Способ получения альфа-фетопротеина

ОЛ ИСАНИ Е ИЗОБРЕТЕНИЯ И АВТОРСКОМУ СВИДБИЛЬСТВУ Союз СьветсхинСоцйюлмстичюсхихРеспублик(23) Приоритетов Государственный нонгет СССР ао делам нзобретен и открытий(088.8) Дата опублик анин описания 05 10.79(72) Автор изобретения А. А. 2-й московскийордена Ленина государственныймедицинскийинститут им. Н, И. Пирогова.71) Заявитель ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬФА.ФЕТОПРОТЕИНА ую фазу подве го раствора х фосфатным б зновення запахаеИзобретение относится к биологической химии и может быть использовано в медицине для выделения раковоэмбрионального белка альфафетопротеина, применяемого для приготовления различиых иммунодиагностикумов.Известен способ получения альфа-фетопротеина путем аффинной хроматографии исходного сырья на иммобилизованных экстрогенах с по. следующим отмыванлем буферным раствором и злюированием целевого продукта 11.Однако такой сгособ не обеспечивает высокой степени чистоты препарата,С целью повышения степени чистоты препарата по предлагаемому способу исходное сырье предварительно обрабатывают бутиловым спиртом и подвергают длализу против буферного раствора, а элюирование осуществлятот бутиловым спиртом или смесью бутилового спирта с буферным растором. При этом отмывание проводят последовательно нейтральчым и кислым буферным раствором.Способ осушествлшот следующим образом.П р и м е р. 200 мл остатков абортивного материла, полученного после отфильтровывания крови, и состоящего из обрывков тканей плода и остатков плодного яйца заливают 100 мл бу.тилового спирта тщательно перемешивают и осотавляют на ночь в холодильнике при 4 С. Затем центрифугируют при 6000 об/мин 30 мин. В про.5 бирке образуются четыре фазы: верхняя - бути -лозый спирт, плотная фаза, содержащая денатурированный гемоглобин и ряд других денатури.рованных белков, затем жидкая фаза, содержащая альфа-фетопротенн, отделенный от эстроген ных гормонов, которые зкстрагировались бугиловым спиртом и ушли в верипою фазу (в этой фазе помимо альфа-фетопротеина содержатся многие другие белки) и нижняч фаза, содержащая остатки тканей плода и плодного яйца.5 Водно-белковая фаза по белковому составу ма.;ло отличается от сыворотки крови новорожденных и количество альфа-фетопротеина в ней около 10 мг сти менее 0,2% относительно других белков. После этого водно-белков ют диализу против 0,9% води ристого натрия, забуферениог ром (рН б,8) до полного исч533536 Формула изобретения Составитель С. МалютинаТехред Н. Баоу-сха Корректор И, Михеева Редактор Е. Месропова Заказ 6019/60 Тираж 672 Подписное1 П,1 Р 1 ПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и отхрьпцй113035, Москва, К, Раушсхая цаб., д. 4/5%пиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 бутилового спирта. Затем ца колонке, содержа. шей 100 мл диэтилстильбестрола, ховалецтцо связанного с сефарозой 4 В, проводят аффц гцую хроматографию путем пропускацця со скоростью 50 мл/ч отдиализоваццой водно-белковой фазы. Далее проводят отмывание колонки от цесвя. эавшихся белков 100 мл 0,9%-ного забуферец. ного раствора хлористого натрия. после чего дополнительно отмывают колонку 100 мл кнс. лого глициц-НС 7 буфера (рН 2,0). и после допол о нительного отмывания забуференным физиологическим раствором, чтобы нейтрализовать содержимое колонки (количество 100 мл), проводят элюирование альфа-фетопротеина, поопуская через колонку 50 мл смеси бутилового спирта с 15 забуферецным физиологическим раствором хлористого натрия 11:10). Затем вновь отмывают колонку.Полученный препарат альфа-фетопротеина проверяют ца чистоту иммуцохимически и в 20 элехтрсфорезе в полиахриламщном геле и обнаруживают незначительную примесь альбумина и гемоглобина, Чистота полученного препарата выше 95%, что свидетельствует о высокой эф.фехпп ности спосооа. 25Предлагаемый способ позволяет использовать, для выделения альфа.фетопротеина практически любые биологические жидкости и ткани, содержащие альфа-фетопротеиц, Способ прост, и надежен в употреблении, дает высокие результаты ЗО и может быть использован для получения про 4мышлеццых количеств альфа фетопротенна, белка, который цахбдлт все бслыиее применение в мсцннцце для изготовления различных имму. цодцагцостикумов, необходимых для расцозна. вацця раццлх стадий первичного рака печени, угрожаюшего выкидыша плода при беоеменности, а также вцутриутробцых патологий развития плода: михроцефалия, анэццефалия, спинно.мозговая грьа, спина бифидум и различные фето. плацецтар;:ые патологии. 1. Способ получения альфа.фетопротеина путем аффинной хроматографии исходного сырья на иммобилизованных экстрогенах с последуюцим отмыванием буферным раствором и злюироваццем целевого продукта, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения степени чистоты препарата, исходное сырье предварительно обрабатывают бутиловым спиртом и подвергают диализу против буферного раствора, а элюирование осуществляютбутиловым спиртом или смесью бутилового спирта с буферным раствором.2, Способ по и. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что отмывание проводят последовательно нейтральным и кислым буферным раствором.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе .1. РЕВЯ 1.еттеп, 53,3, 1975, с. 305 - 308.