Способ выделения гемнонапептидафрагмента 14-22 цитохрома с

Номер патента: 578305

Авторы: Васильевна, Евстигнеева, Миронов

ZIP архив

Текст

") 578305 ОЛИСАНИЕ Й ЗОБРЕТЕ Й ИЯ Союз Советскии Социалистмческих Республик(22) Заявлено 24.06,76 (21) 2381878(23-04с присоедипенцем заявки Ле -(45) Дата опубликования оппсанпя 04.01,78, Государственныи комите Совета Министров СССР. по делам изобретений и открытий(088.8) 3) У Авторыизобретения Р, П, Евстигнеева, А. ф, Миронов и Г. А, Васильева Московский ордена Трудового Красного Знамени институт тонкой химической технологии им, М. В. Ломоносо(71 тель 4) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЕМНОНА ФРАГМЕНТА 14 - 22 ЦИТОХРОМА ПТИ оре Л 1 Н 4 НСОз прц весорипсина ц цитохрома С льным условием проведеся осуществление ферпления при температуре водном 0,1 н. раств вом соотношении т 1: 100. Предпочтите ния процесса являет 5 ментативного расще37 С. нному сп фрагмен аше ше репарат хромато Изобретение относится к улучшеособу выделения гемнонапептидата14 - 22 цитохрома С, соединения, н д гоприменение в клинической практике,Известные способы выделения гемнонапептида-фрагмента 14 - 22 цитохрома С изсердца лошади заключаются в ферментативном расщеплении цитохрома С трцпсцном 11,Реакцию проводят при рН 8,4 (0,1 и, водномрастворе Л 1 аОН) при 30 С в течение 40 ч прнсоотношении трипсина и цитохрома С 1:10.После очистки с помощью ионообменной хроматографии на 1 КС =50 в Н. -форме ц наколонках с сефадексом й - 25 выход гемнонапептида составляет 45% .Однако известный способ требует непрерывного контроля рН (рН - оптимум фермента поддерживается с помощью автотцтратора) и продолжителен по времени.Цель изобретения - усовершенстгованцсизвестного способа выделения гемнонапептцда ферментатцвцым расщеплением ццтохромаС из сердца лошади трипсином, увеличениеего выхода ц сокращение времени процесса.Это достигается описываемым способомвыделения гемнонапептида-фрагмента 14 -22 цитохрома С при ферментативном расщеплении трипоином цитохрома С из сердца лошади, заключающимся в том, что ферментативное расщепление цитохрома С проводят в В результате предлагаемого спосооа время ферментативного расщепления сокращается с 40 до 2 ч, выход увеличивается до 10 91%, применение водного раствора бикарбоната аммония позволяет поддерживать необходимую величину рН (8,45) на протяжении процесса расщепления без помощи автотитр атор а.15 П р и м е р. Гемнонапептцд-фрагмент 14 -22 цитохрома С цз сердца лошади.1 г цитохрома С растворяют в 50 мл0,1 н. раствора Л 1 ННСОз, рН 8,45, добавляют 10 мг трцпсцна, термостатцруют прц 3.С. Че рез 2 ч раствор наносят на колонку с цонообменной смолой КРКв Н+ -форме (5 ХЗсм).Промывают 600 мл 0,25 М пцридцн-ацетатного буфера с рН 5,6, дистиллированной водой.Элюируют гемпептцд 1 н, пцрцдином, Элюат 25 (30 мл) наносят на колонку (4,5 Х 11 см) ссефадексом 6-25 (зцрег 1 пе),Очистку на сефадексе 6-25 проводятдважды. Лиофилизуют.Выход лиофцльно высушенного п а з 0 120 мг (917 о), К 0,7 (бумажная578305 Формула изобретения Составитель В. Волкова Текрсд И, Карандашова Редактор А. Соловьева Коррект:)р О. Тюринй Заказ 8339 Изд Лго 872 Тираж 563 Подписное НПО Государготвенного кочтета Совета Минстрсв СССР по делам изобретений и открыт)ш 113035, Москва, Я(-35, Раушская наб., д. 4/5МОТ, Загорский филиал 3р 111)п 51 В спстсм. н-оутспп),1уссусп 1 я кислота - вода, 4:1:5) .Электрофорез в полиакриламидпом голе 12,5% -пой концентрации, трисфосратный буфер, рН 6,9, в присутствии 1% 5 РЬ.Аминокислотный Соста гидролнзата нонапептида подтвержден данными ами окислотного анализа,1. Способ выделения гемнопапептпда-фрагмента 14 - 22 цитохрома С прп ферметати- ном расщеплении трипсипом цптохрома С пз се)дца лопадп Грп пагрсванпи Б БодпОм 1 цслоч ом растворе, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и упрощения процесса, последний проводят в 0,1 н. вод ом растворе ХН 4 НСОз при весовом соотногпении тр 11 псинл и цитохрома С 1: 100,2. Способ по п. 1, отличающийся тем,что процесс проводят при 37 С. Источники информации,принятые во внимание прп экспертизе 1. Васильева Г. Л. и др, Синтез гемнонапептпда-фрагмента цитохрома С млекопитающих, - )Курнал общей химии, 1973, 43, 1849.

Смотреть

Заявка

2381878, 24.06.1976

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ ТОНКОЙ ХИМИЧЕСКОЙ ТЕХНОЛОГИИ ИМ. М. В. ЛОМОНОСОВА

ЕВСТИГНЕЕВА РИМА ПОРФИРЬЕВНА, МИРОНОВ АНДРЕЙ ФЕДОРОВИЧ, ВАСИЛЬЕВНА ГАЛИНА АЛЕКСЕЕВНА

МПК / Метки

МПК: C07K 7/06, C12P 21/06

Метки: 14-22, выделения, гемнонапептидафрагмента, цитохрома

Опубликовано: 30.10.1977

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-578305-sposob-vydeleniya-gemnonapeptidafragmenta-14-22-citokhroma-s.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ выделения гемнонапептидафрагмента 14-22 цитохрома с</a>

Похожие патенты