Способ получения рибонуклеозид-5монофосфатов

Ътл,;:балт, 1:т .о.,ОПИСАНИЕ 4 тттт 50478 Йотоз Советских Социалистических Республик(22) Заявл 51) Ц 1; 19 0 присоединением заявкиГосударств Совета Мин нын комите втрое СССР 3) Приоритет 3) УДК 547.963.6.0(088,8) Опубликовано 28.02,76. БюллетеньДата опубликования описаттття 12.05. о делам изобретен и открытий2 Описываемыи способ получен озид-монофосфатов заключае рибонуклеозиды обрабатываю кислотой в полярных растворите диоксане, пиридттне или диме после чего получештые арцлборц вергают фосфорилировапцю, уд ия риоопуклется в том, что т арцлоорцой лях, цапрцмер тцлформамцде, ые эфттры цодалсцию защцтИзобретение относится к усовершенствованному способу получения соединений, которые находят применение в биохимии.Известен способ получения рибонуклеозид-монофосфатов фосфорцлированием соответствующих рибонуклеозидов с предварительной защитой 2, 3-цисдиольных гидроксильных групп рибонуклеозидов, не участвующих в образовании фосфодиэфирных связей, Чаще всего для этих целей используют 2, 3-0-алкилиденнуклеозиды,Однако известный способ обладает рядом существенных недостатков, основным из которых является трудность удаления защитной группировки, проводимой в жестких условиях, приводящих к получению побочных веществ. Вследствие этого требуется дополнительная очистка целевого продукта.Предлагаемый способ позволяет упростить технологию получения целевого продукта за счет использования в качестве проитежуточттьтх соединений арилборных эфиров цуклеозидов. цой группы водой и выделению целевого продукта известным методом,Как правило, в качестве фосфорилирующихагентов используют Р-дифенил-Р-морфоли допцрофосфохлорид в диоксане цли Р-циаттэтилфосфат или 2-цианэтилфосфат в пцрцдицс.П р и м е р 1, К раствору 5,5 г безводной дцфенилфосфорной кислоты в 40 мл диоксана прибавляют при размешивании 4,5 г морфо лидофосфодихлорида и 3,2 мл 2,6-лутидица.Спустя 15 мин добавляют фештлборцый эфир аденозина в 12 мл диоксана (получен нагреват ием смеси 6,2 г аденозица и 3,06 г феццлборпой кислоты в дцоксане; может быть 15 выделен в аналитически чистом виде с выходом 95 отто последующей упаркой диоксаца и добавлением 10-кратного количества серного эфира) и смесь оставляют при перемешиваццц при 18 - 20 С на 48 час. В этих условиях ре акция сопровождается количественным и избирательным фосфорилироваццем первичной гидроксцльной группы нуклеозцдов (хроматографическпй контроль пробы после предварительного гидролцза в системе: этанол - 0,5 М 2 д ацетат аммония, насыщенный бурой = 5:2).Затем добавляют 300 мл воды (р 11 раствора 1,6 - 2,0) ц размешивают 4 час при 30 - 40 С до полного гидролиза Р - И ц Р - С 1-связей образующегося при фосфорнлированпи адецо- З.т зинфосфоморфолидхлорпда, (Анализ т. с.504784 Составитель В. ЖестковТекред 3, Тараиепко корректор М. Лейзермаи Редактор Е, Шепелева Заказ 916/14 Изд. Мо 1149 Т Годписиое ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раушская аб., д. 4)5Типография, пр. Сапунова, 2 хроматографией в системе: цетон - г-бутанол - НО = 8: 1: 1). Полученный раствор нейтрализуют 3%-ным раствором аммиака до рН 6,0 и помещают при 5 - 8 С на охлаждаемую колонку со смолой КУ(Н+) (6,0 К Х 5,30). Колонку промывают водой от примесей фосфорной, дифенилфосфорной и феннлборной кислот. Аденозин-монофосфат элюируют в виде аммонийной соли 1 о/о-ным раствором аммиака, Выход 75% (спектрофотометрическое измерение). Раствор аммонийной соли упаривают до концентрации нуклеотидного материала 15 - 20% и подкисляют 10 -ный соляной кислотой до рН 1,8. Выпавший при охлаждении осадок отфильтровывают, промывают водой, спиртом, высушивают в вакууме при 40 - 45 С, Получают около 3 г (58 - 60%) аденозин-монофосфата; содержание основного вещества 98,5 - 100%, примеси исходного нуклеозида и изомерных нуклеозид моно- и дифосфатов отсутствуют (хроматографический и электрофоретический контроль); примесь РО 4" и С 1-ионов не превышает 0,1 о/оП р и м е р 2. К раствору 1,25 г дифенилфосфорной кислоты в 10 мл диоксана прибавляют 1,03 г морфолидофосфодихлорида и 0,7 мл 2,6 лутидина. Через 15 мин добавляют 1,3 г г-толилборного эфира аденозина (получен из 1,04 г аденозина и 0,54 г п-толилборной кислоты аналогично эфиру фенилборной кислоты;5 при выделении в чистом виде выход составил91%) и оставляют при перемешивании и 18 - 20 С на 48 час (контроль окончания реакции хроматографический). Обработка продукта реакции аналогична примеру 1. Выход адено зин-монофосфата составляет 55 . Содержание основного вещества 98,5% Формула изобретенияСпособ получения рибонуклеозид-моно фосфатов фосфорилированием соответствующих рибонуклеозидов с предварительной защитой гидроксильных групп и последующим выделением целевого продукта известным способом, отличающийся тем, что, с целью 20 упрощения процесса, рибонуклеозиды обрабатывают арилборной кислотой в полярных растворителях, например диоксане, пиридине, или диметилформамиде, после чего полученные арилборные эфиры подвергают фосфорилиро ванию с последующим удалением защитнойгруппы обработкой водой.