Способ определения загрязненности жидких сред грамотрицательными бактериями

ацииРобиолоностных ложение СССР, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ОПИСАНИЕ К АВТОРСКОМУ С(71) Казанский ордена ТрудовоКрасного Знамени государственмедицинский институт им.С.В.К(56) 1. Методические рекомендпо комплексному санитарно-микгическому исследованию поверхвод, М 1976.2. Рационализаторское предВ 23/48 ЦНИИ эпидемиологии М1978, (прототип),(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАГРЯЗНЕННОСТИ МЩКИХ СРЕД ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ БАКТЕРИЯМИ путем добавления бделловибрионов к исследуемой жидкости, о т л и ч а ю щ и й с я . тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, .осуществляют реакцию в капилляре, заполнив его до 2/3 объема3равными количествами исследуемой жидкости и сыворотки, содержащей бделловибрионы, далее образовавшуюся смесь перемешивают и, выдержав при комнатной температуре, определяют загрязнение по появлению осадка.1090Изобретение относится к бактерио"логии, преимущественно к способамопределения бактериальной загрязненности смазочно-охлаждающих жидкостей(СОЖ) и сточных вод, и,может быть 5использовано. для определения степенизагрязненности жидких сред в процессе очистки,Традиционные бактериологическиеметоды определения общего количествабактерий в жидких средах относительно сложны, сравнительно дороги и требуют длительного времени 1 11,Известен способ определения загрязненности жидких сред грамотрицательными бактериями путем добавлениябделловибрионов к исследуемой жидкости 1,21,Однако известный способ сложен висполнении и требует длительного 20времени при подготовке до 32 ч.Целью изобретения является упрощение и ускорение способа.Укаэанная цель достигается тем,что согласно способу определения загрязненности жидких сред грамотрица"тельнымн бактериями путем добавлениябделловибрионов к исследуемой жидкости, осуществляют реакцию в капилляре,заполнив его до 2/3 объема равными З 0количествами исследуемой жидкости исыворотки, содержащей бделловибрионы,фдалее образовавшуюся смесь перемешивают и, выдержав при комнатной температуре, определяют загрязнение попоявлению. осадка.В стеклянную капиллярную трубочкудо 1/3 ее высоты набирают разведенную физиологическим раствором в соотношении 1:1 сухую кроличью или ослиную сыворотку, содержащую бделловибрионы в количестве 66 Х 10 БОЕ/л, азатем - равное количество исследуемой СОЖ, после тщательного перемешивания трубочку устанавливают в верти кальном лоложении и инкубируют прикомнатной температуре в течение4-24 ч, и по образованию осадка визуально определяют присутствие бактерий рода Пседомонас или других грамотрицательных бактерий в количествеот 2 Х 10 до 110 в 1 мл исследуемойсреды. Предварительные исследования установили, что в указанных сыворотках содержатся 660 БОЕ/л. Сухие кроличьи и ослиные сыворотки и сухая кроличья плазма существенно не отличаются по своей активности. Скорость наступления реакции при различных концентрациях грамотрицательных бактерий в исследуемой СОЖ представлена в табл,1. Скорость выпадения осадка зависит от степени загрязнения среды.Определение общего количества бактерий (ОКБ) в 1 мл проводилось вСОЖ различных марок (эмульсии, масла, сунгрин, тосол, электролит, ОСМ) и осуществлялось общепринятым методом. Исследуемые пробы после разведения в стерильной дистиллированной воде от 10 до 10 ффпо 1 мл вносились на 2 стерильные чашки Петри и заливались растопленным, остуженным мясопептонным агаром, Чашки помещали в термостат на 24 ч. Среднее количество выросших колоний считали с помощью камеры Вольфьюгеля. Из табл.1 видно, что всего было проанализировано 105 проб СОЖ, иэ них 32 нативных и 74 разведенных физиологическим раствором от 1 Х 10 ф до 1 ф 10.Результаты параллельного определения СОЖ общепринятым методом и предлагаемым ускоренным способом приведены в табл.2.Минимальное количество ОКБ, которое улавливала сыворотка и давала 10 ОЕ-ную положительную реакцию в капиллярах, равнялось 5 10 -58107 т.е. чувствительность реакции была небольшая, она определяла только загрязненные СОЖ (п.У 4 и 5), При слабом загрязнении (2 10 -2 10 ) реак 6ция была положительной только в 45,43 случаев. Стерильные или чистые СОЖ давали отрицательную реакцию. Различия между группами были статически достоверны (РС 0,05) (табл,2)Предлагаемый способ дает ответ через 4-24 ч в прямой зависимости от загрязненности среды, Причем результат получается тем скорее, чем больше загрязнена среда, что очень важно для срочных анализов СОЖ. Известно, что сильная степень загрязненности может привести к аварийным случаям и трудовым увечьям рабочих, а в области очистных сооружений к загрязнению окружающей среды. В тех случаях, когда имеется недостаток биологической очистки, ее заменяют излишней концентрацией хлора, а это, в свою очередь, ведет к химическому загрязнению водоемов в течение длительного времени. ПредлаТаблица 1 Концентрациябактерий в 1 мл Время наступления реакции 1-5 м . 1 Ом 1-Зч 4-8 ч 18-24 ч Опыт 17 27 27 20 млд 20 мпд 5+ 5+ 10 30+ 4+ 3 1,5 млд 15 илд 6+,:67+ 500 млн 500 мпн 73 147 Сыворотка П р и и е ч а н и е: + - интенсивйость реакции, равная 1 мм. 3 1090 гаемый метод дает возможность быстро (в течение 4 ч) уловить загрязнение, когда процесс очищения сточных вод еще не завершен. Необходимо отметить, что процесс очистки вод в очистных . 5 сооружениях идет около 8 ч. С помощью существующих методов (ОКБ, коли-титр) фактически проверяют уже сброшенную . воду в реку.Таким образом, использование пред О лагаемого способа выявления загрязненности жидких сред грамотрицательными бактериями по сравнению с известным методом имеет следующие преи" мущества: ускорение процесса поста нонки опыта. Если для постановки опыта для ОКБ и коли-титров по известному способу требуется несколько часов, то для постановки реакции по предлагаемому способу достаточно не скольких минут, упрощение и облегчение труда работников лаборатории (не нужно считать количество выросших колоний), своевременное выявление загрязненности СОЖ предохраняет станки от аварий, что дает огромную экономию по стране.Установленный феномен - обнаружение смеси бактерий в СОЖ - может быть использован для рекуперации СОЖ ,путем биологической очистки,Экономический эффект: по предварительным подсчетам стоимость одногоанализа в 100 раз дешевле, чем одинанализ воды,Улучшается состояние здоровья рабочих, контактирующих с СОЖ - быстроеопределение загрязненности и заменаСОЖ предупреждает развитие кожных,аллергических заболеваний,Охрана окружающей среды: быстроеопределение загрязненности вод наэтапах очистки позволяет дозированнохлорировать врду в зависимости отконцентрации бактерий и сбрасыватьобезвреженную и очищенную воду, темсамым, охраняется чистота рек от химического и бактериологического за-.грязнения.1090412 Таблица 2 В цельных СОЖ Число положительныхреакций Время появКонтроль ОКБ Р, различие меж" КолиПример,9чество ана- От Сыво- ротка До Проба ления ду группами осадка, ч ливов абс. Ф,Р. Ф.Р,0 0 О ф О .0 005 О . 0 ЪО 05 3 1 10 В разведенных СОЖ (1 1 -1 10 ) 0 О 0 0Заказ 2977/8 Тираж 688 . ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 110 2 10 5 10 4 10 0 0 2 10 5 454 5810 6 100 27 10 5 100 24 0 0 (О 058 0 04 0 0 сО 05