Способ получения иммуносорбента

ОП ИИЗОБРГТ овз Советск Социаяистицески Республикприсоединением зая Го етвениыи комитетсссрам изобретенийоткрытий Приоритет(72) Авторы изобретения рдена Трудовогоим.И.В.Ломоносотитут люминофорств асного Знамении Всесоюзныйи особо чйстых Ленина и иверсите ельский и веМосковский ордена государственный у научно-исследоват) Эаявител ММУНОСОРБЕНТА 4) СПОСОБ ПОЛУ 1Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для выделения антител, применяемых в качестве лечебных препаратов и аналитических реагентов в медицинской диагностке, эпидемиологии и микробиологии.Известен способ получения иммуносорбента путем обработки неорганического производного кремния -аминопропилтриэтоксисиланом с последующим проведением химической модификации полученного комплекса и ковалентным связыванием его с белком 1. Однако известный способ является трудоемким и не обеспечивает большой емкости сорбента.Для упрощения способа и увеличения емкости сорбента в качестве неорганического производного кремния используют силохром, химическую модификацию проводят глутаровым альдегидом, а ковалентное связывание белка ведут в присутствии тритона Х,При осуществлении способа в ка- . честве неорганического проиэводио" го кремния испопьэуют силохрои.Силохром обрабатывают Т-аминопропилтриэтоксисиланом и затем раствором глутарового альдегида, лучше в концентрации 2,5-1. Иодифицированный таким образом носитель вводят в реакцию с раствором.антигена или антитела в присутствии тритона. На 1 г носителя лучше испольэовать 25-100 мг белка с концентрацией 2,5-10 мг/мл в буфере с рН 5-7, содержащем 0,025-0,1 тритона Х.Емкость полученного иммуносорбен та составляет 20-30 мг антител на 1 г носителя, что в 3-5 раз превышает емкость известных носителей на основе соединений кремния.П р и и е р 1; Выделение антител к Зтб человека из кроличьей антисыворотки, 1 г силохрома кипятят в 5 мп 2-ного раствора Ю-аиинопропилтриэтоксисилана в толуоле 10 ч. К пробритому толуолом, высушенному при 120 С силохрому добавля ют 10 мл 1-ного глутарового альдегкда в воде и помещают на 3 ч в лед ную баню. Затем образец отьнвают холодной водой от избытка глутарового альдегида и инкубнруют с 4 мл раСтворадтб человека, содержащем 20 мг/мл белка, в течение 3 ч в О, 1 М фосфатном буфере с рН 7,0 с.Малютинаова Корректор С.ШекПодписноеного комитета Сссрний и открытийсная наб . д .45 итель СЛ Леер671арственэобрете35 Райш Тираж ЦНИИПИ Госу по делам 5 Москва Ж113 ффПатент лиал П жгоро ул,проектная 3 6518 6,025 тритона. Несвязавшийся белок отмывают этим же буфером, добавляют сыворотку кролика против Д б человека, инкубируют 3 ч и опять ОТйавают иесвязавшийся белок. Элюцяю антител проводят в колонке раствором 3 И ИаСИ 5 (20 мя З.И ИсСИЬ 5 П р и м е р 2. Выделение дамбкролика. К 1 г обработанного -амииопропилтриэтоксисиланом и глутарсвым альдегидом силохрому добавляют10 мл раствора 1-глббулиновой фракции ослиной антисыворотки противфб кролика с концентрацией 10 мг/мпв 0,01 И Фосфатном буфере с рН 7,0,содержащем 0,1 И ИаСО и 0;1 В трито.на Х, инкубируют 3 ч и отьываютот иесвяэавшегося белка тем же саМйм буфером. ЗатЕм к пробе добавляют 1 мп нормальной кроличьей сыворотки и инкубируют 3 ч. После отмыв-,ки несвяэавшегося белка проводятэлюцйю 3 И,паСИВ в колонке 0,25 хх 4 см,Выход белка с колонки составил10 мг, содержание иммуноглобулина4, определенное методом Ианчини,6 мг. По сравнению с исходным препаратом проведена очистка в б раз.Полученный иммуносорбент можетбыть эФФективно использован для поМучений чистых препаратов антигенов 45и антител методом колоночной хрома-,тографии, а также в аналитическихцелях для определения количественного содержания антител в различных биологических жидкостях. Примененйо иммуносорбентов, использующих в качестве неорганических носи, телей силохроьы, дает возможностьсделать процесс получения антителзначительно проще и дешевле, поскольку не требуется специальное дорогостоаяее оборудование.йммуносор 14 4на колонку 0,25 х 4 см, содержащую1 г силохрома) . Определение содержания антител проводят по методуГурвича используя иммуносорбент наоснове агарового геля), общее содержание белка определяют спектробенты на основе силохрома без значительной потери емкости могут бытьиспользованы многократно (до 5-8раз) . Использование отечественногосырья позволвет значительно повысить технико-экономическую эффективность производства антител в промышленных масштабах, Выделенныеантитела могут быть использованыв здравоохранении для диагностикии лечения ряда заболеваний, медйцинской и фармацевтической промышленности, для специфической очисткимногих дорогостоящих белковых препаратов. Формула изобретенияСпособ получения нммуносорбентапутем обработки неорганическогопроизводного кремния 3-аминопропилтриэтокснсиланом с последующим проведением химической модификацииполученного комплекса и ковалентным связыванием его с белком,,с целью упрощения способа ии увеличения емкости сорбента в качестве неорганического производногокремния используют силохром, химическую модификацию проводят глутаровым альдегидом, а ковалентное связывание белка ведут в присутствиитритона Х.Источники информации, принятыево внимание при экспертизе1. Патент США М 3652761,кл, 424-12, 1976.