Способ электрофоретического определения гликозаминогликанов

Союз Советскил Социалистицескио Республик(5) М. Кл. С гьМ 331 единением заявкиГосударственный комнтет Совета Мнннстроо СССР оо делам нэобретеннй н отнрвпнй) Дата опубликования от Авторыизобретения ячкова, Г аркина, Д, Г. Чукаева и Е. И, Зори(54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФО ЕЛЕНИЯ ГЛ 1 КОЗАМИНОГЛИКАНОВ ЕСКОГО Изобретение относится к медицине, аименно к способам анализа гликоэаминогликанов мочи для проведения дифференциашной диагностики,Известен способ анализа гликозаминогли-канов путем электрофоретического разделения в столбиках69 ного полиакриламйдного геля с использованием в качестве гелеобразуюшего и электродного буферов фосфатно-формиатных буферов с последуюшимокрашиванием фракций гликозаминогликановтолуидиновым синим. Этот способ позволяетудовлетворительно расфракционировать и идентифицировать только чистые препараты гликоэаминогликанов (ГАГ). Однако таким способом (кнельзя с большой точностью расфракционировать и идентифицировать гликозаминогликаны,например нативной мочи, без предварительного выделения их в чистом виде,С целью анализа гликозаминогликанов (беэ предварительного выделения их в чистом.виде, используют 5%-ный полиакриламидныйгель, в качестве гелеобразуюшего и электродного буферов используют концентрирован-.ный трис-солянокислый и трис-глициновый 25 буферы, а для окрашив ный раствор альцианов уксусной кислоте.Анализ ГАГ мочи пр метода электрофореза амидного геля.Состав гелевого ра акций - 1%- .го в 3% но го син помощьюах полиакриловод ят , столб Мономер ( акриламидленбисакрнпамид, 7дистиллированной воТрис-ооляный буфврнь(48 мл соляной кисл1 Н + трис 36,6 г вдистиллированной водВода дистиллированн 28 г; мет35 г в 100ды,) й раствор оты100ы) 1 л,8 ,0 ммолия (О ПерсульфаТемед 00 120 мм. рмостаысота гелевого столб 1 олимеризацяю геляпри 32-34 С в течИсследуемый образемл: .(5-10 гамм едят в20-25 доличе( 1 е и 1 ге ликано 0,3 ликозамппо явители Институт педиатрии и детской хирургии и Специальное конструкторское бюро физической аппаратурыСоставитель Г,ГоловинаА Бер 1 е" ред И,Карандашова Корректор В,Б,та изд. и Ч 1 "г Заказ 4915 1111 ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, 113035, Раушская наб., 4 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 наносят на поверхность столбика геля, а сверху наслаивается тряс-глициновый буферный раствор с ионной силой 0,025 рН 8,3. Этот же буферный раствор используют для заливки электродных кювет, 6Электрофореэ проводят при силе тока 0,5 мА на трубку в течение 3 час, затем 2 час при токе 2 мА иа трубку.По окончании процесса электрофореза столбикя геля извлекают из.трубочек и ок- Щ рааивают 1 Ъ-ным раствором альцианового синего в 3%-ной уксусной кислоте в течение 30 мин,Отмывку геля от избытка красителя производят погружением столбика в 3%-ньтй 15 раствор уксусной кислоты и периодической сменой етого раствора.При применении такогоспособа сокращается время електрофореза благодаря использованию геля, обладающего крупнопористой Ж структурой; анализу подвергается нативная моча,и имеющиеся в ней ниэкомолекулярные вещества не меша 1 от делению на фракции, таккак они отдиализовываются в геле; хорошая разрешающая способность и воспроизводимостьаб гметода обеспечиваются обоснованным выбором процентного содериения и состава гелевого раствора: одновременный анализ нескольких проб обеспечивается тем, что каждый столб геля находится в идентичных условиях и дает совершенно точный результат, так как влияние на него, искажающее рэзультат, исключается. Предмет изобретения; Спбсоб электрофоретического определения гликозаминогликанов путем електрофоретического разделения их В столбиках полиакриламидьто геля с использованием гелеобразуюшего и алектродного буферов я окрашивания фракций, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что, с целью анализа гликозамвногликанов без предварительного выделе ния их в чистом виде, разделение ведут 5 Ъ-ньтм полиахриламидным гелем с использованием концентрированного трис-солянокислого и трио-глицинового буферов, а окрашивают фракции 1%-ньтм раствором альцианового синего в 3%-ной уксусной кислоте. Ти рати 1029Подписное