Способ очистки сыворотки

н 1) 477580 Союз Советских Социалистических РеспубликК ПАТЕНТУ 61) Зависим 22) Заявлено от патент; 121 500 5) 9.09.67 (21) 1186878/28-13 05.11.66 (31) В 897041 Ча/30 х 5,07.75. Бюллетень Юв 26 сударствеииый комите 32) Приорит 33) ФРГОпубликовано света Министров СССРо делам иэобретеиийи открытийи опубликования описания 16.10.75 72) Автор изобретени Иностранец Вольфганг Штефан71) Заявитель Иностранная фирма Биотест-Серум Институт ГмбХ4) СПОСОБ ОЧИСТКИ СЫВОРОТК Изобретение относится к микробиологии, Известен способ стерилизации сывороток фильтрацией и ультрафиолетовым облучением. Однако известный способ не обеспечивает необходимой чистоты препарата.Для повышения чистоты препарата сыворотку соединяют с коллоидной кремниевой кислотой в соотношении 250 - 500 мг на 1 г белка при рН 6,5 - 8,0.П р и м е р 1. В бутылку (1 л) наливают 20 г коллоидной кремниевой кислоты и 200 г стеклянных бус (диаметр 0,4 см), закрывают марлей и 2 ч при 180 С стерилизуют горячим воздухом, Подлежащую обработке сыворотку (рН 7,5) вводят при стерильных условиях. После закрытия бутылку в течение 4 ч вращают со скоростью 40 - 50 об/мин через голову. Эффективность адсорбинования зависит в значительной мере от скорости вращения, Потом нагревают 4 ч при 45 С в водяной бане без движения или качания и после охлаждения центрифугируют в течение 30 мин при 5000 об/мин. После ультрафиолетового облучения в аппаратуре типа Дилль стерильно фильтруют. После четырех недель хранения при +5 С можно отфильтровать от случайно образовавшегося незначительного осадка.Осадок кремниевой кислоты можно переработать следующим образом: ооъемный осадок замораживают прн - 20 С, оттаивают при комнатной температуре и центрифугируют 15 мин при 5000 об/мин, Остаток, который бумажно- и иммунэлектрофоретически практи чески имеет тот же самый состав, как и главное количество адсорбнрованной сыворотки или плазмы, после ультрафиолетового облучения стерильно фильтруют и после четырех- недельного хранения при 5 С дополнительно 10 фильтруют.Полученные сыворотки как остро, так ихронически токсически переносимы и свободны от пирогена.П р и м е р 2. 1 л человеческой сыворотки 15 (физиологическое значение рН 7,5) с 20 г стерилизованной горячим воздухом колл о иди ой кремниевой кислоты хорошо размешивают в течение 4 ч при 45 С, после охлаждения центрифугируют 30 мин при 5000 об/мин, потом 20 подвергают ультрафиолетовому облучению истерильно фильтруют, После четырехнедельного хранения при 5 С отфильтровывают от случайно образовавшегося незначительного осадка.25 Пример 3. 1 л человеческой АСД-плазмы устанавливают на 5,5% протеина и при значении рН 6,5 хорошо смешивают с 30 г стерилизованной горячим воздухом коллоидной кремниевой кислоты 4 ч при 45 С, центрифу477580 Предмет изобретения Составитель В. Остапчук Техред 3, ТараненкоКорректор Н, Учакина Редактор Л, Струве Заказ 2422/16 Изд. Хо 1595 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного, комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж.35, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 гируют, облучают ультрафиолетовыми лу ими и стерильно фильтруют. После четырехнедельного хранения при 5 С отфильтровывают от случайно образовавшегося незначительного осадка.Пр и мер 4. 1 л человеческой АСД-сыворотки устанавливают па 5,5% протеина и призначении рН 6,5 хорошо смешивают с коллоидной кремниевой кислотой 4 ч при комнатнойтемпературе и затем 4 ч нагревают при 45 С.После охлаждения центрифугируют 30 минпри 5000 об/мин, облучают ультрафиолетовыми лучами и стерильно фильтруют, После четырехчасового хранения при 5 С отфильтровывают от случайно образовавшегося осадка,Пример 5. 1 л цитратной плазмы (протеин: 5,0%, рН 7,5) размешивают с 20 г аэрозила 380 при 45 С в течение 4 ч, Центрифугпруют в течение 20 мин при 5000 об/мин и сливают верхнюю фазу,П р и м е р 6. 1 л плазмы (протеин: 7,0, рН7,5) размешивают с 20 г аэрозпла 380 в течение 4 ч при 45 С. Центрифугируют в течение 20 мин при 5000 об/мин, сливают верхнююфазу и стерильно фильтруют через фильтр типа Зейтц-ЕКЯ. Затем облучают адсорбированную сыворотку ультрафиолетовыми лучами.Пример 7. 1 л человеческой сывороткипри значении рН 7 хорошо размешивают с20 г стерилизованной горячим воздухом коллоидной кремниевой кислоты в течение 3 чпри 30 С и после охлаждения центрифугируютв течение 30 мин при 5000 об/мин, облучаютультрафиолетовыми лучами и фильтруют через фильтр из подходящего материала и ссоответствующим размером пор. По истечениичетырехнедельного хранения при 5 С отфильтровывают случайно образовавшийся малыйосадок.,П р и м е р 8. 1 л человеческой сывороткипри значении рН 7 хорошо размешивают с20 г стерилизированной горячим воздухомколлоидной кремниевой кислоты в течение 4 ч при 15 С и после охлаждения цептрифугируютв течение 30 мин при 6000 об/мин, облучаютультрафиолетовыми лучами и фильтруют через фильтровые слои, содержащие асбест, не 5 проницаемый для бактерий, и с подходящимразмером,пор. По истечении четырехпедельного хранения при 5 С отфильтровывают случайно образовавшийся малый осадок.П р и м е р 9. Способ, приведенный в приме 10 ре 8, повторяется при 5 С, причем размешивание продолжают 6 ч.Употребляемая коллоидная кремниевая кислота имеет следующие свойства:Насыпной вес 20 в 1 (предпочтительно15 40 - 60) г/лВеличина частиц 3 - 60 (предпочтительно3 - 15) ммк.Удельная поверхность 100 в 5 (предпочтительно 340 - 420),м/г,20 Коллоидную кремниевую кислоту смешивают с сывороткой, посредством вращения адсорбционных сосудов со скоростью 10 - 50(предпочтительно 30) об/мин; посредствомразмешивания при 10 - 50 (предпочтительно25 30) об/мин.Подходящими вставными фильтрами являются, например, целлюлозно-асбестовые фильтры с размерами пор 0,8 - 8 (предпочтительно0,9 - 1,2) мк при фильтрационном давлении от30 0,5 до 4 атмосфер. Кроме того, применяют .мембранные фильтры с размерами пор от 0,05до 0,5 (предпочтительно 0,2) мк при фильтрационном давлении 1 - 10 (предпочтительно 5)атмосфер,35 Способ очистки сыворотки путем обработкисорбентом, фильтрации и ультрафиолетового 40 облучения, отличающийся тем, что, сцелью повышения чистоты препарата, сыворотку соединяют с коллоидной кремниевой кислотой в соотношении 250 - 500 мг на 1 г белка при рН 6,5 - 8,0.