Способ культивирования микроорганизмов

ОПИСАНИЕпщ 659605К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советсиик Социалистических Республик(51) М. Кл. С 12 В 1/20 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения Рингпфайл Манфред, Клаппах Гюнтер, Вайхерт Дитер,Кернс Герхард, Кретчмар Гюнтер, Иеглих Михаельи Фоллхардт Дитер Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Изобретение относится к области микробиологии и касается способов культивирования микроорганизмов на углеводородах в эмульсии типа вода в масле.Известен способ культивирования микроорганизмов на углеводородах в эмульсии типа вода в масле, включающий добавление вспомогательных .веществ (1Однако при использовании указанного способа выход биомассы недостаточно высок, так как при повышении концентрации клеток в ферментационной среде до определенной критической концентрации происходит необратимый возврат фазы в эмульсию масло в воде.Цель изобретения - повышение выхода биомассы.Эта цель достигается тем, что в способе культивирования микроорганизмов на углеводородах в эмульсии вода в масле, включающем добавление вспомогательных веществ, в качестве этих вспомогательных веществ используют сополимеризаты 1,4-бутиленгликольформаля и диэтиленгликольформаля в соотношении от 80-20 до 20-80 вес.Ъ или их смесь с гомополимеризатом, или алкиламиныс длиной от С 1 о до С 2 . В качествемасляной фазы в эмульсии используютН- парафины с длиной цепи от С 1 доСзо или нефтяной дистиллят с содержанием Н-парафинов от 0,5 до 60 вес.В качестве микроорганизмов используют углеводородутилизирующие бактерии или дрожжи,Сущность способа заключается втом, что добавление вспомогательныхвеществ (стабилизаторов) приводитк образованию стабильной эмульсиивода в масле (обратной Фазы).Эти вещества обладают специфическимдействием по отношению к йоверхностным группам клеток микроорганизмов,они изменяют поверхностноактивныесвойства клеток настолько, что образуется стабильная обратная фаза.Необходимая минимаЛьная концентрацияэтого вещества для поддерживаниястабильной обратной фазы ферментационной среды зависит от доли масла,а также от концентрации клеток. Свозрастанием концентрации клеток нснижением доли масла требуется повышение концентрации стабилизатора.Способ иллюстрируется следующимипримерами.659605 25 Формула изобретения СоставительН.СеливерстоваРедактор И.Грязнова Техред О.Андрейко Корректор О. БилакЗаказ 2120/6 Тираж 525 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035 Москва, ЖРаушская наб, д,45 Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4 П р и м е р 1. В ферментере емкостью 12 л и диаметром 210 мм с приспособлением для перемешинания непрерывно культивируются дрожжи рода СапдЛдсо Иегпопд 11.Перемешивание среды осуществляется мешалкой диаметром 75 мм. Во избежание образования тромбов ферментерармирован, Число оборотов мешалки1500 об/мин, интенсивность аэрации600 л воздуха/час, содержимое ферментера - б кг, значение рН измеряется с помощью высокоомного стек"лянного электрода, а также эталонного электрода.В ферментационную среду непрерывно подается 0,55 кг/час масляной 15фазы и 0,45 кг/час водной фазы в течение б час, масляная Фаза представляет собой дистиллят нефти с содержанием п-алканов (длина цепи от СдоС) фв количестве от 10 и более вес20В качестве вспомогательного вещества(стабилизатора) добавляется первичныйамин с длиной цепи Св. Концентрациястабилизатора - 0,35 г/л масляной фазы.Водный питательный раствор имеетследующий состав (г/л):КН РО 4 7,35МД 8 04 7 НО 1, 84Н РО 4(85-ная) 1,4Все",0,0062 л 5047 НО 0,08Сп 604 5 Н О О, 008Значение рН - 4,5, температура32 С, РН устанавливают с помощью15-ного водного раствора аммиака.При названных условиях содержание дрожжей и обратной фазе - 38 гсухого вещества на 1 кг ферментационной среды.П р и м е р 2. Применяют тот же 40самый ферментер и ту же самую ферментационную технику как и в примере 1. Число оборотов мешалки1800 об/мин. Выращивается чистаякультура бактерий В, изолированная 45иэ шлама очистной установки Розентальф, очищающей коммунальнуюсточную воду города Лейпцига. Культуру выращивают при 37 С, при значении рН от 6,9 до 7 и аэрации - 180 л цвоздуха на 1 кг .содержимого ферментера за;час. Полезная емкость ферментера составляет 3,6 кг,В ферментер постоянно добавляютмасляную фазу, которая, составляет48 веса среды и является фракциейнефти с не менее 15 вес, п-алканов с длиной цепи от Со до Сэо. 1 акже постоянно добавляют водную фазу питательного раствора, которая составляет 52 нес., и имеет следующий состан (г/л)Н РО 5,4КОН 65ЙаОН 0,0075Мфб 04 7 НО 2,4ГеЫ 47 Н О 0,09МП 504 5 Н 20 0,06Си 504 5 НО 0,110Г пСЕ.О 03 Оп -октадециламин 1,0После 3,6 час в стоке ферментера находится клеточного вещества в пересчете на сухой нес - 33 г.Предложенный способ позволяет значительно интенсифицировать процесс культивирования микроорганизмов в эмульсии вода в масле на основе углеводородов и значительно повысить выход биомассы - до 25 г сухого вещества микроорганизмов эа час на 1 кг ферментационной среды. 1. Способ культивирования микроорганизмов на углеводородах в эмульсии типа вода н масле, включающий добавление вспомогательных веществ, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что с целью повышения выхода биомассы, в качестве вспомогательных веществ используют сополимеризаты 1,4-бутиленгликольформаля и диэтиленгликольформаля в соотношении от 80-20 до 20-80 вес. или их смесь с гомополимеризатом, или алкиламины с длиной цепи от С до С 22.2. Способ по п.1, о т л и ч аоющ и й с я тем, что в качестве масляной фазы н эмульсии используют Н-парафины с длиной цепи от С 1 до С3, Способ по п,1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что н качестве масляной фазы в эмульсии используют нефтяной дистиллят с содержанием Н-парафинов от 0,5 до 60 вес.4, Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестне микроорганизмов используют углеводородутилизирующие бактерии или дрожжи. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Патент СИа Р 3813290,кл. 195-28, 1974