Способ определения специфических антител

Союз Соеетскнх Соцналнстнческнх Республнк(45) Дата опубликован 1) М. б 01 М ЭЗ/16РС 07 07/00 яГвсудврственнмй квмнтет Сюевтв Инннетров СССР вв делам нзобрвтеннй и вткрытнй1.78, Бюллетень1 я описания 11,01.78 2) Авторы нзобрете тман и С. Л. Ягу иенский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиология и паразитологии(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ 0 рую 0,1 изобретение относится к нммунологии и может быть использовано для изучении иммунитета при бактериальныл и вирусных инфекциях, а также при вакцинации.Известен способ определения специфичео кил антител, относящихся к различным клас сам иммуноглобулинов, путем сорбции из образца иммуноглобулннов исследуемого класса с помощью иммуносорбента, приготовленного на базе антисыворотки к это-му классу с последумвтям элюярованием этих яммуньглобулннов и оцределением специфическил антител обшепринятымифеетодамн 1 .Однако такой способ трудоемкий и требует большого числа операций.С целью упрощения способа вз исследуемой жидкости удаляют сопутствующие имму ноглобулины с помощью вммуносорбента и определяют целевой продукт непосредственно в жидкости. 20Пример. Определяют антитела противантигенов из %,0 ппвтжыосяшнлся к, 3 А, в сквороткал больныл дизентерией Зонне. Для этого из сывороток адсстрбяруют все иммуноглобулиныклассов 3 и 2 ц М.Адс,орбциюяммуй 0 ноглобулинов классов 30 и 53 нв проводят поскольку содержание этих иммуноглобулинов в сыворотке в 10-1000 раз меньщв, чем 3 А, а также потому, что антитела класса Эо: не определяются в реакции гамагглютинации, применяющейся в этом исследовании для определения специфическил антител. Таким образом, иммуноглобулины ЪО и ЗЕ не могут сколько-нибудь значительно повлиять на,оезультатыпр пения.Для адсорбции 3я" Э М нз сывороток предварительно готовят иммуносорбент. С этой целью смешивают равные количества неразведенныл моноспецифическил сывороток против3 М (титр 1:10) и против 3 (титр 1:15,), К смеси сывороток при постояте ком домешивании по каплям добавляют 5%-ный раствор глютарового альдегнда (яз расчета 3 объеме этого раствора на 10 объемов сыворотки ) и оставляют на Э час при комнатной температуре. Через 3 час образующийся гель тщательно гомогенизнт в гомогеннзаторе н трижды отмывают5 М раствором ллорнстого натрия, за587398 Составитель В. ДроздовТехред Н. Бабурка Корректор А. Впасенко,т 77/По писное Редактор Л. Волкова Заказ 126/34 дЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул, Проектная, 4 буференным 0,01 М фосфатным буфером, рН 72Затем в каждый из исследуемых сывороток добавляют тцательно суспендированный с помощью гомогенизатора иммуносорбент, предварительно осажденный центри- фугированием. На 1,5 мл сыворотки берут иммуносорбент, приготовленный из 1 мл смеси моноспецифическил сывороток против ;1 Чи3 М, взятых в соотношении 1;1,фо Оставляют в термостате при 37 С на 1 часо а затем на ночь в холодильнике.Наутро иммуносорбент бсаждают центрифигурованием и проводят еше две подобных адсорбции, 11 ри второй 1 и третьей адсоцбциях на 1,5 мл сыворотки каждый раз берут иммуносорбент15 в количестве,соответствующем 0,5 мл смеси моноспецифических сывороток. После трех адсорбций в исследуемых сыворотках отсутствуют иммуноглобулины 3 фи ЭМ,20 о чем свидетельствует реакция иммунодиффузии в агаре по методуМот 1 стК . Затем, в подвергнутых адсорбции исследуемых сыворотках определяют с помощью реакции пас сивной гемагглютинации антитела (класса 3( А) против ЬЬ 30 тюа 1, . В качестве анти- гена используют липополисахарид из.5 Ь.Ьотпм 1,Предлагаемый способ определения содержания специфических антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов,рбеспечивает исключение отмывки комплекса иммуносорбент иммуноглобулин от неснецифически сорбировавшихся белков, эпюации иммуноглобулйна и его последующее освобождение от элюента, соответственно исключаются потери при всех операциях, и концентрация определяемого иммуноглобулина в образце, подвергнутом адсорбпиям, практически равна его концентрации в исходном материале. Это обусловливает более высокую чувствительность метода по сравнениюгс сушествуюшим, все это приводит к уменьшению трудоемкости способа и дает воз,можность проводить определение сразу в большом количестве проб,Формула изобретения Способ определения специфических антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов, путемсорбции, о т л и ч а ю ш и й- с я тем, что, с целью упрошения способа, из исследуемой жидкости удаляют сопутствующие иммуноглобулины с помощью иммуносорбента и определяют целевой продукт непосредствеийо в жидкости.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1 ЖМЭИ . 1 1951, с. 125-126.