Способ определения липидного состава биологических жидкостей

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН Ия К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(23) ПриоритетОпубликовано 30.08.76. Бюллетень МеДата опубликования описания 14.09.7 Совета Министров СССРпо лолам изобретений 12,015.32 088.8)) Заявител 2-ой московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н, И. ПироговаСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИПИДНОГО СОСТАВ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ(5 образом.пиллярной робирке с Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в клинической биохимии для изучения жирового обмена.Известен способ количественного определения липидного состава сыворотки крови, использующий экстракцию липидов (отношение объемов экстрагирующей смеси и сыворотки 20: 1), разделение метадом хроматографии в тонком слое, элюирование липидов из хроматографических пятен и спектрофотометрическое определение их количества.Недостатками известного способа являются потребление значительного количества анализируемого субстрата, рыхлость и сыпучесть тонкого слоя, что ведет к затрате лишнего времени на один анализ.С целью уменьшения количества анализируемого субстрата, ускорения анализа, увеличения прочности и улучшения качества тонкого слоя по предлагаемому способу липиды экстрагируют хлороформ-метаноловой смесью из цельной крови в соотношении 50: 1, а количественный денситометрический анализ проводят непосредственно на хроматограммах. С целью увеличения прочности и улучшения качества тонкого слоя к сорбционной смеси добавляют 2/о -ный раствор крахмала.Способ осуществляют следующимДля анализа берут 0,2 мл какрови из пальца и смешивают в п 0,2 мл воды. К гемолизату приливают 10 мл экстрагирующей смеси, пробирку на 10 мин помещают в водяную баню при температуре 40 - 45 С. Затем смесь фильтруют через бумажный обезжиренный фильтр в чистую пробирку, добавляют 2 мл 0,74% -ного раствора хлористого калия, сильно встряхивают и оставляют до следующего дня при комнатной температуре. Образуются два слоя - верхний водный и нижний - хлороформный, Верхний слой удаляют, а нижний переносят в пробирку, смешивают с 0,5 мл метанола и выпаривают досуха в водяной бане при 40 - 45 С под вакуумом с водоструйным насосом.Полученный липидный экстракт наносят на пластину в тот же день. При длительном хранении сухого экстракта теряются некоторые фракции липидов, особенно свободные жировые кислоты.В стаканчике Хагидорна смешивают 4 г силикагеля Н по Шталю, 600 мг гипса, 13 мл воды и 2 мл закрепителя, например 2%-ного раствора крахмала. Смесь наносят равным слоем на стеклянную пластину 13 К 18 мм, которую помещают на ровную поверхность и оставляют при комнатной температуре до следующего дня. Затем ее активируют 30 мин в сушильном шкафу при температуре 90 - 95 С. После охлаждения на воздухе пластина готова к работе.526824 Формула изобретения Составитель С. Малютина Редактор Н. Хубларова Техред В. Рыбакова Корректор И. ПозняковскаяЗаказ 20198 Изд. Мв 1577 Тираж 1029 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 45Типография, пр. Сапунова, 2 За 1 - 2 час до начала хроматографии в банки наливают систему растворителей для разде. ления липидов в одной и фосфолипидов в другой банке. Систему растворителей наливают в банки в таком количестве, чтобы пластины погрузились на 0,5 см. Исследуемый экстракт крови растворяют в 0,2 мл гексана и по 0,05 мл (соответствует 0,05 мл исследуемой крови) наносят на пластины, отступая 1,5 - 2,0 см от нижнего и бокового краев пластины. Интервал между пробами 2 см. Из одной и той же пробы экстракт наносят на 2 пластины - для разделения липидов на одной и фосфолипидов на другой. После нанесения проб пластины помещают в банки с системой растворителей. Высота подъема растворителей по адсорбенту 10 см, Время хроматографии липидов 20 - 25 мин, фосфолипидов 40 - 45 мин.По окончании хроматографии пластины подсушивают при комнатной температуре под вытяжкой до полного испарения с адсорбента растворителя и опрыскивают 2-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты по 5 мл красителя на одну пластину. Затем пластины помещают в сушильный шкаф на 10 мин при 90 - 99 С для проявления окраски, После охлаждения пластин проводят количественное определение жира в хроматографических пятнах денстометром путем измерения оптической плотности пятна и фона вокруг него. Затем из плотности фона вычитают онтическу 1 о плотность пятна, полученную разность умно жают на коэффициент пересчета и узнают количество жира в липидном спектре исследуемой крови. Коэффициент пересчета выводят по данным калибровки стандартного раствора холестерина.10 1. Способ определения липидного составабиологических жидкостей путем экстракции 15 липидов и хлороформметаноловой смесью иразделения экстракта на сорбционной смеси хроматографически в закрепленном тонком слое, отличающийся тем, что, с целью уменьшения количества анализируемого суб страта и ускорения анализа, липиды экстрагируют хлороформ мета ноловой смесью из цельной крови в соотношении 50: 1, а количественный денситометрический анализ проводят непосредственно на хроматограммах, 25 2. Способ по п. 1, отличающийся тем,что, с целью увеличения прочности и улучшения качества тонкого слоя, к сорбционной смеси добавляют 27 о-ный раствор крахмала,