полихлортрифторэтиленовый порошок Остальное Пример. Тетраоктиламмоний бромида вколичестве 0,1 г растворяют в 80 мл хлороформа в круглодонной колбе на 250 мл.Вносят в колбу 4 г полихлортрифторэтиле685975 Формула изобретения мкМ г Соста на Техред Тираж ИИПИ Государстве по делам изобрет 5, Москва, Ж - 35 ППП Патент, г, витель Л. ЖарковаО, Луговая Корре090 Подпинного комитета СССРений и открытийРаушская наб., д. 4Ужгород, ул. Проектн Редактор И. ШубиЗаказ 5452/45цн ктор Есное ка 1130филиал 4 нового порошка (с диаметром гранул около 1 О мкм) и содержимое колбы хорошо перемешивают, разбивая комочки слипше- гося порошка стеклянной палочкой, Выдержав смесь 24 ч при комнатной температуре, хлороформ упаривают досуха на ротационном испарителе. Полученный хроматографический носитель переносят в стеклянный гомогенизатор, приливают к нему 100 мл 0,01 М имидазольного буфера (рН 7,0), содержащего КС 1 в концентрации 2 М и растирают стеклянным пестиком до образования гомогенной суспензии, оседаюшей на дно гомогенизатора. После этого носитель уравновешен водной фазой и готов для приготовления колонок. Полученный хроматографический носитель обладает способностью разделять олигорибонуклеотиды как при элюции градиентом концентрации хлористого калия в 0,01 М имидазольном буфере (рН 7,0), так и при элюции аналогичным раствором, содержашим 7 М мочевину (вещество, разрушающее водородные связи и ослабляющее гидрофобные взаимодействия). В обоих случаях на одной колонке было проведено до 100 анализов без изменения свойств носителяСвойства хроматографического носителя на основе полихлортрифторэтиленового порошка с нанесенным на него тетраоктиламмоний бромидом не изменяются также при варьировании процентного содержания тетраоктиламмоний бромида в носителе в пределах от 1 до 5% (см. чертеж) На чертеже нанесена кривая зависимостиемкости хроматографического носителя на основе полихлортрифторэтиленового порошка с нанесенными на него тетраоктиламмоний бромидом от содержания тетраоктиламмоний бромида в носителе, в %, Емкость определялась по достижении плато на кривой адсорбции гексарибоаденилата из 0,01 М имидазольного буфера (рН = 7,0).Как видно из чертежа, емкость носителяпри используемых пределах содержания тет раоктиламмоний бромида максимальна ине зависит от его количества. Хроматографический носитель дляфракционирования олигонуклеотидов на основе полихлортрифторэтиленового порошка насыщенного органической фазой, отличаюи 1 ийся тем, что, с целью увеличения стабильности носителя, в качестве органической фазы (служит) тетраоктиламмоний бромид при следующем соотношении компонентов, вес. %:Тетраоктиламмонийбромид 1 - 5Полихлортрифторэтилеи новый порошок ОстальноеИсточники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Ке 1 гпегз А. Р. а. о. )оцгпао(В 1 ос 11 егп зо 24010 3979 39832. Кое В. а. о. В 1 осйегп В 1 орйуз Ас 1 а319,1, 25-36 (прототип).