Способ получения протеаз

)М, Кл. С 12 О 13/10 Гооударотеенный комитеСоеета Миниотроа СССРео делам изооретеиийи открытий Бюллетень 1 описания 04,04.78(72) Авторы изобретени Н, С. Егоров, М. А. Аль - Нури, Н. С, Ланда И, Буяк Ленина и Ордена Трудового Красного Знамениый Университет нм. М. В, Ломоносова осковский Госуда1) Заявитель 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕА 43) Опубликовано 05.05.7 45) Дата опубликования Изобретение относится к производству ферментных препаратов и может быть применено в медицине и микробиологической промышленности,Известен способ получения протеолитическогофермента, обладакацего казеинолитическим и фибри. иполитическим действием, предусматривающий сов.местное культивирование на питательной среде микроорганизмов Аст 1 поптусеа двух видов гипоаца иАстпоптусеа ч 1 о 1 асеца активного и неактивного вотношении образования протеаз с последующим вы. 1 Оделением их иэ культуральной жидкости.Недостатком способа является то, что выходцелевого продукта недостаточно высок,Целью изобретения является повышение вы.хода протеаз, обладающих казеинолитическим, фибринолитическим и тромболитическим действием.Поставленная цель достигается тем, что в ка.честве активного в отношении образования протеазмикроорганизма используют культуру плесневыхгрибов Аарегд 1 Ьа Кападаааепза, а в качестве не. 3)активного - культуру плесневых грибов Аарегд 1 цааепт 11, при этом микроорганизмы вносят в питательную среду в равных количествах, а выращивание их проводят при 28 - 30 С в течение 48-72час, 25 Способ поясняется конкретным примеествления,П р и м е р. В извест;тую синтетическую среду (глюкоза - , 0,36%, сахароза - 0,72%, КМОо - 0,2%, Мд 804 - 0,123%, Ко НРО - 1,37%)после стерили. зации вносят 5% по обьему двухсуточного жидкого посевного материала Аарегд 1 Ьа кападаеааепаа, вы. ращенного на жидком 4 бал, сусле, и 5% по объе му двух. трехсуточного жидкого вегетаттевного ма. териала Аарегд 11 Ьа чептц, выращенного на извест ной синтетической среде, Культивирование смешан. ной культуры осуществляют глубинным способом в колбах на 750 мл со 100 мл среды на качалках при 28 С в течение 56 часов. По истечении этого времени культуральна я житпс ость содержит 1160 усл. ед/мл фибринолитической активности и растворяет тромб за 3 часа, Каэеинолитическая ак . тивность культурапьной жидкости равна 9,8 каз. ед/мл. Для выделения фермента клетки отделяют от культуральной жидкости центрифутированием и прово. дят высаливание фермента сернокислым аммонием при насыщении 0,7 в течение 32 часов при 4 С. Выпавший осадок растворяют в воде, диализуют в течение 24 часов при 4 С против 0,01 М трис-буфера рН 7,4 с 0,005 М СаСе или СоС 1 о, после чего3проводят лиоффильное высущнвание и получаютпрепарат, обладакнций специфической активностью1 20 ед/мт белка.Полученные результаты свидетельствуют отом, что в смешанной культуре грибов происхо.днт образование протеаз с каэеннолитическим дей.ствием в 3 раза больше, а с фибринолитическимн тромболитическим действием в 2-2,5 раза боль.ше, чем в чистой культуре АврегцНЬв 1 сапа 9 аеааепве. Увеличение ферментативной активности сопро 10вождается столь же интенсивным в 2 - 2,5 раза возрастанием продуцирующей способности клеток,Способ получения протеаэ путем совместноговыращивания на питательной среде двух видов миРедактор О, Иванова Заказ 2339/17 Тираж 568 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретениЯ и открытий 113035, Москве, Ж, Раушскаа набд, 45Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная,4 Формула изобретения 6058264кроорганизмов - активного и неактивного в отно.шенин образования протеаз и их последующего выделения из культуральной жидкости, о т л и ч а нщ и й с я тем, что, с целью повышения выходацелевого продукта, в качестве активного в отношении образования протеаз микроорганизма используют культуру плесневых грибов Аврегу 1 Ьв Ьюа 9 ве.ваепв 1 в, а в качестве неактивного - культуру плес.невых грибов АврегцИЬв вептй, при этом микро.организмы вносят в питательную среду в равныхколичествах,2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что выращивание микроорганизмов проводятпри 28-30 С в течение 48-72 асов,Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе:1. Авторское свидетельство СССР гг 436086,кл, С 12 О 13/10, 1974. Составитель И, ПриваловаТехред Н,бабурка Корректор А.власенко