Способ отбора авирулентных иммуногенных мутантов бактерий кишечной группы

Союз Советских Соиалистицеских РеспубликОП ИКАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯй АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 03,02,78 (21) 25811347/2813 ди 668942 М. Кл К 1/02 с и инением заявкиГосударстаехиый кюмхтет СССР по делам хэпбретенхй . и открытий) УДК 576.8 .093.1 (088.8 убликовано 25.06.79. Бюллетень2 та опубликования описания 25.06.79 72) Авторы изобретен Г. И. Бурд, Т. А. Льчева, А. М. Умяров, Т. Н, Большак В. М. Бондаренко, В. Г. Петровская и В. Н, Гершанович 71) Заявител Ордена Трудового Красного Знамени институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н. Ф. Гамалеи АМН СССР СПОСОБ ОТБОРА АВИРУЛЕНТНЫХ ИММУНОГЕННЫХ МУТАНТОВБАКТЕРИЙ КИШЕЧНОЙ ГРУППЫ пта га 1 цс ага обрабатывают м розогуанидииом, 500 мкл/мл), р 100 раэ минимальной солевой с щей 0,4% глюкозы и необходим факторы, и нодращивают 18 час тем клетки иикубируют в течен чалке при 37 С в той же среде, вием 400 ел/мл пенициллина. агеном осит т в содержа. товые 7 С, Заас на ка.добавле азводяредой,е б вышение жизе,Изобретение отн ся к медицинской мик.робиологии,Известен способ отбора авирулентных имму.ногенных мутантатов бактерий кишечной группы путем посеваисходной суспенэии бактерийна плотную питательную среду с последующимвыращиванием в присутствии антибиотика и от-.бором мутантов 11.Опако такой способ не обеспечивает высокой жизнеспособности мутантов,Делью изобретения является по1 Онеспособности мутантов.Это достигается тем, что исходную суслеэню перед посевом обрабатывают мутагеном, вы.севают на минимальную солевую среду с глюко.зой, инкубнруют, затем добавляют пенициллин15и инкубируют на качалке, далее; пересевают наиндикаторную среду с глюкозой, после инкубироваиия отбирают бесцветные колонии и клоньруют на индикаторных средах с углеводами, и20отбор мутагенов проводят по признаку неспособности к ферментации нескольких углеводов.П р и м е р. Исходный штамм ЗЫ 9 еаИехпег 2 а 63 с генотипом акр ис о ху ао Тем самым популяцию исходных бактерий,утилнзирующих глюкозу, обогащают мутантами, не ферментирующими углевод, так какпенициллин убивает только делящиеся клетки.После этого производят высев обработанной пенициллином суспензии на чашки, содер.жал ие агаризованиую индикаторную среду ЭМСследующего состава: пелтон 1%, йаС 0,8%, глюкоза 1%эозин 0,4%.метиленовая синь 0,065%.При росте на среде ЭМС бактерии дикового,типа сбражнвают глюкозу, образуют колониигусто. черного цвета с металлическим (бронзо-:вым) блеском. Мутанты, не утилиэируюшиеглю;озу, дают бесцветные колонии,Мутантные колонии, отобранные.на ср еЭМС плюс глюкоза, колонируют иа той же сред668942 Формула изобретения Составитель С. МалютинаТехред И. АсталошКорректор А. Власенко Заказ 3606/17 . Тираж 525 Подписное ЦВИИПИ Государственного комитета СССР во делам изобретений л открытий 113035, Моск а, Ж.-35,. Раушская наб., д. 45Филиал ПБП фЧЬтещф,г, Ужгород, ул. Проектная, 4 проверяют на способность ферментировать мапноэу, фруктозу и маннит на среде ЭМС, содержащей вышеуказанные углеводы, и отбираютте, которые .не сбраживают все сахара одновременно. 3Испьггания мутантов, выделенных предлагаемым способом, т. е. селекцион рованных пофпризнаку неспособности утилизировать глюкозу, манноэу, маннит и фруктозу, показывают,что все они теряют вирулентность, сохраняют 1 Оиммуногенность, обладают нормальной жизнеспособностью при культивировании на обычныхпитательных средах и стабильно сохраняют приобретенные признаки,не образуя ревертантов, какспонтанно, так и после обработки мутагеном, ИПрименение предлагаемого способа позволитвыделять авирулентные иммунногенные мутаьгты бактерий кишечной группы, сохранившие, нормальную жизнеспособность при культивнровенин на средах, не содержащих антибиотик, 26что упростнт и удешевит производство живых.Эакции, а также товысит качество вакцинныхГфпаратое. Способ отбора авирулентных йммуногенныхмутантов бактерий кишечной группы путем посева исходной суспенэии бактерий на плотнуюпитательную среду с последующим выращиванием в присутствии антибиотика и отбором му.тантов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения жизнеспособности мутантов,исходную суспензию перед посевом обрабатывают мутагеном, высевают на минимальную соленую среду с глюкозой, инкубируют, затем добавляют пенициллин и инкубируют на качалке, далее пересевают на индикаторную среду с глюкозой, после инкубирования отбирают бесцветные колонии и клонируют на индикаторныхсредах с углеводами, и отбор мутантов проводят по признаку неспособности к ферментациинескольких углеводов,Источники информации, принятые во внймание при экспертизе1, ЖМЭИ, Иф 9, 1967, с. 28 - 32.